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文档简介

1、会计学1聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理分子筛效应：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。电荷效应：电荷量不同，迁移率不同。1.浓缩效应第1页/共10页【实验器材】样品：血清凝胶储备液：1号液：pH8.9 TrisHCl缓冲液+TEMED2号液：Acr + Bis3号液：AP电泳缓冲液 ：pH8.3 的Tris-Gly 缓冲液染色液：氨基黑溶液 脱色剂：冰乙酸 第2页/共10页【实验器材】电泳仪、圆盘电泳槽、电泳玻璃管、青霉素小瓶盖、微量注射器 、长针头注射器

2、、烧杯、移液管、ParaFilm膜。第3页/共10页【实验步骤】1.凝胶的制备 （1）准备工作 ：用ParaFilm膜密封细橡皮塞的一端，塞入放到木质试管架上的小瓶塞中；第4页/共10页（2）制备小孔胶（分离胶） 凝胶浓度: 7.5%1号液号液2号液号液3号液号液第5页/共10页2. 灌胶，装胶灌胶，装胶沿管壁沿管壁无气泡无气泡第6页/共10页3. 加样： 用微量注射器吸取20/50ml 的样品（含溴酚蓝），沿内壁缓慢加入，注意观察样品的状态变化；4. 电泳：负极在上，正极在下，电流调节到2mA/管，开通电源；2min后，电流调节到5mA/管，电泳约1h左右，直到溴酚蓝跑到凝胶底部。第7页/共10页5. 剥胶 第8页/共10页6. 固定与染色：将取下的胶条放入染色液中，在室温下，固定染色10min。7. 脱色：将染色完毕的胶条用自来

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