20156340050-董霞

1、潍坊医学院实验报告科目：食品理化检验班级： 2015 级组别： 12 姓名：董霞学号： 20156340050 试验项目：克伦特罗检测（ elisa检测法）日期： 2018.05.03一、实验目的：1、通过本次试验同学们能够掌握elisa法检测瘦肉精的原理2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快速检测的基本技能。二、实验原理：间接竞争 elisa方法1、在酶标板孔条上预包被克伦特罗抗原，2、 加入抗克伦特罗抗体， 样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，3、加入酶标二抗后，用 tmb 底物（标记物为辣根过氧化物酶）显色。4、样本吸光值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标

2、准曲线比较再乘以其相对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。三、实验主要仪器设备：克伦特罗 elisa检测试剂盒（深圳市绿诗源生物技术有限公司）、微孔板酶标仪450/630nm、电子称（ 0.01g）、漩涡混合振荡器、离心机（15ml管和 1.5ml ep 管）、恒温培养箱四、实验步骤：1、样品前处理组织用剪刀剪碎，研钵内研成匀浆，取2g肉/ 肝脏匀浆放入 15ml离心管中 加入 6ml去离子水，充分震荡 2min，室温 4000r/min 以上离心 10分钟，（注若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85水浴 10min后再离心。） 取 20ul 上层液进行分析，样本稀释4 倍。2、

3、分析微孔板编号 ， 如 1-12 号标准品， 13/14 号样品等 ( 每样品或标准品均做平行对照即各2 孔) 加标准品 / 样品： 微孔中加入 20ul 样品或标准品 +50ul克伦特罗酶标物 +80ul 克伦特罗抗试剂，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25避光 30min 洗板： 孔内液体甩干，用去离子水液300ul/ 孔，充分洗涤 5 次，每次间隔 30s，用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳破）显色： 每孔加入 50ul 底物a+50ul底物b，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25避光 15-20min（蓝色）测定： 加入 50ul 终止液（黄色），轻轻振荡混匀。酶标仪450nm/630nm

4、 双波长检测 od 值（可在加入终止液前目测含量）。五、实验结果及计算：表 1 瘦肉精浓度与吸光度浓度（ppb）0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 ?样品 1 ?样品 2 吸光度 1 2.387 1.815 1.326 0.708 0.281 0.134 2.091 1.317 吸光度2 2.491 1.564 0.840 0.691 0.321 0.123 2.033 1.234 平均值2.439 1.690 1.083 0.700 0.301 0.129 2.062 1.276 吸光度值百分比（%） 69.2944.4 28.70 12.34 5.29 84.54 52.32 说明

5、： 在 0.1ppb 和 8.1ppb 偏差太大，所以删除样品 1：把吸光度值百分比y=84.54%，x=exp(26.943-84.54)/14.59)，得?1=0.019ppb, 则样品一的浓度为： 4*0.019=0.076ppb, 也就是 0.076ug/kg 样品 2：把吸光度值百分比y=52.32%，x=exp(26.943-52.32)/14.59),得?2=0.176ppb，则样品二的浓度为： 4*0.176=0.704ppb, 也就是 0.704ug/kg 六、讨论结果分析：根据国家相关标准gb/t 5009.192-2003 ，样品一中的猪肉 , 瘦肉精含量为 0.076ug/kg ，样品二中的 5 猪肝, 瘦肉精含量为 0.704ug/kg ，动物性食品中克伦特罗酶联免疫法的检出限为0.5ug/kg. 线性范围为 0.004ng0.054ng. 所以样品一猪肉的瘦肉精含量没有超标，但猪肝瘦肉精含量超标。存在的问题分析：y = -14.59ln(x) + 26.943r2 = 0.9999010203040500.1110吸光度值标准值瘦肉精浓度检测计算吸光度值百分比对数 (吸光度值百分比)1、实验室温度低于25 摄氏度，结果可能会出现误差2、做标准曲线时第一组和第五组数据偏差太大的原因可能是在摇匀时有溅出或混乱，导致测量的吸光度