植物病毒ppt课件

1、病毒病：由病毒引起的病害病毒病：由病毒引起的病害 病毒是一种核蛋白，由于太小，在光学显微镜下见不到，病毒是一种核蛋白，由于太小，在光学显微镜下见不到，只能在活的寄主细胞内完本钱身复制，并具有侵染才干，又只能在活的寄主细胞内完本钱身复制，并具有侵染才干，又称分子寄生物。病毒可侵染动、植物及微生物，可引起人的称分子寄生物。病毒可侵染动、植物及微生物，可引起人的流行性感冒、小儿麻木症、狂犬病、天花和肿瘤等。也能损流行性感冒、小儿麻木症、狂犬病、天花和肿瘤等。也能损害真菌、细菌和菌原体。害真菌、细菌和菌原体。 包括：病毒、类病毒包括：病毒、类病毒病症：植株生长不良，矮化、萎缩、畸形、变色病症：植株生长

2、不良，矮化、萎缩、畸形、变色危害危害: : 病毒总数已超越病毒总数已超越20002000种，其中种，其中1/41/4可危害植物。一种病可危害植物。一种病毒可危害一至几种植物，一种植物可被一至几种病毒侵染。毒可危害一至几种植物，一种植物可被一至几种病毒侵染。病毒是仅次于真菌的第二大病原物。病毒是仅次于真菌的第二大病原物。 病毒为基因工程的研讨提供了资料。病毒为基因工程的研讨提供了资料。 关于植物病毒病害的记载关于植物病毒病害的记载 荷兰郁金香杂色病荷兰郁金香杂色病(1576) 欧洲马铃薯退化病欧洲马铃薯退化病(1775) Dubos(1958)曾描画了当时流行的曾描画了当时流行的“郁金香热郁金香

3、热: 一一株受侵染的球根可以换到数头公牛、猪或者绵羊，几吨株受侵染的球根可以换到数头公牛、猪或者绵羊，几吨谷物，成千磅干酪，甚至一个磨房。一个年青的姑娘以谷物，成千磅干酪，甚至一个磨房。一个年青的姑娘以拥有一只杂色花作为她的嫁妆而感到无比的幸福。拥有一只杂色花作为她的嫁妆而感到无比的幸福。严厉寄生性的细胞内专性寄生物。严厉寄生性的细胞内专性寄生物。真菌病毒一病毒的形状 病毒粒体：形状完好(成熟)的侵染性病毒粒子。 大部分病毒为球状，杆状和线状,少数为弹状,杆菌状和双联体状等。1、球状病毒：直径大多在、球状病毒：直径大多在20-35nm，少数可以到达，少数可以到达70-80nm, 也称为多面体病

4、毒或十二面体病毒，球体构造并不是也称为多面体病毒或十二面体病毒，球体构造并不是光滑的球面，光滑的球面， 而是由很多正三角形有规那么地陈列组而是由很多正三角形有规那么地陈列组合成的，典型的有二十个。合成的，典型的有二十个。2、杆状病毒：为、杆状病毒：为20-80nm100-250nm， 两端平齐，少数两端钝圆。杆状病毒粒体刚直两端平齐，少数两端钝圆。杆状病毒粒体刚直,不易不易弯曲。弯曲。3、线状病毒：为、线状病毒：为11-13nm750nm,个别可达个别可达2000nm以上；以上； 线状病毒的两端也是平齐的，粒体有不同程度的弯曲线状病毒的两端也是平齐的，粒体有不同程度的弯曲。4、弹状病毒：、弹状

5、病毒： 58-240nm18-90nm5、联体病毒：病毒由大小一样的两个近球形粒体组成。、联体病毒：病毒由大小一样的两个近球形粒体组成。1 1、球状病毒：、球状病毒： 球状病毒的构造较复杂，其实并非光滑球状病毒的构造较复杂，其实并非光滑的球体，而是由二十个正三角形组合而成。它的球体，而是由二十个正三角形组合而成。它有二十个面、十二个顶点和三十个边，面、顶有二十个面、十二个顶点和三十个边，面、顶点或边都是对称的。点或边都是对称的。二植物病毒的构造 病毒粒体是由一或多个核酸分子DNA or RNA包被在蛋白或脂蛋白衣壳Capsid里构成的。弹状病毒粒体外面有囊膜包被。 2 2、杆状或线条状植物病毒

6、粒体的中间是螺旋状、杆状或线条状植物病毒粒体的中间是螺旋状的核酸链，的核酸链，外面是由许多蛋白质亚基组成的衣壳，中间是外面是由许多蛋白质亚基组成的衣壳，中间是空管。空管。蛋白质亚基也陈列成螺旋状,核酸链就嵌在亚基的凹痕处。以烟草花叶病毒的粒体为例,每个粒体大致有2100个蛋白质亚基，排成130圈，每圈亚基间隔约2.3nm，每三圈有49个亚基。其粒体直径是18nm，核酸链的直径是8nm。三植物病毒的组分三植物病毒的组分 植物病毒主要成分是核酸和蛋白质，核酸在内部，外部由蛋植物病毒主要成分是核酸和蛋白质，核酸在内部，外部由蛋白质包被，称为外壳。合称为核蛋白或核衣壳。有的病毒粒体白质包被，称为外壳。

7、合称为核蛋白或核衣壳。有的病毒粒体中还含有少量的糖蛋白或中还含有少量的糖蛋白或脂类。脂类。 类病毒那么没有蛋白质外壳，仅为类病毒那么没有蛋白质外壳，仅为RNA的分子。的分子。1、 蛋白质：占粒体分量蛋白质：占粒体分量6090，由多种氨基酸构成多肽链，由多种氨基酸构成多肽链，对核酸起维护作用对核酸起维护作用 病毒的核酸决议了衣壳蛋白的氨基酸组成，蛋白多肽链经病毒的核酸决议了衣壳蛋白的氨基酸组成，蛋白多肽链经过三维折叠构成衣壳的根本构造单位，称作蛋白亚基，多个蛋过三维折叠构成衣壳的根本构造单位，称作蛋白亚基，多个蛋白亚基聚集构成壳基，因聚集的蛋白亚基数目不同，又有二聚白亚基聚集构成壳基，因聚集的蛋

8、白亚基数目不同，又有二聚体、三聚体、五邻体、六邻体。体、三聚体、五邻体、六邻体。 植物病毒有两种根本构造方式：螺旋对称型构造和等面体植物病毒有两种根本构造方式：螺旋对称型构造和等面体对称型构造。对称型构造。 病毒蛋白的抗原决议蔟病毒蛋白的抗原决议蔟 蛋白种类：构造蛋白衣壳蛋白、囊膜蛋白蛋白种类：构造蛋白衣壳蛋白、囊膜蛋白 非构造蛋白复制所需的酶、运动功能蛋白非构造蛋白复制所需的酶、运动功能蛋白 2、 核酸：核酸： 占粒体分量占粒体分量540 ，由多核苷酸构成；核酸是病毒的中心，由多核苷酸构成；核酸是病毒的中心,组成了病组成了病毒的遗传信息组毒的遗传信息组-基因组基因组(genome)，决议病毒

9、的增殖、遗传、变异和致病，决议病毒的增殖、遗传、变异和致病性。性。1植物病毒的核酸类型植物病毒的核酸类型 植物病毒的核酸只需植物病毒的核酸只需RNA或或DNA两种，两种， 按照复制过程中功能的不同，可分为按照复制过程中功能的不同，可分为5种类型：种类型：正单链正单链RNA病毒病毒positive single strand RNA，+ssRNA 单链单链RNA可以直接翻译蛋白，起可以直接翻译蛋白，起mRNA的作用。的作用。70%以上的病毒属于以上的病毒属于此类。如此类。如TMA、CMA、PVX、PVY。负单链负单链RNA病毒病毒negative single strand RNA，-ssRNA

10、 RNA必需先转录成互补链，才干翻译蛋白。必需先转录成互补链，才干翻译蛋白。 如小麦丛矮病毒如小麦丛矮病毒WRDV，弹状，外有囊膜。，弹状，外有囊膜。 双链RNAdouble strand RNA， dsRNA 核酸为互补的双链，其中负链RNA转录出正链RNA，才干作为mRNA翻译蛋白。如呼肠孤病毒、水稻矮缩病毒RDV和玉米粗缩病毒MRDV，粒体为多面体。单链DNA病毒 ssDNA 复制时，单链DNA先合成双链DNA，以常规途径转录mRNA。如双联病毒科。双链DNA dsDNA 为互补双链DNA。 如花耶菜花叶病毒CaMV。植物病毒核酸类型和病毒种类数植物病毒核酸类型和病毒种类数据据ICTVI

11、CTV病毒分类第七次报告统计病毒分类第七次报告统计2核酸的比例 球型粒体病毒 1545%， 线性病毒 56%， 弹状病毒 1%。 3核酸的多分表达象和多分体病毒 植物病毒所特有，仅存在于+ssRNA病毒中。 指病毒的基因组分布在不同的核酸链上，分别包装在不同的病毒粒体里。由于遗传信息分开了，单独一个粒体不能侵染，必需是一组几个同时侵染才干全部表达遗传特性，这种分段的基因组为多组分基因组；含多组分基因组的病毒为多分体病毒。 单分体病毒：指整个遗传信息存在于一条核酸链上，包被在一种粒体中的病毒 如TMV、PVX、PVY双分体病毒：指遗传信息为双组分基因组包被在两种粒体里的病毒， 如烟草脆裂病毒属T

12、obravirus)、蠕传病毒属三分体病毒：指核酸包被在三种粒体中的病毒。 如CMV 、AMV有四条核酸链但被包装在三种或四种粒子中。 4卫星病毒 在某些多分体病毒内发现了小分子量的RNA，与病毒RNA没有同源性，单独不能侵染，要依赖病毒的核酸才干侵染和增殖，这就是sRNAsatellite RNA。 sRNA与它依赖的辅助病毒包在同一衣壳内，能抑制辅助病毒的复制，可以看成是辅助病毒的寄生物，常用于生防和基因工程。3、水分、矿质元素、脂类物质、水分、矿质元素、脂类物质 除核蛋白外，还含有水分，如在芜菁黄花叶病毒的结晶体除核蛋白外，还含有水分，如在芜菁黄花叶病毒的结晶体中，含水量达中，含水量达5

13、8%。 弹状病毒囊膜中含碳水化合物，有的含糖蛋白。弹状病毒囊膜中含碳水化合物，有的含糖蛋白。 有些病毒含多胺，主要是精胺和亚精胺。用于稳定折叠的有些病毒含多胺，主要是精胺和亚精胺。用于稳定折叠的核酸分子；有的含钙、钠、镁离子，稳定核酸和蛋白的结合。核酸分子；有的含钙、钠、镁离子，稳定核酸和蛋白的结合。四、植物病毒的复制和增殖四、植物病毒的复制和增殖 植物病毒的复制要完成核酸的复制和病毒植物病毒的复制要完成核酸的复制和病毒核酸信息的表核酸信息的表达两个过程。达两个过程。一病毒基因组的复制一病毒基因组的复制 从亲代向子代病毒传送核酸性状的过程，从亲代向子代病毒传送核酸性状的过程，即病毒的基因传送即

14、病毒的基因传送 植物病毒与普通细胞生物遗传信息传送的植物病毒与普通细胞生物遗传信息传送的主要不同点是主要不同点是反转录，反转录，RNA-DNARNA-DNA，大部分是由，大部分是由RNARNA直接复制直接复制RNARNA。 寄主细胞要提供场所、原资料、能量、酶、寄主细胞要提供场所、原资料、能量、酶、膜系统。膜系统。 病毒提供膜版核酸、专化的聚合酶。病毒提供膜版核酸、专化的聚合酶。 二植物病毒基因组信息的表达 1、病毒核酸的转录 无论植物病毒含何种核酸，要翻译出蛋白必需经过mRNA过程。+ssRNA可作为mRNA直接运用。其他病毒都需求转录。 DNA病毒需求寄主的转录酶； -ssRNA需求随病毒

15、粒体一同带入的复制酶； dsRNA部分可作为mRNA运用，另外一部分需求转录。这类核酸又被称为双义RNA。2、植物病毒核酸的表达 +ssRNA基因组在真核生物蛋白合成中的五种翻译战略。1亚基因组RNAs战略 由基因组3末端转录产生一到多个亚基因组RNA，从各个亚基因组5端的开放阅读框架翻译出功能性蛋白，如TMV。2多聚蛋白战略 如PVY3多分体基因组战略 如 CMV4通读蛋白战略 如TMV复制酶的翻译5核糖体移码战略 普通RNA病毒翻译产物在4-5种，有得多达9种，包括病毒编码复制酶、衣壳蛋白、运动蛋白、传播辅助蛋白、蛋白酶等，有些产物会与病毒核酸或寄主蛋白聚集起来构成内含体。3、植物病毒的基

16、因组构造及功能 以烟草花叶病毒为例。1基因组构造及表达 TMV为+ssRNA，基因组核酸全长6395个核苷酸，共有5个开放阅读框架。核酸的5端有帽子构造，3端有类似tRNA的构造。2TMV蛋白质 的生物学功能 三植物病毒的增殖 病毒进入活细胞后脱壳，病毒核酸复制，亚基因组核酸翻译出3种蛋白，其中包括衣壳蛋白，然后核酸和衣壳蛋白组成新的病毒粒体。 二病毒的传播 介体传播 非介体传播 病毒均为被动传播，传播间隔普通较短。 从表4-1看出，机械传播和蚜虫传播的病毒属最多， 均在十个属以上。种子、叶蝉、叶甲、线虫、真菌传播5-8个属，飞虱、粉虱、蓟马、螨类和花粉传播的属较少。 甲虫传播的病毒都可以机械

17、传播， 蚜虫传播的病毒大多也可机械传播， 花粉传播的病毒均可种子传播。1、介体传播 植物病毒的介体很多,主要有昆虫、螨类、线虫、真菌、菟丝子等，其中以昆虫最为重要。 知昆虫介体400多种， 其中1/2为蚜虫，1/3为叶蝉。同翅目介体传毒的根本概念 昆虫介体 土壤中的介体介体传毒的根本概念介体传毒的根本概念(1)介体传毒过程可分为几个时期介体传毒过程可分为几个时期: 获毒获毒(取食取食)期是指介体获得病毒所需的取食时间。期是指介体获得病毒所需的取食时间。 埋伏期是指介体从获得病毒到能传播病毒的时间。埋伏期是指介体从获得病毒到能传播病毒的时间。 接毒接毒(取食取食)期期 是指介体传播病毒所需的取食

18、时间。是指介体传播病毒所需的取食时间。 持毒期是指介体能坚持传毒才干的时间。持毒期是指介体能坚持传毒才干的时间。(2) 介体与所传病毒之间的关系：介体与所传病毒之间的关系比较复杂，主要根介体与所传病毒之间的关系：介体与所传病毒之间的关系比较复杂，主要根据病毒能否在虫体内循环、能否增殖以及介体持毒时间长短来划分。病毒经口针、据病毒能否在虫体内循环、能否增殖以及介体持毒时间长短来划分。病毒经口针、前消化道、后消化道，进入血液循环后到达唾液腺，再经口针传播的过程称为循前消化道、后消化道，进入血液循环后到达唾液腺，再经口针传播的过程称为循回回,这种病毒与介体的关系称为循回型关系。这种病毒与介体的关系称

19、为循回型关系。植物病毒与介体昆虫的生物学传毒关系植物病毒与介体昆虫的生物学传毒关系非循回型全是非耐久性的。 蚜虫传非耐久型病毒，飞虱和叶蝉传耐久型病毒。 带毒蚜虫在2-3株健株上取食后，丧失传毒才干；获毒后禁时1小时也丧失传毒才干；饲毒前禁食15-60分钟可提高传毒率。根据介体持毒时间的长短可以分为非耐久性、半耐久性和耐久性三种相互关系。根据介体持毒时间的长短可以分为非耐久性、半耐久性和耐久性三种相互关系。3介体与病毒专化性识别的能够机制 蚜虫的试探取食习性 介体内的专化性持毒位点： 前消化道、口针、后肠壁。与衣壳蛋白专化。 辅助因子：病毒编码的蛋白。昆虫介体昆虫介体 蚜虫蚜虫叶蝉和飞虱叶蝉和

20、飞虱其它昆虫介体还有刺吸式口器的白粉虱、粉蚧，刮吸式口器的蓟马、其它昆虫介体还有刺吸式口器的白粉虱、粉蚧，刮吸式口器的蓟马、咀嚼式口器的甲虫、蚱蜢等等咀嚼式口器的甲虫、蚱蜢等等.土壤中的介体土壤中的介体主要是土壤的线虫或真菌传播病毒主要是土壤的线虫或真菌传播病毒线虫传毒线虫传毒 真菌传毒真菌传毒昆虫介体蚜虫： 可传160多种病毒，马铃薯蚜可传40-50种病毒，桃蚜可传100多种。CMV可由75种蚜虫传播。 非耐久性病毒多在寄主表皮细胞、薄壁细胞或栅状组织中。 半耐久性病毒多在韧皮部内，需求较长的获毒时间。 耐久性病毒有38种，病毒可在介体内繁衍，有的可经卵传。叶蝉和飞虱 在15000种叶蝉中，

21、只需49种是病毒的传播介体； 飞虱亚目中的一部分是传播介体；介体寄主主要是禾本科植物的如水稻矮缩病，小麦丛矮病和玉米粗缩病。 叶蝉和飞虱传播的大多是增殖型病毒，大多终生传毒，灰飞虱传播的小麦丛矮病毒、黑尾叶蝉传播的水稻矮缩病毒可经卵传40代。 白粉虱、粉蚧、蓟马、咀嚼式口器的甲虫、蚱蜢也可传播。土壤中的介体 土壤中的介体主要指线虫和真菌。曾经知道5个属的38种线虫可传播80种病毒。其中多数属于蠕传病毒属和烟草脆裂病毒属的病毒。 传毒真菌主要是油壶菌属、多粘菌属和粉痂菌属的5种真菌，能传播20种病毒。 土壤中的介体传毒间隔有限，主要是由根部侵染，远距离传播主要靠种子和苗木。1，线虫传毒 主要是外

22、寄生性线虫，属于毛线目的长针线虫、剑线虫和拟长针线虫。传播的病毒属于蠕传病毒属和烟草脆裂病毒属。 获毒时间普通为1560分钟，不经潜育即可传毒。病毒粒体被选择性吸附在前消化道，随分泌的唾液一同传给寄主细胞。病毒在线虫体内虽不能复制，但能坚持相当长的时间，有时可长达一年。线虫蜕皮后失去传毒才干。 线虫与所传病毒之间是专化的，毛刺线虫只能传播烟草脆裂病毒，长针线虫科只能传播蠕传病毒属病毒。在种和株系间也表现专化性。2，真菌传毒 油壶菌可传12种病毒，如烟草坏死病毒、莴苣巨脉病毒、黄瓜坏死病毒。 根肿菌目可传17种病毒，如多粘菌传的甜菜坏死黄脉病毒和麦类黄化叶病毒。 菌传病毒可分为耐久性和非耐久性两

23、类。耐久性传毒可经游动孢子传播，如多粘菌和马铃薯粉痂病菌传播的棒状病毒。 锈菌和白粉菌也有传播线虫的报道。2、非介体传播 一机械传播 如烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、黄瓜花叶病毒。 引起花叶病症的病毒或由蚜虫、线虫传播的病毒较易机械传播，黄化型病毒和存在于韧皮部的病毒那么不易。二无性繁衍资料和嫁接传播 病毒都是系统侵染，除植物茎尖外，各部都能带毒。如马铃薯、大蒜、苹果树病毒病等。 嫁接能传播病毒、菌原体和类病毒等。三种子和花粉传播 大约1/5的病毒可以种传。种传的主要危害表如今早期侵染和远间隔传播。 种传病毒的寄主以豆科、葫芦科、菊科植物为多，茄科植物很少。母株早期受侵染，病毒才干侵染花器，病毒

24、进入种胚才干产生带毒种子，仅在种皮或胚乳带毒常不能种传。 种子带毒率变化很大，如大麦条纹花叶病毒可达90%-100%，黄瓜花叶病毒可达1%-50%。 种传病毒大多可以机械传，表现花叶，也可由蚜虫非持久性传播。 随种子成熟度提高，带毒率降低，刚采收的种子带毒率高，储存后逐渐降低。 部分木本植物的病毒可由花粉传播，如桃环斑病毒、悬钩子环斑病毒等。蜜蜂可间接传毒。二病毒在寄主体内的挪动是被动的二病毒在寄主体内的挪动是被动的1细胞间转移：经过胞间连丝，转移慢细胞间转移：经过胞间连丝，转移慢, 810个细胞个细胞d0.01-2mm/d)胞间联丝是细胞间物质运输的通道。内含链管，两个膜之间的胞间联丝是细胞

25、间物质运输的通道。内含链管，两个膜之间的空间约为空间约为5纳米，胞间联丝的分子排阻限是纳米，胞间联丝的分子排阻限是8001000u，病毒，病毒粒体或核酸的分子量在粒体或核酸的分子量在105-6u，是运动蛋白扩展胞间联丝通透，是运动蛋白扩展胞间联丝通透性。性。 另外病毒并不是总以完好粒体方式经过。另外病毒并不是总以完好粒体方式经过。 病毒挪动速度受温度影响，病毒挪动速度受温度影响，普通每小时几个纳米。普通每小时几个纳米。 不同部位病毒含量不一致。不同部位病毒含量不一致。2长间隔挪动：筛管：快速长间隔挪动：筛管：快速转移，转移，0.1-0.5cm/hr 不完全是被动不完全是被动经过韧皮部，甲虫传播

26、的病毒是经过木质部。 挪动速度每分钟几个厘米。 病毒运动蛋白在运动中发扬很大作用。病毒挪动的主流方向是与营养方向一致。六六 植物病毒的分类与命名植物病毒的分类与命名 病毒作为一界，动、植物和微生物病毒实现了科、属、病毒作为一界，动、植物和微生物病毒实现了科、属、种的分类。种的分类。一植物病毒的分类一植物病毒的分类1 1、分类根据、分类根据 核酸类型，链数，粒体核酸类型，链数，粒体有无脂蛋白包膜，病毒形状有无脂蛋白包膜，病毒形状和核酸分段。和核酸分段。 植物病毒共分为15个科，73个属，977个种或能够种。见图4-11。2、分类方法 明确科、属、种的关系，科下为属，属下有典型种、种和暂定种。 病

27、毒类似物 卫星病毒：能编码衣壳蛋白 卫星核酸卫星RNA：不能编码衣壳蛋白，能够是 寄主对病毒侵染产生的一类捍卫性物质。 类病毒：双链环状的RNA，单独能引起侵染。 拟病毒 ：粒体小，属于RNA病毒遗传物质的一部分， 单独不能增殖。 朊病毒：只需蛋白质的侵染因子。3、病毒的株系strain：是病毒种下的变种，具有消费上的重要性。当分别到一种病毒，但还未完全了解其特征、不能确定分类位置时，常称为“分别物或“分别株isolate。二植物病毒的命名 寄主 + 病症 + virus Tobacco mosaic virus TMV Cucumber mosaic virus CMV属名采用缩写，如烟草花

28、叶病毒属为： Tobamovirus 类病毒viroid在命名中采用缩写Vd，如马铃薯纺锤块茎类病毒Potato spindle tuber viroid缩写为PSTVd。八、八、 植物病毒的鉴定原理植物病毒的鉴定原理 鉴定是要确定一种病毒在分类系统中的位置。以前多采鉴定是要确定一种病毒在分类系统中的位置。以前多采用生物学实验方法，如今添加了分子生物学方法和手段。用生物学实验方法，如今添加了分子生物学方法和手段。一生物学实验一生物学实验 用实验方法证明病毒与病害的直接相关性。明确传播方用实验方法证明病毒与病害的直接相关性。明确传播方式、病症类型、寄主范围等。式、病症类型、寄主范围等。 鉴别寄主

29、是必需的。常用机械、嫁接以及菟丝子传播方鉴别寄主是必需的。常用机械、嫁接以及菟丝子传播方式，虫传实验较费事。式，虫传实验较费事。 方法简单，反响灵敏，但任务量大，反复性差。方法简单，反响灵敏，但任务量大，反复性差。 TMVTMV和和CMVCMV在三种鉴别寄主上的反响在三种鉴别寄主上的反响 负染技术：经过重金属盐在样品周围的堆积而加强样品外围的电子密度，是样品显示负的反差。负染色比正染色速度快，分辨率高。 免疫电镜技术。 抗血清三血清学技术 抗血清制备。 琼脂双分散法。 抗原1 抗原2 酶联免疫吸附 enzyme linked immune sorbent assay-ELISA。 灵敏度高、快

30、速、专化性强、反复性好、检测面广。见图4-13。 二电子显微镜技术 电镜运用的是短波电子流，分辨率达10-10nm，比光学显微镜高千倍以上。样品厚度在10100nm。四核酸杂交及PCR技术 血清学是检测蛋白，核酸杂交和聚合酶链式反响PCR是检测核酸。 核酸杂交主要在DNA和RNA之间进展，由于二者之间存在着碱基互补关系。在一定条件下，RNADNA构成异质双链的过程称为杂交。其中预先分别纯化或合成的知核酸序列片断叫做杂交探针，也称为cDNA探针。经过分子杂交可检测出相近病毒间的同源程度。 PCR是体外基因扩增法，可在试管内将所研讨的目的基因或DNA片断在数小时内扩增上百万倍。 PCR反响最重要的

31、是引物普通20个核苷酸长度和Taq DNA聚合酶。反响要经过加热变性-退火结合-DNA合成这一循环。退火温度普通在75度。 PCR可检测特定DNA能否存在。五物理化学等特性 1，稀释限点(DEP)：坚持病毒侵染力的最高稀释度。 2，钝化温度(TIP)：处置非常种使病毒丧失活性的最低温度。 普通在5570C，TMV在97C。 3，体外存活期(LIP)：在室温下，病毒抽提液坚持侵染力的 最长时间。普通在数天到数月。 4，沉降系数S：指病毒在20度水中在1达因的引力下 的沉降速度。单位厘米/秒。 5，光谱吸收特性：260/280紫外线峰值比表示核酸与蛋白 质含量的比值。比值小多为线型。 6，病毒的化

32、学特性：指核酸的类型、核酸的链数以及分子量。九、九、 重要的植物病毒属及典型种重要的植物病毒属及典型种1 1、烟草花叶病毒、烟草花叶病毒TMVTMV 病毒直杆状，直径病毒直杆状，直径18nm18nm，长，长300nm300nm。核酸占。核酸占5%5%，蛋白，蛋白质占质占95%95%。核酸为。核酸为 + ssRNA+ ssRNA。 寄主范围广，传播不需求介体，靠接触传播，有时靠寄主范围广，传播不需求介体，靠接触传播，有时靠种子传播。种子传播。 TMVTMV体外存或期在几个月以上，在枯燥的叶片中可以体外存或期在几个月以上，在枯燥的叶片中可以存活存活5050多年。稀释限点多年。稀释限点10-410-

33、710-410-7，钝化温度，钝化温度90C90C左右。左右。 主要侵染烟草、番茄等作物，引起花叶病。混有病残主要侵染烟草、番茄等作物，引起花叶病。混有病残体的肥料、种子、土壤、烟末都可成为初侵染来源。体的肥料、种子、土壤、烟末都可成为初侵染来源。 干旱少雨发病重，前茬为茄科植物或油菜、萝卜发病干旱少雨发病重，前茬为茄科植物或油菜、萝卜发病重。重。 鉴别寄主是心叶烟和珊西烟，鉴别寄主是心叶烟和珊西烟，区分不同株系要血清学或分子生物区分不同株系要血清学或分子生物学手段。学手段。2、马铃薯Y病毒属及PVY Potyvirus是植物病毒中最大的一个属，含有75个种和93个能够种。属于马铃薯Y病毒科。

34、病毒线状，长750nm，直径11-15nm。主要由蚜虫非耐久性传播，也可经过机械传播。 一切种均产生风轮状内含体。大部分病毒寄主范围限于特定的科，如PVY-茄科、MDMV玉米矮花叶病毒-禾本科，SMV大都花叶病毒-豆科。 病毒为 +ssRNA，核酸占56%。体外存活期24天，钝化温度5065C，稀释限点10-210-6。 主要侵染马铃薯、番茄、烟草等，引起伸展花叶、明脉、斑驳、坏死条斑和脉带花叶等。 PVY在茄科植物和杂草上越冬，以桃蚜和机械方式传播，抗病种类和药剂有一定防效。3、黄瓜花叶病毒属及CMV 此属有3个成员。 CMV粒体球形，直径28nm。为三分体病毒，核酸占18%。 已发现CMV

35、有卫星RNA存在。 寄主范围广泛，67科470种植物，被称为“流感性病毒，不同株系在外形上有差别。 花叶是根本病症，在番茄上表现厥叶。最好的繁衍寄主是烟草和黄瓜，部分枯斑寄主为苋色藜、昆诺藜和豇豆。 75种蚜虫均能传毒，主要为棉蚜和桃蚜，非耐久性传毒，也可机械传播或由种子传播。野生寄主是初侵染来源。 在消费上难于防治。主要是寄主范围广，介体多，传毒效率高，无抗性种类。4、南方菜豆花叶病毒SBMV 病毒球形，直径30nm。核酸占21%，为 +ssRNA。 主要引起菜豆和豇豆的花叶和斑驳病。 传播介体是甲虫。 病毒体外存活期20165天，钝化温度9095C，稀释限点10-510-6。 株系分化明显

36、，菜豆株系不侵染豇豆，豇豆株系不侵染菜豆；在有些种类上表现部分坏死斑，有些种类上病症较轻。 叶甲获毒时间124小时，保毒时间214天，甲虫活动范围大，传毒快。 种子带毒率可达34%，调种时应加强检疫。5、蠕传病毒属及TRSV 典型种为烟草环斑病毒Tobacco ringspot virus-TRSV寄主主要是果树，主要由线虫传播，也可经过种子、机械传播。 有两条 +ssRNA核酸基因组。病毒球状，与线虫之间的关系相当专化。病毒在线虫体内存活时间很长，但不能扶植。 体外存活期610天，钝化温度5565C，稀释限点10-4。在烟草、黄瓜上引起环斑。可在多种多年生植物及种子上越冬。 汁液、甲虫和蓟马也可传播。6、黄症病毒属及BYDV 此属有16个种和14个能够种，典型种为大麦黄矮病毒，仅