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文档简介

1、会计学1基因编辑技术的概念和原理基因编辑技术的概念和原理真正达成了“编辑基因” 。第1页/共41页第2页/共41页第3页/共41页的研究特定基因功能的方法。第4页/共41页第5页/共41页第6页/共41页第7页/共41页第8页/共41页第9页/共41页第10页/共41页第11页/共41页第12页/共41页ZFN 由锌指蛋白(ZFP)和 Fok核酸内切酶组成。其中，由 ZFP 构成的 DNA 识别域能识别特异位点并与之结合，而由Fok构成的切割域能执行剪切功能，两者结合可使靶位点的双链DNA 断裂(DSB)。于是， 细胞可以通过同源重组(HR)修复机制和非同源末端连接(NHEJ)修复机制来修复

2、DNA。HR 修复有可能会对靶标位点进行恢复修饰或者插入修饰，而 NHEJ 修复极易发生插入突变或缺失突变。两者都可造成移码突变，因此达到基因敲除的目的。第13页/共41页第14页/共41页第15页/共41页TALENs 包含两个 TALEN 蛋白, 每个 TALEN 都是由 TALE array 与 Fok融合而成. 其中一个 TALEN 靶向正义链上靶标位点, 另一个则靶向反义链上的靶标位点. 然后 Fok形成二聚体, 在靶向序列中间的 spacer 处切割 DNA, 造成双链 DNA 断裂, 随后细胞启动 DNA 损伤修复机制. 针对不同的TALEN 骨架, 其最适宜的spacer长度不

3、同, 其长度范围一般为1220 bp. 实验结果表明, TALENs在靶向DNA时, 第一个碱基为 T 时其结合效果更佳。第16页/共41页第17页/共41页第18页/共41页3. CRISPR /Cas9 基因组编辑技术第19页/共41页CRISPR/Cas 系统由 Cas9 核酸内切酶与sgRNA构成. 转录的 sgRNA 折叠成特定的三维结构后与 Cas9 蛋白形成复合体, 指导 Cas9 核酸内切酶识别特定靶标位点, 在 PAM 序列上游处切割 DNA 造成双链 DNA 断裂, 并启动 DNA 损伤修复机制. 从不同菌种中分离的 CRISPR/Cas 系统, 其 CrRNA(或者是人工构建的sgRNA)靶向序列的长度不同, PAM 序列也可能不同。第20页/共41页第21页/共41页第22页/共41页第23页/共41页第24页/共41页第25页/共41页变，其中在果蝇、 斑马鱼、大鼠等物种中还获得了可以稳定遗传的突变体。第26页/共41页第27页/共41页第28页/共41页第29页/共41页第30页/共41页第31页/共41页又构建了携带特异性突变的小鼠模型。3. 构建模式动物第32页/共41页第33页/共41页第34页

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