南医大医学微生物学实验报告总结优化版

1、13脓汁和粪便标本中病原菌的检测20xx级xx专业 （x）班 学号XX 姓名xx 第x室 第x组 组员：xx 指导老师：xx摘要脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。 引言 常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，

2、芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。1实验材料1.1器材 打火机 油性笔 酒精灯接种环 接种针污物盘 普通冰柜 隔水式电热

3、恒温培养箱 奥林巴斯 CX21型 生物显微镜 电炉 试管（带棉塞） 称量纸 药勺 牛皮纸 硫酸纸 橡皮筋 尺子 锥形瓶 高压蒸汽灭菌器 镊子bo片 吸水纸 拭镜纸1.2 试剂药品 普通营养琼脂培养基 蒸馏水 脓汁标本 粪便标本 石蜡油 生理盐水 结晶紫 卢戈碘液 95%乙醇 稀释复红 葡萄糖微量发酵管（2支） 乳糖微量发酵管（2支） 青霉素抗菌素纸片 链霉素抗菌素纸片 庆大霉素抗菌素纸片 血浆 福氏志贺菌诊断血清2 实验方法与步骤实验的总流程培养基制备 细菌的分离培养 细菌纯培养 细菌的形态学检查 细菌的生化试验 细菌的血清学试验、结果分析2.1培养基制备干粉培养基蒸馏水加热溶化分装集中放在试

4、管筐里罩上硫酸纸、牛皮纸 用橡皮筋扎好 放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）灭菌（1）平板培养基：倾注平板10ml琼脂完全凝固后，平板倒放4冰箱保存备用。（2）斜面培养基：培养基趁热斜放琼脂凝固以后，4冰箱保存备用。贴上标签后灭菌使用。2.2空气与人体体表细菌学检查2.2.1空气的细菌学检查 2.2.1.1实验方法自然沉降法:根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），可了解空气的污染情况。2.2.11实验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫

5、生间或任选地点）将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边平板暴露于空气中15分钟平板倒扣盖上作标记37温箱培养24小时观察结果。2.2.2人体体表的细菌学检查 甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 图12.3 细菌的分离培养2.3.1实验方法平板划线法：借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。2.3.2实验步骤接种环烧灼灭菌分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，烧掉

6、接种环上多余的标本冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）接种环烧灼灭菌将平板倒置37培养1824h观察结果 。 图22.4细菌的群体生长特性观察和纯化培养2.4.1实验方法斜面接种法：是一种从已经生长好的菌种中挑取少量菌种移植到另一个斜面培养基的饭方法。该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端。2.4.2实验步骤接种环烧灼灭菌挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养做

7、好标记接种环烧灼灭菌斜面培养基置于37培养过夜保存备用2.5细菌的个体形态特征的观察2.5.1实验方法:革兰氏染色, 肉汤接种法2.5.2实验步骤革兰氏染色：取洁净载玻片用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合结晶紫 初染1分钟水洗卢戈碘液媒染1分钟水洗95乙醇脱色约20秒钟水洗稀释品红复染1分钟水洗吸干,镜检。2.5.3肉汤接种法:接种环烧灼灭菌分别在斜面培养物中挑取菌苔少许立即移入肉汤培养基管中在接近液面的管壁上轻轻研磨沾取少量肉汤调和混匀试管口通过火焰2-3次灭菌塞好棉塞35培养46小时2.6 药敏试验2

8、.6.1实验方法纸片扩散法: 将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后不断向周围扩散，形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸片周围的生长受到抑制，而形成没有细菌生长的抑菌圈2.6.2实验步骤接种环烧灼灭菌分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布接种环烧灼灭菌 标记:青、链、庆 镊子火焰消毒贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片 按压镊子消毒倒置37培养1824小时 观察结果2.7 血浆凝固酶试验2.7.1实验方法：玻片法2.7.2实验步骤取干净bo片一张在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴接种环烧灼灭菌冷却分别用接种环取之前实验所得到

9、的白色和黄色菌苔(23个菌落的菌量)与血浆研磨混合边混匀边观察结果接种环烧灼灭菌稍等片刻，观察结果2.8 糖发酵试验接种针烧灼灭菌用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内接种环烧灼灭菌将微量管平放在平板内37培养过夜后观察结果。2.9 动力试验2.9.1实验方法：半固体接种法2.9.1实验步骤接种针烧灼灭菌分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌从半固体培养基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底循原来的路线退出接种针试管口迅速通过火焰2-3次灭菌塞好棉塞烧灼灭菌接种针37培养24小时观察结果2.10血清学实验取洁净的载玻片一张将磨面

10、近端设为对照区滴加生理盐水15ul远端设为试验区滴加福氏志贺菌诊断血清15ul接种环烧灼灭菌用接种环分别取粉红色菌苔研磨于盐水或血清内，混合均匀接种环烧灼灭菌载玻片来回倾侧观察结果3结果3.1细菌分离培养结果粪便标本平板脓汁标本平板 细菌分离培养结果表标本脓汁粪便菌落颜色黄色白色紫黑色淡粉红色形态特征圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、不透明，菌落直径2mm左右具有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径23mm半透明，直径12mm结果典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，黄色的是金黄色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌从形态上不能鉴别是什么细菌3.2细菌的个体形态特征的观察 G-杆菌 G+球菌 细菌的个体形态特

11、征表菌落来源脓汁标本粪便标本菌落颜色黄色白色紫黑色淡粉红色油镜下特征均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状。均为G-杆菌，散在排列 3.3药敏试验结果粉红色菌落 紫黑色菌落 白色菌落 黄色菌落 药敏试验结果菌落黄色白色紫黑色粉红色青霉素+-链霉素+庆大霉素+备注：“+”为敏感，“-”为耐药分析讨论：从种种的现象与结果可知，黄色的是G+金黄色葡萄球菌，白色的是白色葡萄球菌，紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。其中，四种菌对链霉素和庆大霉素都敏感，而金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素敏感，大肠埃希菌和痢疾志贺菌对青霉素表现为耐药。3.4血浆凝固酶实验结果黄色（左）与白色（右）两种细菌血浆凝

12、固酶实验图 血浆凝固实验表格菌落黄色菌落白色菌落现象血浆产生颗粒性物质不出现凝集反应分析讨论：观察到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒性物质，说明其为凝固酶阳性，是致病菌；白色菌落细菌不出现凝集反应，说明其为凝固酶阴性，不是致病菌3.5糖发酵实验和动力试验结果糖发酵实验图 动力试验图糖发酵实验和动力试验表格菌落葡萄糖发酵现象乳糖发酵现象动力试验现象紫黑色黄色，分解糖，产酸又产气黄色，分解糖，产酸又产气扩散生长，培养基呈扩散云雾混沌状态粉红色黄色，分解糖，产酸不产气无明显颜色变化，不分解糖沿穿刺线生长，穿刺线边缘整齐，周围培养基清澈透明分析讨论：半固体动力试验表明紫黑色菌落菌种半固体动力试验结果阳性

13、，有鞭毛；粉红色菌落菌种半固体动力试验结果阴性，无鞭毛。3.6血清学实验 粉红色菌落血清学实验图 实验记录表玻片凝集实验福氏志贺菌诊断血清生理盐水现象出现片状凝集现象Bu 凝集分析讨论：通过血清学实验，粉红色菌落菌种与福氏志贺菌诊断血清发生凝集反应，确定其为福氏志贺菌。4.综合结果讨论4.1对脓汁中细菌的分析讨论用普通平板，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落；在显微镜下观察时，这两种细菌均为G球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌结合菌落的颜色，可以初步断定，这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌通过血浆凝固酶试验，观察到金黄色葡萄球菌能使血浆产生颗粒性物质，白色葡萄球菌则没有反应，说明了金黄色葡萄球菌是致病菌。最后进行的是药敏试验，从培养基上可以观察到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同，其中青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。球菌是致病菌。4.2对粪便中细菌的分析讨论用伊红美蓝平板分离菌落时，可以从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透明菌落；在显微镜下观察时，这两种 菌均为G杆菌，排列不规则，从形态上不能鉴别是什么细菌；球菌是致病菌。经糖发酵试验，可以观察到，紫黑色的细菌使能使葡萄糖和乳糖的试管变色和产生气体，粉红色的细菌只能使葡萄糖的试管变色而无气体，对乳糖无反应；球菌是致病菌。经半固体动力