血红蛋白电泳的意义和判断高级PPT学习教案

1、会计学12第1页/共95页3 Normal hemoglobins, contain alpha, beta, delta, and gamma globin chains.第2页/共95页第3页/共95页Hb A: a2b2Hb F: a2g2Hb A2:a2d2 +-琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 Hydrasys (Sebia)碱性缓冲液碱性缓冲液成人成人新生儿新生儿第4页/共95页第5页/共95页正常基因异常基因第6页/共95页第7页/共95页Thalassemias第8页/共95页常见与地中海区域: 意大利, 西班牙,希腊, 近东地区, 非洲北部.同样常见于东南亚 : 泰国,印度, 越南,中国

2、, 印尼.o 临床症状* Beta 地贫重症型 - 严重贫血 (需要长期输血治疗)* Beta 地贫中间型* Beta 地贫轻微型 - 无临床症状Beta 地中海贫血o 常见区域bo 没有Beta链合成b+ 合成能力下降第9页/共95页Alpha 地中海贫血o 临床症状: 根据Alpha基因的表达状态, 有4个不同程度的Alpha地贫症状* 1 个基因表达沉默: 静止型 (非常难检测到, 在出生会测到Hb Barts 1-2% )* 2 个基因表达沉默: 轻型alpha地贫,在出生会测到Barts 2-10%* 3 个基因表达沉默: 血红蛋白Hb H病, 出生时出现2-30% Barts, 儿

3、童-成人出现 10-15% Hb H* 4 个基因表达沉默: Hb Barts胎儿水肿综合征 (死胎) o常见区域 常见与远东地区,非洲和地中海区国家第10页/共95页其他特征其他特征Hb HHb A2Hb F贫血贫血小红细胞小红细胞靶细胞靶细胞异常异常出生时少量出生时少量的的 (2%) Hb Barts0正常正常000一条链缺失出身时出身时Hb Barts (5%)0正常或减少正常0002条链缺失不稳定血红不稳定血红蛋白溶血性蛋白溶血性贫血贫血 (Hb H)10-15%减少也许增加轻微的到严重的+3条链缺失胎儿水肿综胎儿水肿综合症合症 (hydrops fetalis)00100 % Hb

4、Barts严重的-4条链缺失第11页/共95页基因型基因型诊断诊断血常规血常规临床症状临床症状检测结果检测结果aa/aaaa/aa无Hb A : NHbA2 : N (2-3.5%)-a/aa-a/aaa-Thalassaemia 2 杂合体(静止型)轻微小红细胞症MCV : 75-80fLMCH: 20-24无Hb A and HbA2: NHb Barts 0-3% at birthConfirmation by molecular biology-a/-a-a/-aa-Thalassaemia 2 纯合体小红细胞症血红蛋白减少Hb: 11-12 g/dL无明显临床症状Hb A and H

5、bA2: NHb Barts 2-8% at birth- -/aa- -/aaa-Thalassaemia 1 杂合体MCV: 65-75 MCH: 20-24需要分析序列分析或DNA序列分析 - -/-a- -/-aHbH小红细胞症血红蛋白减少Hb: 8-11 g/dLMCV : 55-65 MCH: 20-24出现溶血脾脏肿大HbA2 N or Hb Barts 5%Hb H 10-20%- -/- - -/- -a-Thalassaemia 1 纯合体(死胎)严重贫血 水肿胎Hb: 8-11 g/dLMCV 100-110 MCH 无法存活死胎Absence of HbA and Hb

6、FHb Barts 80-100%Hb Portland 5%第12页/共95页变异体出现在 6 GAG (谷氨酸) GTG (缬氨酸)NSSASNHbSN NHbS ASNHbAHbSN NSSHbAHbSChromosomes 16a2a2a1a1a2a2a1a1HomozygoteChromosomes 11Htrozygoted db bd db bAg gAg gGg gGg gd db bd db bAg gAg gGg gGg gChromosomes 16a2a2a1a1a2a2a1a1HomozygoteChromosomes 11Heterozygoted db bd db

7、 bAg gAg gGg gGg gd db bd db bAg gAg gGg gGg g第13页/共95页 变异体位置:AA 6: GAG (谷氨酸) AAG (Lys)HbA Heterozygote ACHbAHbCHbASC Compound heterozygotyHbAHbCHbSHtrozygote compositeACSCChromosomes 16a2a2a1a1a2a2a1a1HomozygoteChromosomes 11Htrozygoted db bd db bAg gAg gGg gGg gd db bd db bAg gAg gGg gGg gChromoso

8、mes 16a2a2a1a1a2a2a1a1SC heterozygote compoundChromosomes 11Heterozygoted db bd db bAg gAg gGg gGg gd db bd db bAg gAg gGg gGg g第14页/共95页特点: 变异体位置 b121 Glu (谷氨酸,负电荷) Gln (谷氨酰胺, 不带电荷) (D- Los Angeles = D-Punjab)(6 different Hb D according to the position of the mutation)碱性缓冲液中: 电荷下降 M电泳速度变度变慢电泳速度变度变慢

9、,靠近靠近Hb S临床症状:基因杂合体:Hb A fraction: 65 70 %Hb D fraction: 30 35 %基因纯合体:轻微贫血Hb A fraction: absenceHb D fraction: 100 %第15页/共95页特点: 变异位点 b26 Glu (谷氨酸,负电荷) Lys (赖氨酸,正电荷)碱性缓冲液: 总体带电荷下降 凝胶电泳中凝胶电泳中,出现在出现在HbC附近附近临床症状:杂合体:Hb A fraction: 65 70 %Hb E fraction: 30 35 %基因纯合体:轻微贫血Hb A fraction: absenceHb E fracti

10、on: 100 %第16页/共95页第17页/共95页第18页/共95页20第19页/共95页21第20页/共95页第21页/共95页第22页/共95页毛细管电泳法原理毛细管电泳法原理 Peltier温控桥Anode +Cathode -检测器氘光灯第23页/共95页第24页/共95页第25页/共95页第26页/共95页Capillarys Minicap 血红蛋白条带识别表第27页/共95页第28页/共95页30条带结果可录为条带结果可录为QC第29页/共95页31第30页/共95页32异常区带显示为灰色第31页/共95页HbEHbSHbH第32页/共95页34Hb A = a2b2Hb S

11、 = a2bS2Hb A2 = a2d2第33页/共95页第34页/共95页36第35页/共95页37A = 84.1 %F = 1.5%A2= 5.5%第36页/共95页38AlkAcidFSCA2CSF-thalassemia- 轻型轻型A2AAAACPCPA=93.4%, F=1.1%, A2=5.5%第37页/共95页Hb A 92.5%Hb A2 4.9%Hb FHb AHb A267 Y female from Tunisia, Hgb 9.1, hematocrit 28, MCV 62小红细胞症小红细胞症; beta thalassemia轻型轻型第38页/共95页Hb H 4

12、%Hb A 94.7%Hb A2 1.3%Hb AHb A2Hb H严重小红细胞症严重小红细胞症; 血红蛋白血红蛋白H病，需要基因筛查病，需要基因筛查第39页/共95页41 H Barts 第40页/共95页42A2= 6.1%S = 82.8 %第41页/共95页43AlkAcidFSCSA2 + FCSFS Hgb F/S, A2=4.6% + beta thalassemia minorA2AFACPCP第42页/共95页44Co-migration with A2A= 62.1 %A2 = 31.7%*第43页/共95页45第44页/共95页Hb A 95%Hb F 2.1%Hb A2

13、 2.9%Normal pattern, Hb F slightly increased (pregnancy)第45页/共95页Hb F 49.5%Hb S 25.9%Hb A2 1.8%Hb C 22.8%Hb FHb SHb A2Hb CSC compound heterozygoty第46页/共95页Hb A 54.7%Hb X 41.7%Hb A2 3.6%Hb AHb A2Hb XNormal hemogram; compatible with heterozygote A/D;To be identified by genotyping第47页/共95页Hb A 51.8%Hb

14、A2 2.9%Hb C 35.9%Hb AHb A2Hb CDiabetic patient, 61 Y, Hgb 11.6, hematocrit 34.8, MCV 85Slight anemia; compatible with heterozygote A/CTo be identified by genotyping 第48页/共95页Adopted child, 4 Y, originated from Haiti, Hgb 10.9, Hb A 97.5%Hb A2 1.4%Hb X 1.1%Hb AHb A2Hb XSlight anemia; heterozygous Del

15、ta mutation, asymptomatic第49页/共95页Alpha chain mutation; genotyping confirmation:Hb Winnipeg a a 75 Asp TyrHb A- WiHb A2-WiHb AHb A2第50页/共95页Hb A 90.3%Hb F 3.8%Hb A2 5.9%Hb AHb FHb A2Hb A 64%Hb S 33.1%Hb A2 2.9%Hb AHb SHb A2Hb A 2.2%Hb F 67.3%Hb S 29.1%Hb A2 1.4%Hb AHb FHb SHb A2Father: Beta thalasse

16、mia minor Mother: Heterozygote ASBaby 2 months old: Association S - beta thalassemia第51页/共95页Hb A2Hb AHb FHb LeporeAFSC control overlaying第52页/共95页基因杂合体:Hb Lepore fraction: 5 15 %Clinical signs of minor b thalassemia基因纯合体:Hb Lepore fraction: about 30 %Clinical signs of homozygous b thalassemia常见区域:L

17、epore (- Boston Washington): 常见于意大利人群; 同样常见于在罗马尼亚, 澳大利亚和墨西哥人群.特点:第53页/共95页Hb HasharonHb AHb A2Hb FHb HasharonHb Ha-A2第54页/共95页Hb A2+ O-ArabHb FHb A第55页/共95页第56页/共95页第57页/共95页第58页/共95页取血板BSD600 全自动打孔器 全自动溶血, 样品稀释和检测溶血剂样品条码识别：取血板条码样品稀释杯条码使用纯净水洗脱样品第59页/共95页第60页/共95页使用标准取血板, 在室温下进行干燥.干燥的取血板可在 2-8C下,保存1个

18、月.新生儿血红蛋白检测的样品要求第61页/共95页正常血样 :with Hb F and Hb A(+ acetylated Hb F)异常血样第62页/共95页通过样品 ID, 试剂杯和全自动打孔器的数据记录完成数据交换异常样品自动显示第63页/共95页电泳图谱说明 : * 检测到条带的位置, 图谱会自动定位* 鼠标经过的区带位置, 会显示出该区带的所有可能出现的异常血红蛋白名称. (N1 to N13). 第64页/共95页新生儿血红蛋白检测条带名称识别表N 13 : Hb BartsN 12 : /N 11 : Hb Hope, Gamma chain variants, denatur

19、ed Hb AN 10 : Hb AN 9 : Denatured Hb FN 8 : /N 7 : Hb FN 6 : /N 5 : Hb D-Punjab, Hb G-Philadelphia, Hb Korle-BuN 4 : Hb S, acetylated gamma chain variantsN 3 : Hb E, Hb F-Ouled Rabah, gamma chain variants, MethemoglobinN 2 : Hb A2, Hb O-Arab, Hb F-Ouled Rabah, gamma chain variantsN 1 : Hb C第65页/共95页

20、正常血样Hb FHb ABirth: 19/01/06Sample collection: 24/01/06Term : 39 w.Weight : 3445 g第66页/共95页Birth: 29/01/06Sample collection: 01/02/06Term : 38 w.Weight : 3100 g第67页/共95页Birth: 05/01/06Sample collection: 08/01/06Term : 37 w.Weight : 3490 gHb SHb FDenatured Hb F第68页/共95页Denatured Hb FHb FHb SBirth: 20/

21、02/06Sample collection: 23/02/06Term : 34 w.Weight : 1300 g 第69页/共95页Denatured Hb FHb FHb SHb CBirth: 30/01/06Sample collection: 02/02/06Term : 40 w.Weight : 3900 g第70页/共95页Hb AHb FHb SBirth: 16/12/06Sample collection: 19/12/06Term : 36 w.Weight : 2780g第71页/共95页Hb FHb CDenatured Hb FBirth: 20/12/05S

22、ample collection: 24/12/05Term: 39 w.Weight: 3160 g第72页/共95页Birth: 18/12/06Sample collection: 21/12/06Term: 40 w.Weight: 3035 g第73页/共95页Birth: 17/10/05Sample collection: 20/10/05Term: 30 w.Weight: 2330 g 第74页/共95页Birth: 29/01/06Sample collection: 31/01/06Term: 37 w.Weight: 3280 g第75页/共95页Hb EHb FDenatured Hb FBirth: 10/11/06Sample collection: 13/11/06Term: 40 w.Weight: ?第76页/共95页Birth: 10/03/06Sample collection: 13/03/06Term: 39 w.Weight: 3420 g第77页/共95页Birth: 21/07/05Sample collection: 24/07/05Term