《伯乐gm试验》ppt课件

1、伯乐伯乐gmgm实验实验李丹GM实验原理GM实验的临床价值GM实验假阳性的情况GM实验假阴性的情况GM实验的优势和局限其他样本的gm实验与其他厂家比较 GM实验检测的是半乳甘露聚糖glactomannan，GM，主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断； 半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁外表菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原； 本试剂盒采用ELISA夹心法，将EBA-2单克隆抗体包被于微孔内检测结合结合物为过氧化物酶衔接的抗体到已激活微孔板上的抗体。参与EDTA的样本经过热处置(去除免疫复合物和沉淀能够干扰实验的血清蛋白质，参与微孔板中。假设样

2、本中有半乳甘露聚糖抗原，那么构成单克隆抗体-半乳甘露聚糖-单克隆抗体过氧化物酶复合物。洗板去除没有结合的物质参与TMB,显蓝色，参与2M硫酸终止反响，酶标仪读数。1 伯乐GM实验的原理 严重粒细胞缺乏 免疫功能低下恶性肿瘤、血液病、尿毒症、艾滋病、器官移植、糖尿病 实体器官移植 入住ICU 血液肿瘤 骨髓移植 长期运用激素治疗 慢性阻塞性肺病易感染人群 无菌、无热源采血管，ep管，枪头，移液器 金属浴加热模块，离心机支持1.5ml ep管，支持450nm和620/630nm双波长的酶标仪，水浴锅必备耗材和仪器 曲霉细胞壁成分 菌丝在组织中生长释放 热稳定 可溶性:血清，纤支镜灌洗液，脑脊液 分

3、子量：根据来源不同从10000到50000不等，属于高分子化合物半乳甘露聚糖 ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专注性进展免疫反响的定性和定量检测方法。 ELISA分为夹心法、间接法和竞争法 夹心法常用于检测大分子抗原 间接法常用于检测抗体 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，普通用于检测小分子抗原Elisa简介 将具有专注性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 参与待测检体，检体中假设含有待测之抗原，那么其会与塑胶孔盘上的抗体进展专注性键结 洗去多余待测检体，参与另一种对抗原专注之一次抗体，与待测抗原进展键结 洗去多余未键结一次抗体，参与

4、带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结 洗去多余未键结二次抗体，参与酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果夹心法操作原理 将知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原 参与待测检体，检体中假设含有待测之一次抗体，那么其会与塑胶孔盘上的抗原进展专注性键结 洗去多余待测检体，参与带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结 洗去多余未键结二次抗体，参与酵素受质使酵素呈色间接法操作原理 将具有专注性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 参与待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进展专注性键结 参与带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进展专注性键结 洗去检体与带有酵素之抗原，参

5、与酵素受质使酵素呈色竞争法操作原理 GM可在患者临床病症出现前5-8d获得阳性结果 曲菌定植时极少释放入血，因此有助于鉴别侵袭与定植； GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度； 延续检测GM可作为治疗疗效的监测； 在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高； 参考值：I0.5为阳性。2 血清GM实验的临床价值 运用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉维酸； 高剂量运用激素 化疗的严重黏膜炎患者谷类食物中的GM抗原经过肠道入血 新生儿和儿童双歧杆菌定植、食用乳制品； 血液透析； 本身免疫性肝炎等； 食用能够含有GM的牛奶等高蛋白食物。 交叉反响真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组

6、织胞浆菌。3 GM实验假阳性的情况 释放入血循环中的曲霉GM并不继续存在而是会很快去除； 以前运用了抗真菌药物 1.三唑类降低GM程度 2.米卡芬净类升高GM程度 病情不严重； 非粒细胞缺乏的患者。 4 GM实验假阴性的情况 优势： 鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植； 早于临床病症和影像学异常5-8d； GM诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G实验； 血清中存在时间较短，可作为疗效监测。5 GM实验的优势和局限 局限： 阴性实验结果不能排除侵袭曲霉病的诊断。侵袭性曲霉病的高危病人，该当每周检测两次。 没有运用新生儿样本来评价曲霉菌抗原检测试剂盒的性能。 在慢性牙肿病CGD和Jobs综合征的患者中，检出率

7、减低 在侵袭性曲霉病人中，假设采取积极的抗真菌治疗，能够导致曲霉抗原检测试剂盒的灵敏度降低 其他属的真菌如孢拟青霉，青霉，白地酶和组织胞浆有EBA-2单克隆抗体反响性 等许多要素引起的假阳性和假阴性 R5/R4大于等于1.5，R3/R4小于等于0.4 两个R4之间差距不大于0.2结果判读G实验和GM实验的结合运用种属种属G G试验试验GMGM试验试验念珠菌属念珠菌属镰刀菌属镰刀菌属隐球菌属隐球菌属曲霉菌属曲霉菌属青霉青霉/ /拟青霉拟青霉接合菌纲接合菌纲同时测定同时测定G G实验和实验和GMGM实验有助于早期诊断侵袭性真菌感染！实验有助于早期诊断侵袭性真菌感染！ 纤支镜灌洗液肺泡灌洗液 诊断曲霉菌在肺部是定植还是侵袭性生长，关键在于其能否合成GM.假设痰液或肺泡灌洗液标本培育到曲霉菌 且GM实验检测结果为阳性，即可诊断为曲霉菌侵袭性感染 脑脊液 穿刺液6.其他样本的gm实验 相比天津喜诺操作简单 1.我们的板条是包被好抗体的 2.喜诺的抗体需求现配现用，而我们早就配好了 3.结果计算简单，不用制造线性回归曲线 我们用的夹心法适用于大分子，而其他厂家用的是竞争法是适用小分子