还原糖含量的测定

1、编辑ppt1实验六实验六还原糖和总糖含量的测定还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）二硝基水杨酸比色法）编辑ppt2目的目的通过本次实验，掌握还原糖定量测定的基通过本次实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作，熟本原理，学习比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度计的使用方法。悉分光光度计的使用方法。编辑ppt3原理原理还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖。乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀原糖。乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。还原糖的测定是糖定量

2、测粉是非还原糖。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法，其基本原理是定的基本方法，其基本原理是用比色法对用比色法对还原性的单糖进行测定还原性的单糖进行测定，再分别求出样品，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。含量计）。编辑ppt4在碱性条件下，还原糖与在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨二硝基水杨酸试剂（酸试剂（DNS）共热，）共热，3,5-二硝基水杨酸被二硝基水杨酸被还原为还原为3-氨基氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。在一定范围内，还原糖的

3、量与棕红色物质在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线并计算，就可以分别求出样查对标准曲线并计算，就可以分别求出样品中还原糖和总糖的含量。品中还原糖和总糖的含量。编辑ppt5编辑ppt6操作步骤操作步骤1、绘制葡萄糖标准曲线、绘制葡萄糖标准曲线编辑ppt7将以上各管将以上各管上下颠倒几次使溶液混匀上下颠倒几次使溶液混匀后，后，按顺序倒入比色杯中，在按顺序倒入比色杯中，在540nm波长条件波长条件下进行比色测定：用下进行比色测定：用0号管溶液调零点，分

4、号管溶液调零点，分别记录各管吸光值；然后以葡萄糖浓度为别记录各管吸光值；然后以葡萄糖浓度为横坐标，横坐标，为纵坐标，绘制出标准曲线。为纵坐标，绘制出标准曲线。编辑ppt82、测定样品中还原糖和总糖含量。、测定样品中还原糖和总糖含量。（1）提取样品中的还原糖：）提取样品中的还原糖：准确称取准确称取1g食用面粉放置于食用面粉放置于100ml三角瓶三角瓶中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml蒸馏水，摇匀，置于蒸馏水，摇匀，置于50水浴条件下水浴条件下20分分钟，使还原糖浸出；在钟，使还原糖浸出；在4000rpm、5分钟条分钟条件下进行离心，得到的上清液倒入件下进行离

5、心，得到的上清液倒入100ml容容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，上下颠倒上下颠倒几次几次将溶液混匀，作为还原糖待测液。将溶液混匀，作为还原糖待测液。编辑ppt9（2）提取样品中的总糖：）提取样品中的总糖：准确称取准确称取0.1g食用面粉放置于食用面粉放置于100ml三角三角瓶中，加入瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及及15ml蒸馏蒸馏水，沸水浴水，沸水浴30分钟（分钟（注意不能把水烧干注意不能把水烧干）。）。用滴管吸取用滴管吸取12滴水解液于白瓷板上，加滴水解液于白瓷板上，加1滴滴I-KI溶液，如显示出蓝色说明水解不完全，溶液，如显示出蓝色说明水解不完全，可适

6、当延长沸水浴时间；若不显蓝色，则可适当延长沸水浴时间；若不显蓝色，则说明水解完全。说明水解完全。编辑ppt10待水解液冷却至室温后加入待水解液冷却至室温后加入1滴滴酚酞指示酚酞指示剂，用剂，用6mol/L NaOH中和至微红色，在中和至微红色，在4000rpm、5分钟条件下离心，得到的上分钟条件下离心，得到的上清液转移到清液转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，容至刻度，上下颠倒几次上下颠倒几次混匀溶液，作为混匀溶液，作为总糖待测液。总糖待测液。编辑ppt11（3）显色和比色，按下表操作）显色和比色，按下表操作编辑ppt12结果处理结果处理以以1、2号管的吸光值，分

7、别在标准曲线号管的吸光值，分别在标准曲线上查出相应的还原糖上查出相应的还原糖毫克数毫克数。按下列公式。按下列公式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：编辑ppt13注意事项注意事项1、标准曲线制作与样品含糖量测定应、标准曲线制作与样品含糖量测定应尽量同时进行尽量同时进行，一起一起显色和比色显色和比色。2、实验过程中所有的试管要、实验过程中所有的试管要洁净洁净，加入各种试剂量要准确。，加入各种试剂量要准确。3、试剂、试剂不可倒出试剂瓶不可倒出试剂瓶，必须必须用干净的移液管吸取，用后用干净的移液管吸取，用后盖好瓶塞，放回原处。盖好瓶塞，放回原处。4、移液管使用：有色、移液管使用：有色看外边缘看外边缘，无色，无色看中间凹处看中间凹处。5、沸水浴：、沸水浴：须等水沸腾后须等水沸腾后，才能将要加热的物品放入锅中；，才能将要加热的物品放入锅中；时刻注意锅内的水，时刻注意锅内的水，防止烧干防止烧干。6、每组同学离开实验室时，必须经实验老师检查并