食品饲料中氨基酸的测定王金娥ppt课件

1、食品饲料中氨基酸的测定王金娥 目录目录一、氨基酸分析仪简介一、氨基酸分析仪简介 二、氨基酸二、氨基酸 三、氨基酸分析仪根本分析原理三、氨基酸分析仪根本分析原理 四、氨基酸分析仪法与四、氨基酸分析仪法与HPLCHPLC的比较的比较 五、样品的制备五、样品的制备 六、影响氨基酸分析的各种要素六、影响氨基酸分析的各种要素 七、运用七、运用日立氨基酸分析仪简介日立氨基酸分析仪简介一、氨基酸分析仪：一氨基酸分析仪的构成见图1)二氨基酸分析仪的流程图见图2)三特点日立氨基酸分析仪的构成、流程图及特点日立氨基酸分析仪的构成、流程图及特点 一氨基酸分析仪的构成 1、输液单元泵与管路 作用：保送缓冲液、反响液在

2、流路系统中流动。 2、进样单元自动进样器 作用：将样品在流动相的带动下送入仪器体系中。 3、分别单元离子交换柱、柱温箱 作用：主要是样品的分别、将混合的样品分别成单一组分。 4、反响单元反响柱、反响温度加热设备 作用：被分别的单一组分物质与反响液在反响单元反响、生成可检测物质。 5、检测单元分光光度计 作用：准确检测单一组分物质的电能信号mv). 6、程序控制、数据处置任务站作用：仪器的运转程序控制、检测结果的处置。 从图、外表看1自动进样器2泵1、泵2单元3电磁阀4除气5废液槽6检测器7氮气单元8柱温箱9过滤器10混合器11反响柱单元12试剂和清洗液13维护罩。左侧：电源开关。后部 通讯接口

3、、电源衔接器、氮气源衔接器。(二氨基酸分析仪流程图 见图2 三日立氨基酸分析仪特点氨基酸氨基酸 二、氨基酸 一氨基酸的定义 二氨基酸的分类 三氨基酸的化学性质 自然界中的氨基酸种类很多，但组成蛋白质的氨基酸只需20多种，从构造式上来看组成蛋白质的氨基酸除甘氨酸以外，都有一个不对称碳原子、即a-碳原子，a-碳原子有四个不同的取代基：COOH羧基、NH2氨基、H氢原子、和R基团，不同氨基酸的R基团不同。氨基酸的R基团又称为侧链，由于不同氨基酸的侧链不同它们的分子量、解离程度和化学反响、性能均不同。除甘氨酸外每种氨基酸都有L-构型、D-构型。蛋白质中的氨基酸都是L-型的，从外形 上看氨基酸是无色的结

4、晶物质，它们在水溶液中显中性、微酸性或微碱性。蛋白质成分中任何氨基酸均可用图中的通式来表示脯氨酸除外：见以下图一氨基酸的定义一氨基酸的定义 略略二氨基酸的分类 它的分类有两种： 1.按氨基酸具有的酸性和碱性基团的多少分类：2、按人体营养的需求又可分为必需氨基酸、半必需氨基酸及非必需氨基酸三氨基酸的化学性质 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与羧基的普通反响，如脂化、甲基化、乙酰化以及酸碱的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反响，如半胱氨酸的巯基SH)氨基酸的化学反响 与茚三酮反响：茚三酮与氨基酸一同加热，构成深兰紫色复合物, 最大吸收波长为570nm与与茚茚三三酮

5、酮反响反响氨基酸与水合茚三酮共同加热被氧化分解产氨基酸与水合茚三酮共同加热被氧化分解产 生生CO2CO2、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛，、氨和比氨基酸少一个碳原子的醛， 此时茚三酮被复原。在弱酸性溶液中，还此时茚三酮被复原。在弱酸性溶液中，还 原茚三酮与氨及另一分子茚三酮缩合成蓝原茚三酮与氨及另一分子茚三酮缩合成蓝 紫色化合物茚二酮胺紫色化合物茚二酮胺DYDADYDADYDADYDA在在570nm570nm 处有最大吸收。处有最大吸收。 脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反响生成黄色物脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反响生成黄色物 质，在质，在440nm440nm处吸收峰最大。处吸收峰最大。 除氨基酸以外，如除

6、氨基酸以外，如NH2NH2肽类也可与茚三酮反肽类也可与茚三酮反响响 生成有色物质这种反响机理现运用于我们生成有色物质这种反响机理现运用于我们 运用的氨基酸分析仪之中。运用的氨基酸分析仪之中。氨基酸分析仪分析原理氨基酸分析仪分析原理三、氨基酸分析仪根本分析原理 一离子交换柱 二离子交换树脂 三离子交换原理 四氨基酸分析仪洗脱过程氨基酸分析仪与氨基酸分析仪与HPLC法的比较法的比较四、氨基酸分析仪与HPLC法的比较 一OPA法邻苯二甲醛 二PITC法 三DCL法 四2-4二硝基氟苯法 氨基酸分析氨基酸分析仪仪与与HPLC常常规规比比较较样品的制备样品的制备五、样品的制备 一蛋白质的水解 二游离氨基

7、酸样品的制备 三生理体液样品的前处置一蛋白质的水解： 用于全氨基酸测定的样品，凡是以蛋白质方式存在的都要进展水解处置，水解方法有三种： 1、酸水解法：规范水解法，是普遍采用的水解方法，此方法的特点是水解彻底，但色氨酸遭破坏。6N HCL、110真空水解24小时 优点：HCL本身加热可以蒸发除掉。缺陷：溶液显黒褐色、与含醛基化合物作用的结果。 2、碱水解法：用NaOH(LiOH、Ba(OH)2)作为水解剂，色氨酸不被破坏，但有消旋作用，丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度的破坏。 优点：水解液清亮。缺陷：放出氨气和硫化氢.3、酶水解法：酶是有机催化剂，它不需求高温高压，而是在常温常压下即可催

8、化有机物质的合成与分解。特点是水解条件温暖，无需特殊设备，氨基酸不受破坏；产物中除氨基酸外尚有较多肽类；此方法主要用于消费水解蛋白及蛋白肽。缺陷：水解时间长、而且不易水解完全。 目前日本、欧洲和我国植物蛋白水解消费上采用的工艺均为酸水解法。二游离氨基酸样品的制备 游离氨基酸的样品在分析前必需进展磨碎、脱脂、提取、脱盐、去蛋白、脱色等处置。在进展分析前建议运用C18过滤柱处置一下为好。三生理体液样品的处置： 生理体液的样品首先要除去样品中的蛋白质，获得游离氨基酸。除去蛋白质化学方法为： 1、苦味酸法 用1%的苦味酸沉淀，然后过柱子除苦味酸，在把氨基酸从柱子上洗脱下来进展分析。2、三氯醋酸法 生物

9、碱沉淀剂医院临床生化、常用此类试剂沉淀血浆中的蛋白质。 3、乙醇沉淀法 当乙醇参与含蛋白质的水溶液中，可使蛋白质外表失去水膜，并增大颗粒间的引力，引起蛋白质沉淀。 4、磺基水杨酸法常用的方法影响氨基酸分析的各种要素影响氨基酸分析的各种要素六、影响氨基酸分析的各种要素 一样品中氨基酸浓度的影响 二缓冲液PH值、钠离子浓度的影响 三柱温的影响 四氨的影响 五氧存在的影响 六光源的影响钨灯 运用运用七、运用 一医学上的运用 二饲料上的运用 三农业、食品、饮料及其它氨基酸自动分析仪法测定食品饲料氨基氨基酸自动分析仪法测定食品饲料氨基酸含量酸含量 1. 原理 食品饲料蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨

10、基酸分析仪的离子交换柱分别后，与茚三酮溶液产生颜色反响，再经过分光光度计比色测定氨基酸含量。 2. 试剂3. 仪器4. 测定方法5. 结果计算酸水解原理与步骤酸水解原理与步骤氧化水解原理与步骤碱水解原理与步骤水解技术水解技术水解方式： 真空充N封管法 开放式回流水解法 培育管水解法培育管水解法培育管水解法氮吹仪氮吹仪水解液蒸干技术水解液蒸干技术冷井杜瓦瓶冷井杜瓦瓶-196液氮液氮氨基酸规范溶液谱图氨基酸规范溶液谱图Minutes0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.0mV0102030405060mV01020304050604.607 Asp5.267 Thr5.840 Ser6.467 Glu7.147 9.293 Gly9.873 Ala12.153 Cys12.573 Val13.687 Met14.367 15