免疫检测点介绍

1、（一）免疫检测点简介“免疫检验点”，为抑制受体和抑制信号通路，这些“检验点” 在正常情况下能抑制T细胞的功能，同时在肿瘤组织中可能被肿瘤 利用形成免疫逃逸。PD-1、PD-Ll、CTLA-4、B 和 T 细胞衰减器（B and T cell attenuator,BTLA）.T细胞免疫球蛋白以及Tim-3等分子均属于“检 验点”分子，在肿瘤组织中可能被肿瘤利用形成免疫逃逸，它们通过 控制胞外以及胞内信号来控制细胞周期进程。淋巴细胞活化基因3 （LAG-3）是表达在活化T细胞、XK细胞及 B细胞上的免疫抑制检验点分子。目前己知的唯一配体是MHC-II分 子。NK细胞表面存在杀伤抑制受体（KIRs

2、,可抑制NK细胞的杀伤作 用），在肿瘤微环境中可能会被诱导表达，从而抑制NK细胞的杀伤功 能。因此，KIRs也被认为是免疫抑制检验点，通过阻断其信号可增 强XK细胞的杀伤肿瘤的功能53 o目前已有针对KIRs单抗进入临床 实验（lirilumab单抗治疗急性粒细胞口血病已进入I期临床实验）很多免疫抑制检验点在肿瘤细胞中与PD-1/PD-L1共表达，另一 方而，免疫抑制检验点的联合阻断中可供选择的目标增多有利于筛选 出最佳组合从而达到最佳效果。（二）临床常用的检测点"程序性死亡分子1" （programmed deah-1, PDT）和"细胞毒T淋巴细胞相关抗原4&

3、quot;(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4) 表达在T细胞表而，同属于抑制性共刺激分子，在免疫系统中扮演着 类似“刹车”的角色。CTLA的配体(即CD80和CD86)只表达在抗原递呈细胞上，而非 肿瘤细胞表而，因此CTLA-4抑制T细胞活化发生在次级免疫器官(淋 巴结)内，而不是肿瘤微环境中。同时CTLA-4主要表达在CD4+ T 细胞而非CD8+ T细胞，CTLA-4单抗的抗肿瘤作用可能是通过增强 CD4+ T细胞间接促进CD8+ T细胞的功能。不同于CTLA-4的是，PD-1的配体PD-L1在肿瘤细胞及肿瘤浸润 淋巴细

4、胞上均有表达，而不是在抗原递呈细胞上，因此PD-1/PD-L1 抑制T细胞活化主要在肿瘤微环境中5-7 o目前，在肺癌领域研究 得比较多的免疫检验点抑制剂有抗PD-1 (Ni vo lumab, Pembr o 1 i zumab ) 和 PD-L1 单抗(MPDL3280A 和 MEDI-4736 )。PD-L1仍然是现阶段PD-l/PD - LI类药物最有前景的预测疗效的 生物标记物之一在黑色素瘤相关研究中发现，抗PD-1抗体的疗效要好于抗 CTLA-4抗体。在XSCLC,CTLA-4抗体单药治疗鲜有疗效，而PD-1/PD-L1 阻断剂的单药均表现出肿瘤活性。PD-1有两个配体，PD-L1

5、和PD-L2； PD-L1有两个受体PD-1和 CD80 (B7. 1)。所以，尽管抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体都作用于 PD-1/PD-L1信号轴，但阻断PD-1并不等同于阻断PD-Llo抗PD-1抗 体能阻断PD-1与PD-Ll、PD-L2结合，却不能阻断PD-L1与CD80相 互作用，而抗PD-L1抗体能阻断PD-L1与PD-1、CD80结合，却不能 阻断PD-1与PD-L2的结合。抗PD1单抗的代表性药物有Nivolumab和Pembrolizumab （MK-3475）O1, Nivolumab是一种抗PD-1受体的人源化Ig G4型单克隆抗体。百时美-施贵宝公司产品PD-1抑制

6、剂，商品名“opdivo “ （Nivolumab "纳屋单抗“）美国默沙东公司研制PD-1抑制剂，商品名“Keytruda'C药品名: Pembrolizumab 派姆单抗，MK-3475）2, Pembrolizumab （MK-347）,是另一种人源化 Ig G4- k 型单克 隆抗体，高选择性阻断PD-1,其作用机理类似Nivolumabo二，Ipilimumab （一种抗 CTLA-4 抗 5 体），商品名 yervoy （Ipilimumab易普利姆玛，也叫“依匹单抗”），和opdivo 一样，都 是由百时美施贵宝公司生产。三，罗氏旗下基因泰克公司研发的“MPDL

7、3280A”是人源化抗PD L -1的IgG4型抗体。MEDI-4736 是另一个 Ig Glk 型抗 PD-L1 单抗。（三）PD-1 与 PD-L1PD1 （programmed deathl）作为T细胞抑制受体，在肿瘤细 胞中可限制T细胞效应子的功能，在肿瘤免疫逃逸中具有重要作用。人PD-1基因位于染色体的2q37. 35,虽然PD-1被认可为CD28 超家族成员，但PD-1蛋白质结构与CD28、CTLA-4及ICOS存在明 显差异。与其他的共刺激分子仅表达于T淋巴细胞不同，PD-1持续性表 达于T、B淋巴细胞、骨髓细胞并上调于活化的T细胞表而。PD-1是免疫球蛋白超家族CD28家族成员

8、，为50 55 k D的I型跨膜糖蛋白，由类似IgGV的结构域、跨膜结构域以及胞质尾 部结构域组成。Ig G V的结构区是从质膜中分离的20个氨基酸区域, 与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4 ( cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4, CTLA-4CD28 及共刺激因子具有 22% 33% 的同源性；胞质尾区具有2个酪氨酸基序，即免疫受体酪氨酸抑制 基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif, ITIM) 和免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine-based

9、switch motif, ITSM)o ITSM对于PD-1发挥免疫抑制功能十分必要PD-1的表达与细胞凋亡无关但与淋巴细胞活化相关。PD-1与肿瘤的免疫逃逸相关，其被T细胞受体(T cell receptor, TCR)信号诱导，并在慢病毒感染及癌症中上调无衰竭T细 胞9。PD-L1 (B7-H1)和 PD-L2 (B7-DC)是 PD-1 结合配体，属于 B7家族蛋白成员10。人B7-H1与B7-1, B7-2及ICOS的同源性约为21至23%。PD-L1在T细胞、B细胞、巨噬细胞、DCs以及一些非免疫细 胞中表达。与其他的B7家族成员仅表达于造血细胞不同，PD-L1可上调表 达于活化的

10、T细胞、B细胞、DC、巨噬细胞、单核细胞，或经IF- 丫刺激的角质细胞、内皮细胞及成肌细胞表面。此外，PD-L1也低水 平的表达于非淋巴器官如心脏、胎盘、骨骼肌、肺、肝、脾及胸腺等 器官。而PD-L2表达仅局限表达于造血系统来源的细胞如树突细胞、 巨噬细胞、单核细胞并上调表达于活化的T细胞、B细胞及其他组 织来源的免疫细胞表而。B7-H1在维持外周耐受发挥主要作用，B7-DC主要是在淋巴结的 免疫应答中有重要的功能4。PD-L1配体涉及宿主免疫系统的逃逸及肿瘤抗凋亡的活性 8 OPD-L1的广泛表达表明PD-1/PD-L1在调解效应T细胞应 答中具有重要作用。与PD-L1相同，IFNY、粒细胞

11、-巨噬细胞集落刺激因子 (granulocyte macrophage-colony sti-mutaing factor, GM-CSF) 以及白细胞介素-4 (inte-rleukin-4, IL4)等炎症信号可加强 PD-L2的表达。PD-Ls在肿瘤中的表达可调解适应性Tregs导致肿 瘤诱发的免疫抑制，包括CD8+ T细胞效应功能的抑制。PD-1 / PD-Ls的Ig V区域与T细胞的抗原受体及抗体相似， 提高了 PD-1/PD-Ls复合物结合其他分子的可能性。活化诱导的细胞死亡PD-1通过PD-L1或PD-L2募集PD-1,导致细胞周期停滞，使 在GO/ G1期的细胞大量积累。研究表

12、明，外源IL-2可减弱PD-1 聚集导致的细胞周期停滞。PD-1可能通过调节IL-2的转录影响T细胞的活化和增殖 26。乳腺癌的标木都有不同程度的B7-H1及B7-DC的阳性细胞。尤 其在低分化的小叶癌表达最为显著。B7-H1的表达与患者的预后呈负 相关。目前有5种处于临床试验阶段的抗体可作为阻断剂阻断PD-1 / PD-Ls信号通路，分别为1, MDX-U06 / BMS-936558 / ONO-4538 （全人 Ig G4 抗 PD1 单抗，BMS）2, CT-0U （人源化 Ig G1 抗 PD1 单抗,Cure Tech / Teva）3, MK-3475 （全人 Ig G4 抗 PD1 单抗，Merck）4, BMS-936559 （人源化 PD-Ll IgG4 单抗，抑制 PD-1 和 B7.1）5, AMP-224 （B7-DC / Ig G1 融合蛋白，GSK）MDX-1106 / BMS-936558 / ONO-4538 是人 IgG4 抗体CT-011为另外一种PD-1阻断剂抗体，研究证明，其对血液恶 性肿瘤是有效的，对固体瘤及直肠癌的研究仍在进行中。MK-3475 （Lambrolizumab）是人源抗 PD-1 单克隆 Ig G4 抗体BMS-936559为全长人IgG4抗体