第二章微生物的纯培养和显微技术

1、接种操作接种操作 细菌菌落特征剖面图细菌菌落特征剖面图细菌菌落特征正面图细菌菌落特征正面图稀释倒平板法稀释倒平板法Spread platen无菌水、梯度稀释无菌水、梯度稀释n涂布平板涂布平板 n对于生产中使用的菌种保藏培养基，对于生产中使用的菌种保藏培养基，要求比较丰富的氮源，以防止菌种退要求比较丰富的氮源，以防止菌种退化变质。化变质。分辨率n肉眼分辨率一般只有肉眼分辨率一般只有0.25mmn光学显微镜分辨率光学显微镜分辨率0.18mn电子显微镜可达电子显微镜可达0.2nmnR=0.5 /sin/2n式中：n=介质折射率；=镜口角（标本对物镜镜口的张角），sin/2 =镜口率细菌染色法细菌染色

2、法死菌死菌正染色正染色负染色：负染色：简单染色法简单染色法鉴别染色法鉴别染色法 革兰氏染色法革兰氏染色法 抗酸性染色法抗酸性染色法芽芽 孢孢 染染 色色 法法荚膜染色法等荚膜染色法等 活菌活菌: 用美蓝或用美蓝或TTC（氯化三苯基四氮唑）等氯化三苯基四氮唑）等 作活菌染色作活菌染色 姬姆萨染色法姬姆萨染色法染色观察染色观察n细菌和古生菌细菌和古生菌 n真菌真菌 n藻类藻类 n原生动物原生动物 球菌(coccus)单球菌单球菌双球菌双球菌四联球菌四联球菌八叠球菌八叠球菌葡萄球菌葡萄球菌链球菌链球菌Arrangement of Spherical Bacterial Cellsdiplococci

3、 streptococci tetracocci sarcinae staphylococci .单球菌（显微镜下示意图）单球菌单球菌(single coccus). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .双球菌（显微镜下示意图）双球菌双球菌(double coccus)Micrococcus aerobic, gram-positive, cell arranges mainly in pairs, or irregular clusters. They are often yellow, o

4、range or red in colour 上：显微镜效果 下：电 镜 照 片 四联球菌四联球菌(Micrococcus lactis)八 叠 球 菌八叠球菌八叠球菌(Sarcina ureae)八叠球菌（显微镜下示意图） 葡萄球菌左：电镜照片左：电镜照片右：显微镜下的金黄色葡萄球菌右：显微镜下的金黄色葡萄球菌葡萄球菌葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Staphylococcus - facultatively anaerobic, gram-positive, usually form irregular clusters, nonmotile, catalase po

5、sitive but oxidase negative, ferment glucose anaerobically.staphylococcistaphylococci链球菌链球菌链球菌（显微镜下示意图）链球菌（电镜照片）链球菌（电镜照片）Streptococcus - facultatively anaerobic or microaerophilic, catalase negative, gram-positive, Cell arranges in pairs or chains, usually nonmotile, A few species are anaerobic rath

6、er than facultative. 电子显微镜下的结核菌电子显微镜下的结核菌 （绿色的就是结核杆菌）（绿色的就是结核杆菌）杆菌杆菌动物宿主细胞感染杆菌濒临死亡 电镜照片链杆菌链杆菌链杆菌链显微镜下的链杆菌显微镜下的链杆菌螺旋菌（螺旋菌（Spirlla) 弧菌 (vibrio) 螺菌（spirllum） 螺旋体(spirochaeta)Vibrio, Spirillum and Spirochetevibriospirillumspirochete显微镜下的螺旋菌 幽门螺旋菌幽门螺旋菌左：显微数码摄像右：结构示意图放线菌的分布与生活方式放线菌的分布与生活方式放线菌一般分布在含量较低；有机物

7、丰富和呈放线菌一般分布在含量较低；有机物丰富和呈微生物碱性的土壤中。微生物碱性的土壤中。 107个个g左右左右能看到：北方春季深层黑土能看到：北方春季深层黑土 地的白丝地的白丝能闻到：泥土特有的能闻到：泥土特有的“泥腥味泥腥味”Chain of conidiosporesAgar surfaceSubstrate myceliumAerial hyphaeVarious types of spore-bearing structures on the streptomyces放线菌的形态结构（模式图）放线菌的形态结构（模式图）气生菌丝孢子丝分生孢子基内菌丝固体基质基内菌丝（Substrate

8、mycelium) 又称营养菌丝，功能是吸收营养，直径 0.2-1.2um长度100600um，色素可有可无。基内基内菌丝菌丝放线菌放线菌气生菌丝（Aerial mycelium) 基内菌丝长到一定时期，长出培养基外，伸向空间的菌丝，直径11.4um, 长短不一，形状不一，颜色较深。 气生菌丝气生菌丝 孢子丝孢子丝(Reproductive mycelium) 当气生菌丝生长发育到一定阶段，气当气生菌丝生长发育到一定阶段，气生菌丝上分化出的可形成孢子的菌丝。生菌丝上分化出的可形成孢子的菌丝。 孢子的形状及在气生菌丝上排列的方式孢子的形状及在气生菌丝上排列的方式随种而异。随种而异。Various

9、 types of spore-bearing structures on the streptomyces放线菌孢子丝类型放线菌孢子丝类型直形弯曲丛生成束单轮生无螺旋 开环钩形原始螺旋形松螺旋 紧螺旋螺旋单轮生无螺旋两级轮生螺旋两级轮生放线菌的菌落形态菌落质地硬而且致密，菌落小而不广泛延伸菌落质地硬而且致密，菌落小而不广泛延伸菌落表面呈紧密的绒状或坚实、干燥多皱。菌落表面呈紧密的绒状或坚实、干燥多皱。接种针难以挑取，有时可挑碎，有时可将整接种针难以挑取，有时可挑碎，有时可将整个菌落挑起。个菌落挑起。细菌电子显微镜照片3、原核生物的细胞大小、原核生物的细胞大小普通光学显微镜下用测微尺测细菌大小

10、细菌细胞的大小细菌细胞的大小细胞的大小是细菌分类特征细胞的大小是细菌分类特征不同细菌细胞大小不同不同细菌细胞大小不同同一细菌的不同菌龄细胞大小不同同一细菌的不同菌龄细胞大小不同细菌细胞大小还与营养等因素相关细菌细胞大小还与营养等因素相关细胞大小的测量结果只是近似值或平均值细胞大小的测量结果只是近似值或平均值Fungi1. Filamentous fungi2. Unicellular fungin菌丝体：由许多菌丝交织在一起而组成。菌丝体：由许多菌丝交织在一起而组成。 n在固体培养基上，真菌菌丝可分为：营养在固体培养基上，真菌菌丝可分为：营养菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝。菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝。 Sporan