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1、会计学1基因转染技术及其应用简介基因转染技术及其应用简介第1页/共50页一、基因转染简介一、基因转染简介第2页/共50页第3页/共50页第4页/共50页第5页/共50页A.限制酶切除限制酶切除 a.从原核基因组DNA制备视原核基因组物理图谱已知或未知，克隆方法不同。 b. 从真核基因组从真核基因组DNA制备制备 c.从已克隆的从已克隆的DNA片段制备片段制备第6页/共50页第7页/共50页第8页/共50页第9页/共50页第10页/共50页第11页/共50页第12页/共50页粘端连接方法要点粘端连接方法要点平端连接方法要点平端连接方法要点单酶单切点单酶单切点 防自身环化，希望防自身环化，希望定向

2、插入；定向插入；双酶双切点双酶双切点 定向克隆，构建表定向克隆，构建表达载体的最好用此法；达载体的最好用此法；利用同裂解酶产生相同粘端。利用同裂解酶产生相同粘端。平端，平端连接；平端，平端连接；Linker连接酶切产生粘端连接；连接酶切产生粘端连接；Adaptor衔接目的基因和载体；衔接目的基因和载体；同源同聚尾同源同聚尾，克隆，克隆cDNA的最好方法的最好方法T载体，载体，PCR产物产物T/A克隆法连接。克隆法连接。第13页/共50页第14页/共50页第15页/共50页(二二)基因转染真核细胞的基本方法基因转染真核细胞的基本方法第16页/共50页第17页/共50页第18页/共50页第19页/

3、共50页第20页/共50页第21页/共50页第22页/共50页第23页/共50页第24页/共50页第25页/共50页第26页/共50页第27页/共50页第28页/共50页第29页/共50页第30页/共50页第31页/共50页第32页/共50页第33页/共50页第34页/共50页第35页/共50页37第36页/共50页第37页/共50页第38页/共50页第39页/共50页Double-stranded RNAinjectC. elegansNeg. control UninjectedAntisense RNA dsRNAsenseantisenseNature 1998, 391:806-811Mex-3 mRNA detection in embryos by in situ hybridization第40页/共50页第41页/共50页第42页/共50页第43页/共50页第4

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