中药制剂分析皂苷挥发油

1、第三节第三节 三萜皂苷成分分析三萜皂苷成分分析三萜皂苷的结构特征三萜皂苷是由六个异戊二烯以头尾相接三萜皂苷是由六个异戊二烯以头尾相接或尾尾相接而成，一般由或尾尾相接而成，一般由30个碳原子组个碳原子组成。成。可分为可分为五环三萜与四环三萜两类。五环三萜与四环三萜两类。五环三萜五环三萜有齐墩果烷型（甘草次酸、柴有齐墩果烷型（甘草次酸、柴胡皂苷元、桔梗皂苷元）、胡皂苷元、桔梗皂苷元）、四环三萜四环三萜大多具有环戊烷骈多氢菲的基大多具有环戊烷骈多氢菲的基本母核本母核有达玛烷型（人参二醇、三醇。酸枣仁有达玛烷型（人参二醇、三醇。酸枣仁皂苷元）皂苷元）三萜皂苷大多无紫外吸收，三萜皂苷大多无紫外吸收，少数

2、例外，如甘草酸、远志皂苷。少数例外，如甘草酸、远志皂苷。 三萜皂苷分布：双子叶植物分布较普遍，三萜皂苷分布：双子叶植物分布较普遍，有五加科、伞形科、夹竹桃科、萝摩科、有五加科、伞形科、夹竹桃科、萝摩科、菊科等。菊科等。 单子叶植物较少，仅禾本科单子叶植物较少，仅禾本科 裸子植物、低等植物也较少含有裸子植物、低等植物也较少含有 常用的中药有：人参、三七、甘常用的中药有：人参、三七、甘草、地榆、酸枣仁、紫菀、桔梗、商陆草、地榆、酸枣仁、紫菀、桔梗、商陆等。等。皂苷的理化性质皂苷的理化性质 1 1、皂苷分子量较大，不易结晶，大多、皂苷分子量较大，不易结晶，大多为无色或乳白色无定型粉末，而皂苷元为无色

3、或乳白色无定型粉末，而皂苷元大多有完好的结晶，大多有完好的结晶，皂苷多数具有苦辛皂苷多数具有苦辛辣味，其粉末有强烈刺激性，大多具有辣味，其粉末有强烈刺激性，大多具有吸湿性。吸湿性。 2、大多数皂苷极性较大，易溶于水、大多数皂苷极性较大，易溶于水、热甲醇和乙醇，难溶于丙酮、乙醚，在热甲醇和乙醇，难溶于丙酮、乙醚，在含水丁醇中有较大溶解度，常作为皂苷含水丁醇中有较大溶解度，常作为皂苷提取溶剂。提取溶剂。皂苷类成分的定性分析皂苷类成分的定性分析 （一）泡沫反应（一）泡沫反应 （二）显色反应（二）显色反应（1）醋酐）醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应 (Libermann-Burchard反应反应):（2）三

4、氯醋酸反应）三氯醋酸反应 （Rosen-Heimer反应反应）（3）氯仿）氯仿-浓硫酸反应浓硫酸反应 （Salkowski反应反应）（4 4）冰醋酸）冰醋酸-乙酰氯反应乙酰氯反应(Tschugaf(Tschugaf反应反应) )（5 5）五氯化锑反应）五氯化锑反应 (Kahlenberg反应反应)（6 6）香草醛）香草醛-硫酸或高氯酸反应硫酸或高氯酸反应（三）薄层色谱法（三）薄层色谱法 1、 吸附剂的选择吸附剂的选择 皂苷：一般极性较大，用分配层析较好皂苷：一般极性较大，用分配层析较好 常用吸附剂有硅胶、氧化铝、硅藻土常用吸附剂有硅胶、氧化铝、硅藻土皂苷元：极性较小，吸附、分配薄层均可皂苷元：

5、极性较小，吸附、分配薄层均可 常用硅胶常用硅胶 在应用硅胶和氧化铝时，有时为了分离在应用硅胶和氧化铝时，有时为了分离的需要加入一定的硝酸银。这样可以将相的需要加入一定的硝酸银。这样可以将相似极性但在分子中带有不同数目双键或双似极性但在分子中带有不同数目双键或双键位置不同的化合物分开。键位置不同的化合物分开。2、展开剂的选择、展开剂的选择 （1） 化合物的分子结构与展开剂的极性化合物的分子结构与展开剂的极性选择展开剂要考虑到分子中羟基、羧基或选择展开剂要考虑到分子中羟基、羧基或其它极性基团的数目多少和有无，极性基其它极性基团的数目多少和有无，极性基团数目越少越不易被吸附剂吸附，团数目越少越不易被

6、吸附剂吸附，Rf值越值越大，因此在分离极性小的混合物时就不能大，因此在分离极性小的混合物时就不能用极性大的展开剂。用极性大的展开剂。 （2） 化合物的酸碱性化合物的酸碱性当化合物具有酸性或碱性时，使用中性当化合物具有酸性或碱性时，使用中性的溶剂系统往往产生拖尾或分离不好，的溶剂系统往往产生拖尾或分离不好，当化合物具有酸性时，在展开系统中加当化合物具有酸性时，在展开系统中加入少量酸就能得到很好的分离。入少量酸就能得到很好的分离。 （3） 展开剂中极性溶剂的量对展开剂中极性溶剂的量对Rf值的值的影响影响皂苷常用溶剂系统有皂苷常用溶剂系统有：氯仿：氯仿-甲醇甲醇-水（水（13：7：2下层）、水饱和的

7、正丁醇、正丁醇下层）、水饱和的正丁醇、正丁醇-乙酸乙酯乙酸乙酯-水（水（4：1：5）、氯仿）、氯仿-甲醇（甲醇（7：3）、正丁醇）、正丁醇-乙酸乙酸-水（水（4：1：5上层）上层）皂苷元常用溶剂系统有：皂苷元常用溶剂系统有： 环已烷环已烷-乙酸乙乙酸乙酯（酯（1：1）、苯）、苯-乙酸乙酯（乙酸乙酯（1：1）、氯）、氯仿仿-乙酸乙酯（乙酸乙酯（1：1）、氯仿）、氯仿-丙酮（丙酮（19：1）、氯仿）、氯仿-乙醚（乙醚（1：1）3、 显色剂的选择显色剂的选择(1)25磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液：(2)三氯化锑的浓盐酸或氯仿溶液三氯化锑的浓盐酸或氯仿溶液： (3)硫酸硫酸-甲醇甲醇(1 1)：(4)

8、氯磺酸氯磺酸-乙酸乙酸(1 2)溶液溶液： (5)碘蒸气碘蒸气：其它常用显色剂有其它常用显色剂有三氯醋酸、浓硫酸、三氯醋酸、浓硫酸、50%及及20%硫酸乙醇、浓硫酸硫酸乙醇、浓硫酸-醋酸酐、香醋酸酐、香草醛草醛- -浓硫酸等浓硫酸等 四、皂苷类成分的定量分析皂苷类成分的定量分析薄层色谱法、比色法、高效液相色谱法薄层色谱法、比色法、高效液相色谱法 皂苷类成分的定量分析可分为皂苷类成分的定量分析可分为总皂苷测定、皂苷元测定和单体皂苷测定总皂苷测定、皂苷元测定和单体皂苷测定总皂苷测定总皂苷测定：提取可用各种浓度的甲醇、乙：提取可用各种浓度的甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇。分离可用水饱和醇、异丙醇、丁

9、醇、戊醇。分离可用水饱和的正丁醇萃取、大孔树脂洗脱。测定最常用的正丁醇萃取、大孔树脂洗脱。测定最常用的有比色法、重量法。的有比色法、重量法。皂苷元的测定皂苷元的测定：可用总皂苷加酸水解或：可用总皂苷加酸水解或将样品先水解再用有机溶剂提取皂苷元。将样品先水解再用有机溶剂提取皂苷元。测定有薄层色谱法、高效液相色谱法、测定有薄层色谱法、高效液相色谱法、比色法。比色法。单体皂苷的测定单体皂苷的测定：有薄层色谱法、高效：有薄层色谱法、高效液相色谱法（需要有单体皂苷对照品比液相色谱法（需要有单体皂苷对照品比较）。较）。比色法比色法皂苷类成分加入适当显色剂，如浓硫酸、皂苷类成分加入适当显色剂，如浓硫酸、高氯

10、酸、香草醛高氯酸、香草醛- -冰醋酸等，使其呈色，冰醋酸等，使其呈色，于可见光区进行比色测定或用紫外分光于可见光区进行比色测定或用紫外分光光度法测定样品中总皂苷或总皂苷元的光度法测定样品中总皂苷或总皂苷元的含量含量 浓硫酸浓硫酸硫酸硫酸-醋酐、硫酸醋酐、硫酸-冰醋酸试剂冰醋酸试剂芳香醛芳香醛-硫酸或芳香醛硫酸或芳香醛-高氯酸高氯酸 对对-二甲氨基苯甲醛二甲氨基苯甲醛 常用显色剂常用显色剂薄层色谱法薄层色谱法可排除其他组分的干扰，常用于测定中药制剂中的皂苷元或单体皂苷，定量方法有斑点面积法、薄层洗脱-比色法、薄层扫描法。 高高 效效 液液 相相 色色 谱谱 法法 第五节第五节 含挥发性成分制剂的

11、分析含挥发性成分制剂的分析挥发性成分：中药中一类具有芳香气并挥发性成分：中药中一类具有芳香气并易挥发的成分易挥发的成分包括挥发油类成分及其它分子量较小、包括挥发油类成分及其它分子量较小、易挥发的化合物。易挥发的化合物。挥发油的概念、分布挥发油的概念、分布 概念：是指存在于植物体中一类可随水蒸气概念：是指存在于植物体中一类可随水蒸气蒸馏得到的与水不相混溶的油状液体。它们蒸馏得到的与水不相混溶的油状液体。它们在常温下能挥发，大部分具有香气。在常温下能挥发，大部分具有香气。分布：分布：主要存在于植物的花蕾、茎、叶主要存在于植物的花蕾、茎、叶及根茎中。及根茎中。含挥发油较丰富的有含挥发油较丰富的有木兰

12、科木兰科（如（如辛夷、厚朴、八辛夷、厚朴、八角茴香、五味子）角茴香、五味子）樟科（肉桂樟科（肉桂、樟、乌药）、樟、乌药）芸香科（如橙、桔、枳实、吴茱萸、芸香科（如橙、桔、枳实、吴茱萸、降香、花椒）降香、花椒）伞形科（防风、白芷、川芎、当归、伞形科（防风、白芷、川芎、当归、）唇形科（薄荷、藿香唇形科（薄荷、藿香、紫苏、荆芥、香糯）、紫苏、荆芥、香糯）含含 量量 特特 点：点： 1、同一品种不同生长环境或采收季节其含、同一品种不同生长环境或采收季节其含量和品质（包括成分、香气等）有显著差异量和品质（包括成分、香气等）有显著差异 全草类药材一般以开花前期或含苞待放之时全草类药材一般以开花前期或含苞待

13、放之时含量最高如薄荷、紫苏、荆芥、藿香等。而含量最高如薄荷、紫苏、荆芥、藿香等。而根、根茎类以秋天成熟后，含量高。根、根茎类以秋天成熟后，含量高。2、同一植物不同部位含量也不同、同一植物不同部位含量也不同3 3、同一植物的药用部位不同其含量也、同一植物的药用部位不同其含量也有差异有差异其它挥发性成分：其它挥发性成分： 一些小分子化合物如一些小分子化合物如冰片、樟脑冰片、樟脑。多为结晶性固体多为结晶性固体 挥发油的性质挥发油的性质 （3） 在常温下可以挥发，与脂肪油区在常温下可以挥发，与脂肪油区别别：当把挥发油涂在纸片上经挥散后不当把挥发油涂在纸片上经挥散后不留下持久性的油斑。而且挥发油能随水留

14、下持久性的油斑。而且挥发油能随水蒸气挥发而不分解蒸气挥发而不分解（4） 可溶于浓乙醇及多数有机溶媒可溶于浓乙醇及多数有机溶媒（如（如乙醚、氯仿及脂肪油中），能完全溶于无乙醚、氯仿及脂肪油中），能完全溶于无水乙醇中，极难溶于水水乙醇中，极难溶于水（5 5） 各种挥发油的折光率各不相同，各种挥发油的折光率各不相同，折光折光率通常在率通常在1.43-1.611.43-1.61之间。之间。 在一定情况下挥发油中如有杂质存在，折光在一定情况下挥发油中如有杂质存在，折光率就会有所改变率就会有所改变 （6 6） 不同的挥发油具有各自的旋光度不同的挥发油具有各自的旋光度 （7） 挥发油暴露于空气和日光下逐渐氧

15、挥发油暴露于空气和日光下逐渐氧化变质而分解，致使其比重增加，颜色变化变质而分解，致使其比重增加，颜色变深，甚至树脂化深，甚至树脂化（萜类的聚合、氧化等）（萜类的聚合、氧化等）生成具有不愉快臭味的化合物，同时失去生成具有不愉快臭味的化合物，同时失去挥发性，因此挥发油应挥发性，因此挥发油应装于棕色瓶内，密装于棕色瓶内，密闭、低温、避光保存闭、低温、避光保存（9） 由于挥发油是混合物，不同的成由于挥发油是混合物，不同的成分其沸点不同，故可利用此性质纯化分其沸点不同，故可利用此性质纯化 挥发油的提取方法挥发油的提取方法 水蒸气蒸馏法、浸取法水蒸气蒸馏法、浸取法水蒸气蒸馏：挥发油通常可用水蒸气水蒸气蒸馏

16、：挥发油通常可用水蒸气蒸馏法提取，收集馏水液，放冷后，蒸馏法提取，收集馏水液，放冷后，挥发油即浮于上层，下层的水液加入挥发油即浮于上层，下层的水液加入氯化钠饱和，原溶解于水中的少量挥氯化钠饱和，原溶解于水中的少量挥发油又可析出。发油又可析出。 二、挥发油的定性分析二、挥发油的定性分析 （一）化学反应法（一）化学反应法 含双键的萜类成分能与氢卤酸起加成反应含双键的萜类成分能与氢卤酸起加成反应内酯类挥发油与羟胺反应成羟肟酸，与三氯化内酯类挥发油与羟胺反应成羟肟酸，与三氯化铁呈色铁呈色含不饱和挥发油可用高锰酸钾氧化呈色含不饱和挥发油可用高锰酸钾氧化呈色酚类：加三氯化铁试剂，呈兰色、蓝紫色或绿酚类：加

17、三氯化铁试剂，呈兰色、蓝紫色或绿色；色；羰基化合物：银镜反应、苯肼及苯肼衍生物、羰基化合物：银镜反应、苯肼及苯肼衍生物、氨基脲、羟胺等反应氨基脲、羟胺等反应（二）薄层色谱法（二）薄层色谱法挥发油中各化合物极性顺序挥发油中各化合物极性顺序 烃（萜）烃（萜） 醚醚 酯酯 醛、酮醛、酮 醇、酚醇、酚 酸酸 固定相：硅胶、氧化铝、硝酸银固定相：硅胶、氧化铝、硝酸银 展开系统选择：最常用的有正己烷、石展开系统选择：最常用的有正己烷、石油醚，另外也有苯、乙醚、四氯化碳、油醚，另外也有苯、乙醚、四氯化碳、氯仿、乙酸乙酯及混合展开剂氯仿、乙酸乙酯及混合展开剂薄层显色剂薄层显色剂茴香醛茴香醛- 浓硫酸试剂浓硫酸

18、试剂：喷后：喷后105加热，加热，挥发油中各成分显不同颜色。挥发油中各成分显不同颜色。异羟肟酸铁试剂异羟肟酸铁试剂：斑点显淡红色，可能：斑点显淡红色，可能是酯和内酯。是酯和内酯。2，4- 二硝基苯肼试剂二硝基苯肼试剂：如产生荧色斑点，：如产生荧色斑点，则表明含醛或酮类化合物。则表明含醛或酮类化合物。三氯化铁试剂三氯化铁试剂：斑点显绿色或蓝色，可：斑点显绿色或蓝色，可能是酚性化合物。能是酚性化合物。（三）、气相色谱法（三）、气相色谱法三、挥发油的定量分析三、挥发油的定量分析 （一）气相色谱（一）气相色谱 色谱柱的选择色谱柱的选择：可用填充柱，也可用毛细管柱（分离效可用填充柱，也可用毛细管柱（分离效果更好）果更好）担体基本都用白色担体，并经硅烷化担体基本都用白色担体，并经硅烷化固定相的选择固定相的选择： 1 1、非极性的饱和烃润滑油类，如角鲨烷、非极性的饱和烃润滑油类，如角鲨烷、阿皮松、硅酮类、甲基硅油等。阿皮松、硅酮类、甲基硅油等。利用各成分沸点的差异而分离，对沸点相利用各成分沸点的差异而分离，对沸点相近的单