细胞生物学3细胞生物学研究方法PPT学习教案

1、会计学12第1页/共64页3第2页/共64页4第3页/共64页5第4页/共64页6第5页/共64页7第6页/共64页8Caenorhabditis elegansDrosophila melanogasterArabidopsis thalianaC. elegansZebrafish第7页/共64页9第8页/共64页10第9页/共64页11多肽聚合物等多肽聚合物等结结合，因而在合，因而在基础基础研究和研究和临床试验临床试验中成中成为为非常非常有用的工具。有用的工具。第10页/共64页12第11页/共64页13细胞培细胞培养养第12页/共64页14人的细胞培养人的细胞培养 第13页/共64页1

2、5细胞系细胞系: : 原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，有原代培养物经首次传代成功后即为细胞系，有无限的传代能力。无限的传代能力。细胞株细胞株: : 通过原代培养或经过细胞克隆与选择而建立的通过原代培养或经过细胞克隆与选择而建立的、具有特异的性质或标记的细胞系，但是它们具有有限、具有特异的性质或标记的细胞系，但是它们具有有限的传代能力。的传代能力。原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质培养，此时的细胞

3、保持原有细胞的基本性质 第14页/共64页16植物组织培养植物组织培养 第15页/共64页17植物原生质体培养植物原生质体培养 第16页/共64页18植物组织培养植物组织培养 外植体外植体愈伤组织愈伤组织新植株新植株第17页/共64页19第18页/共64页20第19页/共64页21第20页/共64页22Fluorescence Activated Cell Sorting488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector第21页/共64页23第22页/共64

4、页24第23页/共64页25第24页/共64页26第25页/共64页27第26页/共64页28科研型第27页/共64页29细胞结构特异性抗原（细胞表面/胞浆/核）细胞内细胞因子细胞活性酶活性激素结合位点细胞受体细胞功能第28页/共64页30光学系统光学系统 激光光源激光光源 光收集系统光收集系统液流系统液流系统 流动室流动室 液流驱动系统液流驱动系统电子系统电子系统 光电转换光电转换 数据处理系统数据处理系统细胞分选系统细胞分选系统第29页/共64页31细胞工程细胞工程第30页/共64页32在自发或人工诱导下，在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一或原

5、生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核包括细胞融合形成异核体体(heterokaryon)、异核、异核体通过细胞有丝分裂进体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单行核融合、最终形成单核的杂种细胞。核的杂种细胞。 细胞融合细胞融合 第31页/共64页33聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程）法细胞融合过程第32页/共64页34显微镜下细胞融合过程显微镜下细胞融合过程第33页/共64页35第34页/共64页36第35页/共64页37第36页/共64页38外周血血细胞扫描电镜标本的制备外周血血细胞扫描电镜标本的制备取血取血-PBS洗三次洗三次-滴片滴片(有

6、有Formvar膜膜)-冷的冷的1%戊二醛戊二醛4度固定度固定2小时小时-PBS-1%四氧化锇，四氧化锇，30分分-PBS-50、70、90%丙酮各一次，丙酮各一次，100%两次两次-50、70、90%醋酸异戊酯丙酮溶液各一次，醋酸异戊酯丙酮溶液各一次，100%醋酸异戊酯两次醋酸异戊酯两次-临界点干燥临界点干燥-喷碳、喷碳、金金观察观察第37页/共64页39人类血细胞人类血细胞SEM照片照片 第38页/共64页40第39页/共64页41第40页/共64页42第41页/共64页43随着病毒在宿主体内不断扩散，你就可以通过跟踪发出的绿随着病毒在宿主体内不断扩散，你就可以通过跟踪发出的绿光来观察病毒

7、的扩散途径，或者你把它接合到一种蛋白质上光来观察病毒的扩散途径，或者你把它接合到一种蛋白质上并通过显微镜观察它在细胞内部的移动并通过显微镜观察它在细胞内部的移动第42页/共64页44科学使用绿色荧光蛋白跟踪大脑神经细科学使用绿色荧光蛋白跟踪大脑神经细胞的发育过程。胞的发育过程。第43页/共64页45第44页/共64页46第45页/共64页47第46页/共64页48第47页/共64页49个琳琅满目的个琳琅满目的工具箱，供生工具箱，供生物学家们选用。物学家们选用。第48页/共64页50水晶水母水晶水母 第49页/共64页51会发光的老鼠会发光的老鼠 第50页/共64页52脑内连接脑内连接 第51页

8、/共64页53这两只荧光猪诞生于中国黑龙江省哈尔滨东北农业大学的实验室这两只荧光猪诞生于中国黑龙江省哈尔滨东北农业大学的实验室。它们的发光本领并不是转基因技术的直接产物，而是从其经过。它们的发光本领并不是转基因技术的直接产物，而是从其经过基因改造的母亲那里遗传而来。基因改造的母亲那里遗传而来。两只荧光猪 第52页/共64页54左侧的猫由韩国研究人员左侧的猫由韩国研究人员2007年晚些时候打造，能够在紫外线下年晚些时候打造，能够在紫外线下发出红光。某些情况下，这些荧光蛋白基因可用作一种分子开关发出红光。某些情况下，这些荧光蛋白基因可用作一种分子开关，触发其它细胞活动，触发其它细胞活动 第53页/共64页55第54页/共64页56第55页/共64页57第56页/共64页58第57页/共64页59细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞骨架蛋白等基因表达产物）、骨架蛋白等基因表达产物）、DNA、RNA等等细胞膜流动性（荧光光漂白恢复技术）细胞膜流动性（荧光光漂白恢复技术）细胞内氧自由基活性细胞内氧自由基活性细胞内钙离子浓度变化细胞内钙离子浓度变化膜电位膜电位共聚焦扫描显微镜在生命科学研究中的应用共聚焦扫描显微镜在生命科学研究中