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文档简介

1、会计学1蛋白质多肽链氨基酸序列的测定蛋白质多肽链氨基酸序列的测定化学法 二硝基氟苯法（DNP法）二甲基氨基萘磺酰氯法（Dansyl-氯法）肼解法还原成氨基醇法酶解法亮氨酸氨肽酶法细胞外氨肽酶法 羧肽酶A法羧肽酶B法羧肽酶C法羧肽酶来源专一性CpA胰脏能释放除Pro、Arg、Lys外的所有的C-端氨基酸CpB胰脏主要水解C-端为Arg、Lys的肽键CpC植物或微生物相当广泛，几乎能释放C-端的所有氨基酸水解酶或化学试剂水解部位作用的氨基酸胰蛋白酶羧基侧赖氨酸、精氨酸胰凝乳蛋白酶羧基侧芳香族氨基酸（苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）溴化氰羧基侧甲硫氨酸水解后得到的肽段，可用离子层析或其他层析方法将其分离纯

2、化。比如用双向电泳可以得到肽图，由此可知肽段的多少。萃取：将该衍生物用有机溶剂（例如氯丁烷）从反应液中萃取出来，而去掉了一个N-端氨基酸残基的肽仍留在溶液中。转化：萃取出来的噻唑啉酮苯胺衍生物不稳定，经酸作用，再进一步环化，形成一个稳定的苯乙内酰硫脲（PTH）衍生物，即PTH-氨基酸。 Edman降解法测序每次只能测定几十个氨基酸残基，所以要测定较大蛋白质的氨基酸序列，需要将其降解为一些肽段，经HPLC分离出各个肽段，然后再进行Edman降解测序。 肽段经过分离纯化后，即可进行氨基酸测序。但是获得数据之后，还不能得出整条多肽链的氨基酸排列顺序，因为尚不清楚这些片段在多肽链中的先后次序。一般需要

3、用到多种水解法，并分析出各肽段的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中的氨基酸序列。 多肽 氨基酸序列重叠法：小片段重叠的原理主要用于一级结构的测定 基因组测序,为了破译遗传密码.现在密码已破,那进行蛋白质组测序有必要吗? 基因研究贯穿了整个20世纪,100多年里,双螺旋结构的提出,中心法则的发现,直至基因组的重大突破,使基因研究达到了前所未有的深度与广度. 然而,基因只是信息的携带者,蛋白质才是执行者.基因组计划有其固有的局限性,基因组测序是否正确,要从其表达的蛋白来验证,否则,只是一堆乱码而已.3.5万左右基因中一半以上是理论推断,需要从蛋白质角度确认.而且,从蛋白质研究的自

4、身发展来看,我们无法逃避蛋白质组表达谱分析,只是时间问题而已. 以前,对蛋白质的研究是优于基因的,因为PCR,测序自动化使其发展猛.80年代末,Hillen Kamp发展的激光解析质谱,Fem J设计的电喷雾质谱可以高效,精确的测量生物大分子的质量,并测定部分序列,进而用于数据库的检索.Mann M等再此基础上通过建立肽质量指纹图谱与肽序列标签等技术实现了质谱对蛋白质进行大规模准确快速自动化的测序. 结构生物学是生命科学领域又一个新的研究热点，飞速发展的蛋白质结构分析技术是研究蛋白质功能的基础。随着蛋白质组时代的来临，许多基因组分析留下的悬而未决的问题，可能通过直接的蛋白质的分离和鉴定而得到解决。 化学法 二硝基氟苯法（DNP法）

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