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1、会计学1常见的生化与分子生物学技术大串讲常见的生化与分子生物学技术大串讲电泳法分离三种不同的氨基酸电泳法分离三种不同的氨基酸透析方法示意图透析方法示意图超滤方法示意图超滤方法示意图 表表1 1 主要的层析方法及其原理主要的层析方法及其原理名称分离原理吸附层析各组份在作为固定相的固体吸附剂表面的吸附能力不同分配层析各组份在流动相和静止液相(固定相)中的分配系数不同离子交换层析固定相是离子交换树脂,各组份因所带电荷状况不同与离子交换树脂的亲和力不同凝胶层析固定相为多孔凝胶,各组份的分子大小不同,因而在通过凝胶时受阻滞的程度不同疏水层析固定相为带有强疏水基团的树脂,各组分的疏水性不同,导致其与树脂的
2、结合能力不同亲和层析固定相只能与一种待分离组份专一结合,以此达到和无亲和力的其它组份分离的目的离子交换树脂分离氨基酸离子交换树脂分离氨基酸分子筛示意图分子筛示意图亲和层析示意图亲和层析示意图等电聚焦需要在凝胶中加入两性电解质,以在阳极和阴极之间建立递增的pH梯度,处在其中的蛋白质分子在电场的作用下迁移,最后各自移动到并聚焦于与其pI相当的pH位置上。于是通过等电聚焦,不仅可以实现pI不同的蛋白质之间的分离,而且还可以测定出各种蛋白质的pI蛋白质的双向电泳蛋白质的双向电泳表表2 各种印迹技术各种印迹技术印迹类型 转移到膜上的分子探针获得的信息Southern DNA片段 放射性标记的互补RNA或
3、DNA 基因结构等 Northern RNA放射性标记的互补RNA或DNA特定RNA的大小、分布和含量Western 蛋白质 一级抗体和与酶偶联的二级抗体 特定蛋白质的大小、分布和含量WesternWestern印迹印迹使用基因芯片对正常细胞使用基因芯片对正常细胞和癌细胞进行基因表达分析比较和癌细胞进行基因表达分析比较miRNA的产生和作用机制的产生和作用机制siRNAsiRNA的产生和作用机制的产生和作用机制实例实例离子交换树脂分离氨基酸离子交换树脂分离氨基酸等电聚焦需要在凝胶中加入两性电解质,以在阳极和阴极之间建立递增的pH梯度,处在其中的蛋白质分子在电场的作用下迁移,最后各自移动到并聚焦于与其pI相当的pH位置
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