浅谈食品微生物检验中的无菌操作

1、    浅谈食品微生物检验中的无菌操作    吴同辉摘 要：在整个食品微生物检验流程中，无菌操作贯穿始终。正确进行无菌操作，就能够得到反映食品卫生质量的准确数据，如果任一环节未做到无菌操作，就会使得检验结果失真，检验也就失去意义。同时，操作人员在检验时，要注意防范不当的操作带来的微生物污染。关键词：食品安全；无菌室；微生物检验；无菌操作1.前言近年来，食品微生物污染越来越被人们所关注，由此引发的一系列食品安全问题被提到议程。如何保证食品的安全性，笔者认为除了加大对工厂安全监管外，食品微生物检验必不可少。根据食品安全国家标准食品微生物学检验总则gb 478

2、9.1-2010，检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检。这一规定对于食品微生物检验的要求更加严格。因此要保证检验结果的准确性，就必须确保在食品微生物检验过程中做到无菌操作。无菌，是指环境中不存在保证生命活动的营养细胞的状态。而无菌操作，指的是采用无菌器材进行植物组织、细胞传代、细胞接种等培养操作，防止微生物进入无菌范围1。要保证食品微生物检验中的无菌操作，就必须做到环境无菌、仪器无菌、培养基无菌、人员无菌、操作无菌2。下面就谈谈食品微生物检验中无菌操作需要注意的这几个方面。2.食品微生物检验中的无菌操作2.1食品微生物室环境的无菌微生物操作大多是在无菌室进行的，因此保证无菌

3、室环境的无菌是十分重要的。2.1.1无菌室的灭菌无菌室在每次使用前，打开室内的紫外灯照射约30分钟，就能保证室内空气、墙壁表面基本无菌。为了增强灭菌效果，在紫外灯打开之前，向无菌室中喷洒5%的石碳酸溶液，能够使部分微生物沉降并杀死。此外，定期對无菌室按照每立方米福尔马林体积数（ml）与高锰酸钾克数2：1的比例进行福尔马林-高锰酸钾熏蒸3，能够最大程度杀灭无菌室中的微生物，保证室内环境无菌。微生物检验完毕后，操作人员离开无菌室，需再打开无菌室内的紫外灯照射30min后关闭。2.1.2无菌室无菌程度的检查操作人员于无菌室几个关键位置，放置无菌营养琼脂培养皿，打开皿盖15min后盖好，置于37的生化

4、培养箱中培养24-48h，如果每个培养皿中菌落总数不超过1个，说明无菌室无菌程度良好，反之，则需要对无菌室进一步灭菌。2.2食品微生物室仪器的无菌微生物室中所有操作都要通过仪器来实现。因此仪器的无菌是整个微生物检测是否准确的关键。2.2.1设备的无菌微生物无菌操作一般是在超净工作台中进行，工作台在每次使用之前，需要打开风机，紫外灯照射20min。工作台台面可以用75%的酒精或0.1%新洁尔灭溶液擦洗。操作结束后，需打开工作台紫外灯照射20min后关闭。生化培养箱、霉菌培养箱、二氧化碳培养箱等是用来培养细菌、霉菌、酵母等菌群的主要工具，需要经常对箱体内部消毒灭菌，以防止培养物受到污染，影响实验结

5、果。此外，电子天平、均质器、水浴锅、显微镜等设备都需要定期进行清洁灭菌。2.2.2器具的无菌对于待灭菌的培养皿，需要用牛皮纸或报纸包好后，于121下灭菌30min，然后置于80左右的烘箱中，烘干后置于超净工作台灭菌后使用。新购买的培养皿需用2%的盐酸浸泡3h后，清洗再灭菌。带菌的培养皿121下灭菌30min后，清洗干净后灭菌。检验剩余未用的培养皿不能重复使用，需再次灭菌4。接种环、镊子等金属工具，需将接触培养基的部分在酒精灯外焰灼烧至红后，方可使用。l棒使用前应浸泡于75%的酒精中，使用时取出于酒精灯外焰灼烧灭菌。对于乳胶塞、胶头、试管架等实验工具，一般采用75%的酒精擦拭或者化学药品喷洒灭菌

6、。2.3食品微生物室中培养基的无菌培养基的质量是微生物质量控制的关键，关系到微生物检验结果的准确与否，而培养基的无菌则是培养基质量控制的重点。2.3.1培养基用水要求培养基用水用蒸馏水，或者经渗透处理的无菌、无干扰剂、无抑制剂的水5。2.3.2生化试剂要求微生物室所使用的生化试剂，其生产厂家必须是国家卫生部认可的企业， “三证”齐全 6。每批培养基接收后在使用前，需要进行质量验证，只有符合质量要求的生化试剂方可使用。2.3.3配置好的培养基灭菌对于需要高压蒸汽灭菌的培养基应先于水浴锅内预热，加热煮沸后根据该微生物室中高压蒸汽灭菌锅既定的灭菌工艺，设定相应的灭菌时间，灭菌锅设定的工作温度和时间一

7、般为121 15min，灭菌效果可以用化学指示胶带或生物指示剂进行检测5。对于某些特定的培养基，高压蒸汽灭菌会破坏其有效成分，只能煮沸灭菌。此外，有些培养基需采用过滤除菌的方式进行灭菌。2.4食品微生物室人员的无菌操作人员除了具备扎实的业务技能外，树立正确的无菌观念也是至关重要的。操作人员进入无菌室前，在缓冲间内要更换白大褂、工作鞋、帽、戴口罩，在风淋室要风淋，并且用75%的酒精进行手部消毒，严格保证自身的净化，做好个人卫生工作，禁止吸烟7。无菌室仅限操作人员进入，辅助人员可以再无菌室外通过物流窗进行观察或协助。2.5食品微生物室操作的无菌操作人员进出无菌室要随手关门，避免杂菌随空气流入无菌室

8、，保证室内的洁净无菌。操作人员在无菌室操作时，切勿交谈。同时应避免不必要的走动，动作要轻，幅度要小，缩短样品在空气中暴露的时间，并尽量缩短在无菌室内的操作时间，能在微生物室准备间进行的工作，应避免在无菌室内进行。当发生操作污染时，操作人员应立即将浸泡于5%石碳酸溶液中的抹布完全覆盖污染物，防止污染物扩散。实验用品应通过物流窗传递。操作完成后，操作人员应用75%酒精擦拭工作台台面，并及时清理使用过的废物并进行灭菌。此外，操作人员应将无菌操作记录及时进行登记。3.结语微生物检验是食品安全的保障，无菌操作则是微生物检验的重要环节。没有绝对的无菌，只有相对的无菌。操作人员在进行微生物检验时，一定要树立

9、无菌操作观念，规范无菌操作程序，才能保证检验流程顺利完成。同时，操作人员要根据实际需要，合理运用无菌操作技术，避免在微生物检验中，引入杂菌，影响检验结果的真实性、准确性。参考文献1 肖巍.食品微生物检验中无菌操作技术研究j.科技资讯.2014，12（14）：40-42.2 颜松.食品微生物无菌室的内部质量控制分析j.质量技术监督研究.2013， （6）：37-40.3 刘刚，秦菊萍，李宏英.禽舍熏蒸消毒的方法及注意问题j.中国动物保健.2011，13（1）：52.4 杨小山，陈天舒.食品微生物检测中无菌条件的保持及几种常用检测方法的比较研究j.安徽农业科学.2013，41（6）： 2666-2721.5 王绥家，黄宏星.微生物实验室培养基的质量控制j.检验医学与临床.20