实验室常用技术参数资料

1、.杂交试验中用于降低背景的封闭剂试剂用途Denhardt试剂Northern杂交使用RNA探针的杂交单拷贝序列的Southern杂交将DNA固定于尼龙膜上的杂交Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100g/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。BLOTTOGrunstein-Ho

2、gness杂交Benton-Davis杂交除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交斑点印迹1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。注意：叠氮钠有毒性，取用时需

3、戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。肝素Southern杂交原位杂交肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500g/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50g/ml。经变性并被打断的鲑精DNAsouthern和Northern杂交把鲑鱼精子DNA（Sigma,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌24h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。

4、合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100g/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA六、常用凝胶的技术参数1葡聚糖凝胶的某些技术数据种类干颗粒直径（）分子量分级范围床体积毫升/克干分子筛得水值溶胀最少平衡时间（h）柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱)肽及球形蛋白质葡聚糖（线性分子）室温沸水浴Sephadex G-1040 12

5、07007002 31.0±0.131Sephadex G-1040 120150015002.53.51.5±3.531Sephadex G-25粗级100300 (5100目)中级50150 (100200目)1,0005,0001005,000461.5±0.262细级20800(200400目)超细1040Sephadex G-50粗级100200中级501501,500500细级208030,00010,0009115.0±0.362超细1040Sephadex G-75401203,0001,000超细104070,000950,000121

6、57.5±0.52433.9215.86Sephadex G-100401204,0001,000超细10401,500,000150,000152010.0±1.04852.359.41Sephadex G-150401205,0001,0002030超细1040400,000150,000182215.0±1.57250.883.53Sephadex G-200401205000100030401040800,000200,000202520.0±2.07250.391.572.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据型号排阻的下限(分子量)分级分离范围(分子量)膨

7、胀后的床体积(ml/g干凝胶)膨胀所需最少时间(室温,h)Bio-gel-P-21,6002002,0003.824Bio-gel-P-43,6005004,0005.824Bio-gel-P-64,6001,0005,0008.824Bio-gel-P-1010,0005,00017,00012.424Bio-gel-P-3030,00020,00050,00014.91012Bio-gel-P-6060,00030,00070,00019.01012Bio-gel-P-100100,00040,000100,00019.024Bio-gel-P-150150,00050,000150,00

8、024.024Bio-gel-P-200200,00080,000200,00034.048Bio-gel-P-300300,000100400,00040.0483琼脂糖凝胶的技术数据型号琼脂糖含量%（W/W）排阻的下限（分子量）分级分离的范围（分子量）生产厂家Sepharose 4B40.3×1063×106PharmaciaSepharose 2B22×10625×106Sagavac 10102.5×1051×1042.5×105SeravacSagavac 887×1052.5×1047

9、5;105Sagavac 662×1065×1042×106Sagavac 4415×1062×10515×106Sagavac 22150×1065×10515×107Bio-gel A-0.5M100.5×106<1×1040.5×106Bio-RadBio-gel A-1.5M81.5×106<1×1041.5×106Bio-gel A-5M65×1061×1045×106Bio-gel A-15M

10、415×1064×10415×106Bio-gel A-50M250×1061×10550×106Bio-gel A-150M1150×1061×106150×1064各处凝胶所允许的最大操作压凝胶最大静水压（kPa）SephadexG-109.8G-159.8G-259.8G-509.8G-754.95琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围凝胶浓度（%）线性DNA长度（bp）0.51000300000.7800120001.0500100001.240070001.520030002.05020006染料在

11、变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度凝胶浓度（%）溴酚蓝二甲苯青FF5035bp140bp6026bp106bp8019bp75bp10012bp55bp2008bp28bp7染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度凝胶浓度（%）溴酚蓝二甲苯青FF3.5100bp460bp5.065bp260bp8.045bp160bp12.020bp70bp15.015bp50bp20.012bp45bp七、氨基酸的特性氨基酸名称三字母缩写单字母缩写质量侧链电离的pHa值结构式 丙氨酸（alanine）AlaA89.09精氨酸（arginine）ArgR174.212.48天冬酰氨（asparagine）AsnN1

12、32.1天冬氨酸（aspartic acid）AspD133.13.86半胱氨酸（systeine）CysC121.12谷氨酰胺（glutamine）GlnQ146.15谷氨酸（glutamic acid）GluE147.134.25甘氨酸（glycine）GlyG75.07组氨酸（histidine）HisH155.166.0异亮氨酸（isoleucine）lleI131.17亮氨酸（leucine）LeuL131.17赖氨酸（lycine）LysK146.19甲硫氨酸（methionine）MetM149.21苯丙氨酸（phenylanaline）PheP165.19脯氨酸（proline

13、）ProP115.13丝氨酸（serine）SerS105.06苏氨酸(threonine)ThrT119.12色氨酸（tryptophan）TrpW204.22 酪氨酸（tyrosine）TyrY181.1910.07缬氨酸（valine）ValP117.15八、遗传密码密码子的第二位密码子的第一位（5端）UCAG密码子的第三位（3端）UUUUPheUCUSerUAUTyrUGUGysUUUCPheUCCSerUACTyrUGGGysCUUALeuUCASerUAA终止（赭石）UGA终止（乳白）AUUGLeuUGGSerUAG终止（琥珀）UGGTrpGCCUULeuCCUProCA

14、UHisCGAArgUCUCLeuCCCProCACHisCGCArgCCUALeuCCAProCAAGlnCGAArgACUGLeuCCGProCAGGlnCGCArgGAAUUIleACUThrAAUAsnAGUSerUAUCIleACCThrAACAsnAGCSerCAUAIleACAThrAAALysAGAArgAAUGMetACGThrAAGLysAGCArgGGGUUValGCUAlaGAUAspGGUGlyUGUCValGCCAlaGACAspGGCGlyCGUAValGCAAlaGAAGluGGAGlyAGUGValGCGAlaGAGGluGGGGlyG九、常用酸碱技术参数1常

15、见的市售酸碱的浓度溶质分子式分子量mol/Lg/L重量（%）比重配制mol/L溶液的加入量（ml/L）冰乙酸CH3COOH60.0517.40104599.51.05057.5乙酸60.056.27376361.045159.5甲酸HCOOH46.0223.401080901.20042.7盐酸HCl36.5011.60424361.18086.22.90105101.050344.8硝酸HNO363.0215.991008711.42062.514.90938671.40067.113.30837611.37075.2高氯酸HclO3100.5011.651172701.67085.89.20923601.540108.7磷酸H2PO480.0018.101445851.70055.2硫酸H2PO498.1018.001776961.84055.6氢氧化铵NH4OH35.0014.80251280.89867.6氢氧化钾KOH56.1013.50757501.52074.11.94109101.090515.5氢氧化钠NaOH40