爱滋检测方法和步骤

1、爱滋检测方法和步骤辽宁省丹东市传染病医院检验科作业指导书第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-017 版本：2006-07生效日期：2006-07-01试剂组成1.HIV抗原包被板12孔 X 8/8 :2.HIV酶标记物7mlX 1瓶3.HIV阴性对照1mlX 1瓶4.HIV阳性对照1mlX 1瓶5.20倍浓缩洗液50ml X 1 瓶6.底物缓冲液7mlX 1瓶7.底物液7mlX 1瓶8.终止液7mlX 1瓶9.封口袋1个10圭封板膜3张10使用说明书1份12珠海丽珠试剂（双抗原夹心酶联免疫法） 检测HIV抗体实验原理本品用钝化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和H型抗原宝贝的

2、微孔板和酶标记的 HIV-1/HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗 原夹心法原理检测人血清或血浆中 HIV-1/HIV-2 抗体，适用于献血员筛查及临床 HIV抗体检测。操作步骤1. 加样：将所需数量的板条固定于板架，每 次试验设空白对照1孑L,阳性对照2孔， 阴性对照 3孔分别加入阳阴性对照各 50ul，其余孔加入50ul待测样品。2. 温育：置37°C温育30分钟。3. 洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注 满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。 重复洗6次后拍干。4.加入酶标记物50ul 。5. 温育：置37°C温育30分钟。6. 弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满

3、各孑L,静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复 洗6次后拍干。7. 显色：每孔加入底物缓冲液 50ul，再加 入底物液50ul，震荡混匀，置 37C温育 30分钟。8. 终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。9. 读值：用酶标仪读值，在单波长 450nm或 双波长450nm/630nm下读取各孔 A值。辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书第十七节人类免疫缺陷病 毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-062版本：2006-07生效日期：2006-07-015若20倍浓缩洗液出现结晶，请置于37°C实验轟3.4.审核:批准:至溶解后在使用。6. 不同批号的试剂组分不可混用。7. 本

4、试剂盒及各种废弃物阴按传染性物品1. 试剂使用前应充分摇匀。2. 洗涤时各孔均须加满洗液，以防止孔口有 游离酶标记物未被洗净。结果判读请在反应终止后15分钟内完成。 测定结果必须以酶标仪读数为准。编写:批准日期：2006年07月01日第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程北京万泰生物试剂目的：本试剂盒定性检测人血清和血浆中的 HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查, 临床检测及血液制品检测。IIIIllIII原理：本试剂和应用双抗原夹心酶联免疫法原理 （ELISA）检测血清或血浆样品中人类免 疫缺陷病HIV（1+2型）抗体。与包被高 纯度基因重组HIVC1+2型）抗原，可与 样品中抗HIV

5、抗体反应，加入HRP标记 HIV（l+2型）抗原，然后用TMB地物作 显色。通过酶表仪检测吸光度，从而判 定样品中HIV抗体的存在与否。试剂盒组成:1. HIV酶标板12孔X8/8 孔 X122. HIV酶标试剂10mlX1 瓶3. HIV-1 型抗体阳性对照1ml X 1 瓶4HIV-2 型抗体阳性对照1ml X1 瓶5. HIV抗体阴性对照1ml X 1 瓶6.浓缩洗液50mlX1 瓶7显色剂A液6mlXl 瓶8显色剂B液6mlX 1 瓶9.终止液6ndX瓶10.封口袋1个11.封板膜辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书第十七节人类免疫缺陷病 毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-0

6、62版本：2006-07生效日期：2006-07-019. 显色：每孔加入显色剂 A B液各 50vl，轻轻震荡混匀。37 ± 1 °C避光显色15 ± 1分钟。10. 测定：每孔加终止液50vl，轻轻震荡 混匀。设定酶标仪波长于450nm处。测定各 孔A值。结果判定：1.阴性对照的正常范围：正常情况下， 阴性对照孔A值W 0.10。2. 阳性对照的正常范围：正常情况 下，阳性对照孔A值0.80。3. 临界值（CUTOFF计算：临界值= 阴性对照孔A均值+0.124. 阴性判定：样品A值临界值者为 HIV抗体阴性5. 阳性判定：样品A值临界值者为 HIV抗体阳性（

7、注意：初试阳性应重新取样双孔 复试。复试阳性者应按全国艾滋病检测技术规 范送HIV确证实验室进行确证试验。）注意事项：1.本试剂的使用单位必须是经当地卫 生行政部门批准的HIV处筛实验室。2. 检测必须符合 HIV实验室管理规 范和生物安全守则的规定，严格防止交叉污染。 操作时必须戴手套，穿工作服，严格健全和执行 消毒隔离制度。所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时 必须注意安全。3. 试剂盒从冷藏环境中取出是应置 室温平衡15-30分钟后方可使用，未用完的微孔 条用自封袋密封2-8 C保存。4. 加样时必须用加样器加，并经常校 对加样器的准确性。5. 洗涤时

8、各空均需加满洗液，防止空 口内有游离酶不能洗净。使用洗扳机洗涤应设定 30-60秒浸泡时间。6. HIV抗体检测结果的判定必须以酶 标仪读数为准。用双波长检测时，参考波长可用 600-650nmo7. 操作应严格按说明书进行。不同批 次试剂不得混用。封板膜为一次性用品，不能重复使用。辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书第十七节人类免疫缺陷病 毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-062版本：2006-07生效日期：2006-07-01检测原理：本试剂盒采用双抗原夹心两步法检测人 血清或血浆样本中的（HIV1/2 ）型抗体。采用多 种HIV-1和HIV-2的特异性抗原制作预包被板及 酶结合

9、物。当待检样本中存在 HIV抗体时，在反 应过程中形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记 HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色 反应。试剂组成： 微孔板8* 12T酶标抗原14ml1 ml阳性对照阴性对照1 ml洗涤液25 ml显色剂A1瓶7 ml显色剂B1瓶7 ml终止液1瓶7 ml说明书1份自封袋1个圭寸板膜3张样品的采集和保存：1. 采集静脉的血清血浆样本应在无菌 条件下保存，并避免样品溶血及反复冻 溶。2. 血清和血浆样品收集后如果无法在当天检测，样品须在（2-8 °C）保存；如 果大于7天则需冷冻保存。木1 "平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡 至室温

10、（18-25 C），微孔板开封后按需要取 用，余者及时以自圭寸袋圭寸存。2. 配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀，浓缩 洗涤液和烝馏水或去离子水按 1: 19稀释后 使用。3. 编号：取所需数量微孔条固定于支架，按 序编号。4. 加样：按顺序分别在相应空加入 50ul待 测样品及阴阳性对照血清。辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书第十七节人类免疫缺陷病 毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-062版本：2006-07生效日期：2006-07-015温育：覆上封板膜，置 37 C温育30分钟拍干（每次应保持30-60秒浸泡时间）。 加酶：分别在每孔中加入酶标抗原100ul6. 洗涤：用洗涤液充

11、分洗涤5次，洗涤完后8. 温育：覆上封板膜，置37 C温育30分钟9. 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后 拍干（每次应保持30-60秒浸泡时间）。10. 显色：每孔加底物 A B各50ul，轻拍混 匀，覆上封板膜，37C暗置20分钟。11. 终止：每孔加入终止液50ul，混匀。12. 测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长 450/630nm测定各孔OD直（用单波长测定时， 需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并 记录结果。结果判定：1. 阳性对照均值应大于阴性对照均值0.60以上且阴性对照均值小于0.10方可认为本次 试验有效2. 临界值计算：cutoff value=0.10+阴性对 照均值（若阴性对照均值小于 0.05 ,以0.05 计）3. 样品0D直大于或等于临界值为初筛阳性， 小于临界值为阴性。初筛阳性者重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国 HIV监测 管理规范”送HIV确认实验室进行确认试验。注意事项：1. 本检测试剂仅用于体外诊断试验。仅用于 人血清或血浆样本，其他体液和样本可能得 不到准确的结果。2. 本试剂的使用单位必须是经当地卫生行 政部门批准的HIV处筛实验室。.3. 样本的加样建议使用微量加样器准确加 入。酶标抗原需用微量加液器加液，