食品中菌落总数的测定实验

1、食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理 , 掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法 5 认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分 分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每 个 单 细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落， 即一个单菌落应代表原 样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可 换 算出样品中的含菌数。 但是，由于待测样品往往不易完全分散成 单个 细胞， 所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平 板菌落计 数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，

2、现 在已倾向使 用菌落形成单位 (colony-forming units, cfu) 而不以绝对菌落 数来表示样品 的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而 且 测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以 获得 活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水 等含菌 指数或污染度的检测三、试剂和材料4 ? 仪器恒温培养箱： 36 C 士 1 C, 30 C 士 1 C。均质器或振荡器无菌吸管： 1 ml 0.01 ml 刻度、 10ml 0.1 ml 刻度或微量 移液器及吸头无菌锥形瓶：容量 250 ml 、500 ml 、 无菌培

3、养皿：直径 90 mm 菌落计数器2 ? 样品1 平板计数琼脂 plate count agar ，PCA 培养基：蛋白豚 5.0 g 、 酵母浸膏2.5 g、葡萄糖1.0 g、琼脂15.0 g 蒸馆水1 000 ml、pH 7.0 ±0.2。将所有成分加于蒸馆水中，煮沸溶解，调节 pH 分装试管或锥形瓶 -121 C 高压灭菌 15 min o 注： 用平板 计数琼脂，称取 23.5 g 于 1 000 ml 蒸镭水中，加热煮沸至完全溶解 ，121 C 高压灭菌 20min ，冷却至 45-47C 左右备用。2 无菌生理盐水：氯化钠 NaCI 5.875g 蒸憾水纯洁水 500ml

4、 称取 5.875 g NaCI 溶于 500ml 蒸馆水中， 121 C 高压灭菌 20min 。3?器材100ml 无菌水、 9ml 无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、操作及实验步骤1 ?样品的稀释：25 g ml样品+225 ml稀释液，均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用 1次1 ml无菌吸管或吸头。注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面选择2个？ 3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 ml分别参加无菌培养皿内。吸取 1 ml空白稀释液 作 空白对照。每皿中参加15 ml? 20 ml平板计数琼脂培养基，并 转动平 皿 使其混合均匀。2?培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 C培养48 h 士 2 h。水 产品30 士 1 C培养72 h 士 3 h ° 如果有弥漫生长的菌落时，可 在凝 固后的 琼脂外表覆盖一薄层琼脂培养基约 4 ml ，凝固后翻转平 板。3.菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量菌落计数以菌落形成单位(col ony-formi ng un its,CFU表小。+ 0.1 n2 ) d五、计算公式：式中：N样品中菌落数；刀C-平板含适宜范围菌落数的平板菌落数之和 ;n1 第一稀释度低稀释倍