制药用水微生物检查方法的验证ppt课件

1、微生物检查方法验证微生物检查方法验证 引见内容一、微生物的根底知识一、微生物的根底知识二、微生物检查方法验证二、微生物检查方法验证 微生物根底知识微生物根底知识 微生物microorganism, microbe是一些 肉眼看 不见的微小生物的总称。 微生物microorganism包括细菌、支原体、螺旋 体、衣原体、立克次体、病毒及真菌霉菌、酵母菌和放 线菌等。 微生物的特点微生物的特点 种类多 分布广 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，只占地球上 实践存在的微生物总数的20%。 微生物的特点微生物的特点 各体小，外表积大 物体的外表积和体积之比称为外表积， 大肠埃希菌 的外表积是人的

2、30万倍。 微生物的特点微生物的特点 吸收多吸收多 转化快转化快 如大肠埃希菌在适宜条件下，每小时可以耗如大肠埃希菌在适宜条件下，每小时可以耗费相当于本身分量费相当于本身分量2000倍的数量，而人体那倍的数量，而人体那么需求么需求40年之久。年之久。 微生物的特点微生物的特点 顺应强顺应强 易变异易变异 多数细菌能耐多数细菌能耐0196的低的低温；温； 硫细菌可在硫细菌可在250300的高温的高温条件下正常生长；条件下正常生长； 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；中正常生活； 产芽孢细菌和真菌孢子在枯燥条产芽孢细菌和真菌孢子在枯燥条件下能保藏几十件下能保藏几十

3、 年、几百年。年、几百年。 微生物按其构造、化学组成及生微生物按其构造、化学组成及生活习性等分为三大类：活习性等分为三大类： 原核细胞型：细菌、放线菌、支原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体等旋体等 真核细胞型：真菌真核细胞型：真菌 非细胞型：病毒非细胞型：病毒 噬菌体噬菌体 细菌bacterium属于原核细胞型微生物，其特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁衍。 了解细菌的根本特性、细菌的鉴别，对新药的研发和防止药品污染，保证药质量量具有重要的意义。 细菌的形状细菌的形状 - 细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接察看难以看到，细菌

4、体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接察看难以看到，其构造和外形须经过显微镜放大数百倍至上千倍才干其构造和外形须经过显微镜放大数百倍至上千倍才干 察看。察看。- 普通以微米普通以微米m作为丈量单位。作为丈量单位。- 在细菌学中，按其形状可分为球菌、杆菌、弧菌和螺杆菌。在细菌学中，按其形状可分为球菌、杆菌、弧菌和螺杆菌。 经革兰染色法经革兰染色法Gram stain可将细菌分成两大类：可将细菌分成两大类： 革兰阳性菌革兰阳性菌G+和革兰阴性菌和革兰阴性菌G-。 细菌的形状细菌的形状 细菌的形状细菌的形状 真菌fungus；eumycetes 是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道的种超越10万

5、个。大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。许多菌丝在一同统称菌丝体。菌丝体在基质上生长的形状称为菌落。 细菌的形状细菌的形状 真菌的形状具有多样性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可察看到。其形状分单细胞、多细胞，单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌yeast。多细胞由菌丝和孢子组成，并交错成团。 药品污染常见的真菌药品污染常见的真菌 毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 - 毛霉属Mucor Micheli ex Fries毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分高的粮食及食品的霉烂蜕变。毛霉属的分枝类型：毛霉属的分枝类型：1.单生不分枝单生不分枝 2.

6、 总状分枝总状分枝 3.假轴状分枝假轴状分枝毛霉的孢子囊：毛霉的孢子囊：1. 孢子孢子 2. 膜膜 3. 囊轴囊轴 4. 孢子囊柄孢子囊柄 根霉属根霉属RhizopusEhrenberg 根霉属广泛运用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。 根霉根霉A：1营养菌丝营养菌丝 B：2. 匍匐菌丝匍匐菌丝 3. 假根假根 4. 孢囊柄孢囊柄 C ：孢囊放大图：孢囊放大图 1. 囊壁囊壁 2. 囊轴囊轴 3. 囊托囊托 曲霉属曲霉属Aspergillus 曲霉属的菌丝无色、淡色或外表凝聚有色物质，为有隔的多细胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有剧烈的致癌性。 曲霉 1双

7、层小梗分生孢子头 2. 单层小梗分生孢子头 3. 分生孢子梗基部足细胞 4. 双层小梗的细胞微构造 常见青霉分生孢子梗常见青霉分生孢子梗 青霉属青霉属菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出，无菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出，无足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一级分足细胞，顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一级分枝的小梗上，长出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。本属枝的小梗上，长出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。本属的常见产毒霉菌有的常见产毒霉菌有9个种，其中展青霉可产生展青霉素，是一种神经个种，其中展青

8、霉可产生展青霉素，是一种神经毒素，并具有致畸、致突变和致癌性；毒素，并具有致畸、致突变和致癌性； 霉菌菌落形状 霉菌在孟加拉红培育基上的形状霉菌在孟加拉红培育基上的形状 酵母菌显微镜下形状 微生物检查法 微生物限制检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、微生物限制检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。辅料受微生物污染程度的方法。 检查工程包括检查工程包括 细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。检查方法检查方法 多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法，法， 国家药典规定运用阅历证合格的方法。国

9、家药典规定运用阅历证合格的方法。 检查方法的验证检查方法的验证 实验环境实验环境 无菌检查应在环境干净度无菌检查应在环境干净度 10 000 级下的部级下的部分干净度分干净度100 级的单向流空气区域内或隔离系级的单向流空气区域内或隔离系统中进展，其全统中进展，其全 过程应严厉遵守无菌操作，防止微生物污染，过程应严厉遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污防止污 染的措施不得影响供试品中微生物的检出。染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 检验根据检验根据 单向流空气区、任务台面及环境应定期按单向流空气区、任务台面及环境应定期按的现行国家规范进展干净度验的现行国家规范进展干净度验证。证。 -202

10、1版药典版药典 隔离系统的运用隔离系统的运用 运用隔离系统重要的目的- 是维护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装等的污染，保证无菌实验结果的可靠性，实现一次检出的要求。- 是维护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染。 隔离系统应按相关的要求进展验证，其内部环境的干净度 须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对实验环境进展监控。 - 为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方法为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方法 是至关重要的。因此实验前必需对选择的方法进展验证。是至关重要的。因此实验前必需对选择的方法进展验证。 - 证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的

11、方法适宜于被证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于被 检供试品的微生物污染的检验。检供试品的微生物污染的检验。 方法验证的必要性方法验证的必要性 检验结果的影响要素检验结果的影响要素供试品的组分供试品的组分 抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化剂，这抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化剂，这 些些 组分在一定浓度下对微生组分在一定浓度下对微生 物起一定的抑制造用也可对污染菌呵斥损伤。物起一定的抑制造用也可对污染菌呵斥损伤。环境影响环境影响 不同类型的微生物及不同的存活形状对环境的不同类型的微生物及不同的存活形状对环境的 抗性是不同的。抗性是不同的。 如培育基的质量、检验人员的操作误差等。如培育基

12、的质量、检验人员的操作误差等。 方法验证方法验证 实验全方面验证实验全方面验证 如实验环境，培育基，供试液的制备，灭如实验环境，培育基，供试液的制备，灭菌方法等全部进菌方法等全部进 行验证。行验证。 当验证实验符合要求时，就可以为在该实当验证实验符合要求时，就可以为在该实验条件下该供试验条件下该供试 品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略品对微生物无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，供试品检不计，供试品检 验结果可真实的表达。验结果可真实的表达。验证方法验证方法菌液制备菌液制备 50 50100cfu/ml100cfu/ml。验证方法验证方法 实验组、菌液组、供试品对照组、释剂对照组。实验组、菌液组

13、、供试品对照组、释剂对照组。结果判别结果判别 供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率供试品组、对照组、稀释剂对照组的菌回收率 均不低均不低70% 70% 。 方法验证方法验证验证方法验证方法 按供试液的制备和细菌、霉菌及酵按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的母菌计数所规定的 方法及以下要求进展。方法及以下要求进展。对各实验菌的回收率应逐一进展验对各实验菌的回收率应逐一进展验证。证。验证实验至少应进展验证实验至少应进展3次独立的平次独立的平行实验，并分别计算行实验，并分别计算 各实验菌每次实验的回收率。各实验菌每次实验的回收率。 方法验证方法验证实验菌株实验菌株 大肠埃希菌、金黄色葡

14、萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 白色念珠菌、白色念珠菌、 黑曲霉、枯草杆菌。黑曲霉、枯草杆菌。菌液制备菌液制备 同计数培育基的适用性检查。同计数培育基的适用性检查。 方法验证方法验证 实验组 - 平皿法 取最低稀释级供试液1ml和50100cfu实验菌，分别注入平皿中，立刻倾注琼脂培育基(平行制备2个平皿)，按平皿法测定其菌数。 - 薄膜过滤法 取最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中参与50100cfu实验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。 方法验证方法验证 -菌液组菌液组 所加的实验菌数。所加的实验菌数。 - 供试品对照组供试品对照组 测定供试品本底菌数。测定供试品本底菌数。 - 稀释剂对照组稀释剂对照组 用相应的稀释液替代供试品，参用相应的稀释液替代供试品，参与实验与实验 菌按实验组测定其菌数。