注射口蹄疫Ｏ型－亚洲Ｉ型双价灭活疫苗畜体抗体消长实验报告.doc

1、注射口蹄疫型亚洲型双价灭活疫苗畜体抗体消长实验报告随着人们生活水平的不断提高，肉类食品在人们的饮食结构中占的分量越来越大，养殖业的发展也越来越快，但家畜疫病也频繁发生，对养殖业造成的危害很大，有些疫病甚至是毁灭性的。这两年随着防疫监督体系的完善和加强，主要依靠增加防疫次数来控制疫病的发生。我区牛羊年进行三次口蹄疫O型-亚洲I型双价灭活疫苗免疫，一是给国家造成巨大的经济负担，二是给基层工作人员增加了劳动强度。本实验通过春、夏、秋三季家畜口蹄疫抗体水平监测，以确定家畜注射疫苗后体内抗体的增消情况，为科学制定防疫计划提供依据。1实验材料与方法1.1实验设计本实验在我区果园、银达、三墩三乡镇进行，选择

2、饲养周期较长的牛羊作为实验对象。每年春季防疫结束一个月，分别采集这三个乡镇选定的牛羊血清（亲自注射疫苗，佩带免疫标识），监测一次抗体水平，夏季防疫不注射疫苗，只采集血清监测抗体，秋季防疫前（不注射疫苗）再采一次血，测定抗体水平。通过比较，分析p 家畜体内抗体水平变化。供试家畜：春季防疫一个月后采集样本，果园乡采集牛血样6份，羊血样6份；银达镇采集牛血样6份，羊血样5份；三墩镇采集牛血样3份，羊血样5份。夏季未注射疫苗，果园乡采集牛血样6份，采集羊血样1份；银达镇采集牛血样5份，羊血样2份；三墩镇采集牛血样3份，羊血样4份。秋季打防疫针之前采集血样，果园乡采集牛血样5份；银达镇采集牛血样5份，羊

3、血样2份；三墩镇采集牛血样1份，羊血样3份。1.2 实验方法本实验采用免疫抗体检测液相阻断ELISA法，通过预先滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被了口蹄疫型特异型抗体ELISA中，没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获，亦与随后加入的豚鼠抗血清中的抗体结合，再通过免抗豚鼠IgG酶结合物和底物溶液显色。按实验孔呈现的颜色与抗原对照（未加血清）孔呈现颜色相比较，判定结果。抗体滴度以能阻断50病毒抗原的血清稀释度表示。1.3实验试剂与器材1.3.1主要试剂捕获抗体：口蹄疫病毒免抗血清；检测抗体：口蹄疫病毒豚鼠抗血清；酶结合物：免抗豚鼠

4、IgG-辣根过氧化物酶结合物；病毒抗原与病毒对照抗原：用BEI灭活的病毒细胞培养物；标准阴性、阳性血清；底物溶液：邻苯二胺（OPD）/双氧水（H2O2）溶液；终止液：1.25mol/l硫酸溶液（H2SO4）；缓冲液：包被缓冲液：0.05mol/l碳酸钠（Na2CO3）/碳酸氢钠（NaHCO3），pH9.60；稀释液：0.05吐温-20（Tween-20）加入0.01mol/l PBS，pH7.40（PBST）；豚鼠抗血清稀释液：5脱脂奶粉-PBST；洗涤液：0.01mol/l PBST，pH7.40。1.3.2主要仪器材料 ELISA板：96孔平底聚苯乙烯ELISA板； 抗原抗体反应板：96孔

5、U型聚丙烯微量板； 移液器：0.5020ul、540ul、5020_ul、20_1000ul可调移液器各把，8道或12道可调移液器把，移液槽56个，配套枪尖若干； 可调恒温培养箱台； 酶标仪：492波长滤光片； 吸水纸巾2结果分析p 2.1结果判定2.1.1牛、羊O型血清抗体效价与保护力的关系：抗体效价大于等于1：128，99以上保护；效价小于等于1：16不保护；效价在1：2290之间，50保护。2.1.2牛、羊亚洲I型血清抗体效价与保护力的关系：抗体效价大于等于1：128，99以上保护；效价小于等于1：16不保护；效价在1：2290之间，50保护。2.2结果分析p 从监测结果来看，第次检测是

6、在4月30日，注射疫苗时间为3月17日。O型抗体水平：共检测15份牛血样本，全部达到99保护；15份羊血样本，10份样本达到99保护；4份样本50保护；1份样本没有保护率。亚洲I型抗体水平；共检测15份牛血样本，全部达到99保护；共检测15份羊血样本，11份样本达到99保护；4份样本50保护；抗体滴度小于1：16的没有。第次监测是在7月11日，没有注射疫苗。O型抗体水平：14份牛血样本，全部达到99保护；7份羊血样本，6份样本达到99保护；1份样本50保护；没有保护率的没有。亚洲I型抗体水平：14份牛血样本，11份样本达到99保护；2份样本50保护；1份样本没有保护率。第次监测是在秋季防疫前，

7、采血日期10月15日。 O型抗体水平：9份牛血样本，全部达到99保护；羊血样本4份，1份样本99，其余3份样本50；没有保护率的没有。亚洲I型抗体水平：9份牛血样本，5份99保护；3份50保护；1份不保护。羊血样本4份，1份样本99保护；1份样本50保护；2份样本不保护。3小结与讨论从这一年的监测中可以看出，牛在注射疫苗后，畜体产生的抗体较高。第次监测O型抗体，100的牛抗体水平达到有效保护。第次监测,抗体水平依然维持在第次监测的水平,仍在有效保护范围之内,100保护。第次监测,也是100保护,抗体滴度1:128。羊在注射疫苗后,第次监测,94达到100保护,第次监测,86达到100保护。第次

8、监测只能达到25保护。亚洲I型抗体第次监测，牛100全部保护，羊73达到100保护。第次监测，牛79保护，羊57保护。第次监测，牛56保护，羊25保护。从以上分析p 中可以看出，牛对口蹄疫疫苗比较敏感，产生抗体较高，在第次监测时，都能达到1：128，第次监测，抗体水平仍很高，1：128；第次监测时已距注射疫苗由6个月时间，抗体仍较高，这说明抗体在畜体内维持时间较长。羊就不如牛，第次监测，抗体较高，间隔3个月，抗体就有所下降，86保护，间隔6个月，抗体已经降的很低，只有25保护。还可以看出，经多次注射疫苗的家畜，体内抗体较高，维持时间也较长。还有一个问题就是同时注射的是口蹄疫O型-亚洲I型双价灭活疫苗，大多数的家畜两种抗体都高，但也有个别家畜O型抗体高，达到1：256；而亚洲I型抗体