肠杆菌科鉴定全实用教案

1、9版伯杰鉴定(jindng)细菌手册分为24个属， 108个种现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80%3.占败血症50%4.占尿路感染70一.分布(fnb)第1页/共55页第一页，共56页。二二. .临床意义临床意义l有些菌属对人类有明显的致病作用l1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病l2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门(shmn)菌属、 耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒l多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌第2页/共55页第二页，共56页。与人类感染有关的肠杆菌科细菌(xjn)有31个菌属，其中临床标本中常见的菌属有15种 克雷伯菌属 爱德华菌属

2、邻单胞菌属 变形杆菌属 普罗威登斯菌属 沙门菌属 耶尔森菌属 志贺菌属 沙雷菌属 肠杆菌属 埃希菌属 哈夫尼亚菌属 枸橼酸杆菌属 摩根菌属 多源菌属 第3页/共55页第三页，共56页。三.微生物特性(txng)-杆菌 ， 多数有鞭毛、菌毛2.发酵葡萄糖，兼性厌氧3. 氧化酶阴性4.还原(hun yun)硝酸盐为亚硝酸盐5.触酶（）6.营养条件不高，第4页/共55页第四页，共56页。涂片涂片(t pin)：G-b氧化酶试验氧化酶试验(shyn)非发酵非发酵(f jio)菌、菌、弧菌弧菌+肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌双糖试验双糖试验FO不动、嗜麦芽不动、嗜麦芽肠杆菌科细

3、菌肠杆菌科细菌苯丙，苯丙，葡盐葡盐, 枸枸, 硝硝, 赖赖, 鸟鸟, 氨对氨对, 山山, 肌肌, 侧侧, 吲哚吲哚 硝酸盐还原硝酸盐还原+嗜麦芽嗜麦芽不动不动四、鉴定流程图第5页/共55页第五页，共56页。种属鉴定种属鉴定(jindng)科的特征科的特征(tzhng)硝酸盐还原硝酸盐还原(hun yun)葡萄糖发酵葡萄糖发酵氧化酶氧化酶 触酶触酶属间鉴定特征属间鉴定特征种间鉴定特征种间鉴定特征血清学分型血清学分型报告细菌种名报告细菌种名报告细菌血清型报告细菌血清型概概述述第6页/共55页第六页，共56页。五、肠杆菌五、肠杆菌(gnjn)(gnjn)科的初步分群科的初步分群 可用苯丙氨酸和葡萄糖

4、酸盐试验(shyn)将肠杆菌科分为四大组第7页/共55页第七页，共56页。菌菌 属属 名名 苯丙氨酸苯丙氨酸 葡萄糖酸盐葡萄糖酸盐变形杆菌属变形杆菌属 + 普鲁维登斯菌属普鲁维登斯菌属 + 摩根氏菌属摩根氏菌属 + 克雷伯菌属克雷伯菌属 +肠杆菌属肠杆菌属 +沙雷菌属沙雷菌属 +哈夫尼亚菌哈夫尼亚菌 +埃希菌属埃希菌属 志贺菌属志贺菌属 沙门沙门(shmn)菌属菌属 枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属 爱德华菌属爱德华菌属 耶尔森菌属耶尔森菌属 第8页/共55页第八页，共56页。六六. .苯丙氨酸阳性苯丙氨酸阳性(yngxng)(yngxng)组的各属鉴别组的各属鉴别 试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属

5、摩根氏菌属 塔特姆属 H2S + - - - 枸橼酸盐 +/- + - - 靛基质( j zh) +/- + + -第9页/共55页第九页，共56页。1.变形杆菌属内各种( zhn)的鉴别 试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液(zhn y)变形杆菌靛基质 + - - -鸟基酸 - + - -木糖 + + + -第10页/共55页第十页，共56页。2.普鲁维登菌属各种( zhn)的鉴别 试 验 产碱 斯图 雷极 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌侧金盏花醇 + - +甘露醇 + - -第11页/共55页第十一页，共56页。生化(shn hu)反应雷氏 斯氏 产碱 拉氏海

6、氏吲哚产生+-肌醇 + + - - V海藻糖-+ -戊五醇 + - + -+第12页/共55页第十二页，共56页。 3.摩根菌属种的鉴定(jindng) 试验(shyn) 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)赖氨酸 - +动力 + - 第13页/共55页第十三页，共56页。 +_ +苯丙氨酸+H2S枸橼酸盐靛基质鸟氨酸靛基质侧金盏花醇甘露醇普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产碱普鲁维登斯菌雷极普鲁维登斯菌斯图普鲁维登斯菌摩 根 菌塔特姆菌.苯丙氨酸阳性(yngxng)组菌属鉴别索引图4-第14页/共55页第十四页，共56页。七七.葡萄糖酸盐阳性葡萄糖酸盐阳性(yngxng)组各属鉴别组各属鉴别 第

7、15页/共55页第十五页，共56页。u原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种u肺炎(fiyn)克雷伯菌u产酸克雷伯菌u解鸟氨酸克雷伯菌分分 类类克克雷雷伯伯菌菌属属臭鼻亚种臭鼻亚种鼻硬结鼻硬结(yngji)亚种亚种第16页/共55页第十六页，共56页。培养培养(piyng)特征特征 血琼脂上菌落较大，呈血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取黏液状，以接种环挑取时易拉成丝时易拉成丝 在肠道培养基上呈发酵在肠道培养基上呈发酵乳糖乳糖(r tn)(r tn)小菌落小菌落 在液体培养基内生长混在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见菌膜，浊、浓厚、可见菌膜，管底有粘性沉淀物管底有粘性沉淀物

8、 K. pneumoniae 菌落菌落(jnlu)（血平（血平板）板） 克克雷雷伯伯菌菌属属第17页/共55页第十七页，共56页。1.克雷伯菌属各种( zhn)的鉴别第18页/共55页第十八页，共56页。沙雷菌属（普通沙雷菌属（普通(ptng)营营养平板）养平板） 第19页/共55页第十九页，共56页。2.沙雷菌属各种( zhn)的鉴别 第20页/共55页第二十页，共56页。分类：现有分类：现有(xin yu)13个种个种2个生物型个生物型u原有原有7个种个种2个生物个生物(shngw)型型u产气肠杆菌产气肠杆菌(E. aerogenes)u阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌(E. cloacae)u杰高维

9、肠杆菌杰高维肠杆菌u坂崎肠杆菌坂崎肠杆菌u泰洛肠杆菌泰洛肠杆菌u中间肠杆菌中间肠杆菌u聚团肠杆菌聚团肠杆菌u河生肠杆菌生物河生肠杆菌生物(shngw)群群1河生肠杆菌河生肠杆菌(gnjn)生生物群物群2后增加后增加7个菌个菌阿氏肠杆菌阿氏肠杆菌(gnjn)何氏肠杆菌何氏肠杆菌(gnjn)溶解肠杆菌溶解肠杆菌(gnjn)超压肠杆菌超压肠杆菌(gnjn)克沃尼肠杆菌克沃尼肠杆菌(gnjn)考伯肠杆菌考伯肠杆菌(gnjn)帕瑞勒肠杆菌帕瑞勒肠杆菌(gnjn) 肠肠杆杆菌菌属属第21页/共55页第二十一页，共56页。3.肠杆菌属各种( zhn)的鉴别 本菌属的细菌本菌属的细菌(xjn)生化反应不典型，

10、常用的商品化鉴定系统生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统很难达到很难达到90以上的鉴定正确率以上的鉴定正确率第22页/共55页第二十二页，共56页。4.哈夫尼亚菌属鉴定(jindng) 葡萄糖酸盐 枸橼酸盐 棉子 糖 + 第23页/共55页第二十三页，共56页。5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别(jinbi)双岐索引图 +-+葡萄糖酸盐+侧金盏花醇赖氨酸鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸靛基质枸橼酸盐山梨醇丙二酸盐阴沟肠杆菌产酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌产气肠杆菌红色沙雷菌多源肠杆菌鼻硬结克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亚菌山梨醇格高菲肠杆菌阿拉伯糖贩崎肠杆菌阴沟肠杆菌粘质沙雷菌液化沙雷菌第24页/共55页第二十四页，共5

11、6页。八八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性(ynxng)组的组的各属鉴别各属鉴别 第25页/共55页第二十五页，共56页。枸枸橼橼酸酸杆杆菌菌属属分分 类类枸橼酸杆菌属（枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括）包括(boku)11个种个种弗劳地枸橼酸杆菌弗劳地枸橼酸杆菌(gnjn) (C. freundii) 差异枸橼酸杆菌差异枸橼酸杆菌(gnjn)（C. diversus） 库斯枸橼酸杆库斯枸橼酸杆菌菌(gnjn)无丙二酸盐枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌(gnjn) (C. amalonaticus) （C. koseri） 布拉吉枸橼酸杆菌布拉吉枸橼酸杆菌(gnjn) （

12、C. braakii）雷登枸橼酸杆菌雷登枸橼酸杆菌(gnjn) （C. rodentium）塞拉克枸橼酸杆菌塞拉克枸橼酸杆菌(gnjn) （C. sedlakii）魏克曼枸橼酸杆菌魏克曼枸橼酸杆菌(gnjn) （C. werkmanii）扬哥枸橼酸杆菌扬哥枸橼酸杆菌(gnjn) （C. youngae）吉乐枸橼酸杆菌吉乐枸橼酸杆菌(gnjn) （C. gillenii）穆利枸橼酸杆菌穆利枸橼酸杆菌(gnjn) （C. murliniae） 法玛丽枸橼酸杆菌法玛丽枸橼酸杆菌(gnjn) （C. farmeri） 第26页/共55页第二十六页，共56页。1.枸橼酸杆菌属各种( zhn)的鉴别 注意

13、：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类(fn li)资料资料第27页/共55页第二十七页，共56页。2.爱德华菌属各种( zhn)的鉴别 第28页/共55页第二十八页，共56页。3.埃希菌属种的鉴别(jinbi) 第29页/共55页第二十九页，共56页。 致泻性分为5类： 肠毒素型大肠埃希菌 (ETEC) 肠致病性大肠埃希菌 (EPEC) 肠侵袭(qnx)型大肠埃希菌 (EIEC) 肠出血型大肠埃希菌 (EHEC) 肠凝聚型大肠埃希菌 (EAggEC)埃埃希希菌菌属属临床意义临床意义 (Clinical Signif

14、icance)以肠道外感染多见，主要以肠道外感染多见，主要(zhyo)有泌尿系统感染有泌尿系统感染 中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不同同(b tn)的血清型别、毒力和临床症状的血清型别、毒力和临床症状第30页/共55页第三十页，共56页。鉴定鉴定(jindng)要点要点u不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆(hnxio)，需相互鉴别u u埃埃希希菌菌属属大肠埃希菌大肠埃希菌 在中国兰平板上为蓝色菌落在中国兰平板上为蓝色菌落(jnlu)大肠埃希菌大肠埃希菌 在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落(jnlu)大肠埃希菌大肠埃希菌 在麦

15、康凯和在麦康凯和SS平板上为红色菌落平板上为红色菌落(jnlu)第31页/共55页第三十一页，共56页。培养培养(piyng)特征特征 u兼性厌氧菌兼性厌氧菌u营养要求不高营养要求不高u菌落呈中等大小、无菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑色、半透明、光滑u在在SS平板上，因产生平板上，因产生(chnshng)H2S可形可形成黑色中心的菌落成黑色中心的菌落伤寒沙门菌菌落形态伤寒沙门菌菌落形态(xngti)（SS平板）平板）四四沙沙门门菌菌属属第32页/共55页第三十二页，共56页。u常用血清：O多价血清（含AF群）u O、H、Vi抗原因子血清u 方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合(fh

16、)沙门 菌属生物学特性，则u 采 用 A - F 多 价 血 清 初 步 确 定 是 否 为Salmonellau 1. 如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型u 2. 如阴性：应考虑是否有Vi抗原?u 血清学分型血清学分型加热加热(ji r)或传代或传代去除去除(q ch)Vi抗原抗原凝集：做凝集：做O多价和单价凝集多价和单价凝集不凝集：可能为不凝集：可能为AF以外以外沙沙门门菌菌属属第33页/共55页第三十三页，共56页。第34页/共55页第三十四页，共56页。如是(r sh)双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。第35页/共55页第三十五页

17、，共56页。u兼性厌氧菌u营养要求不高u普通平板：中等大小、半透明、光滑u鉴别(jinbi)(jinbi)培养基：乳糖不发酵的菌落培养培养(piyng)特性特性菌落形态菌落形态(xngti)（麦康凯平（麦康凯平板）板） 志志贺贺菌菌属属第36页/共55页第三十六页，共56页。种属鉴定种属鉴定(jindng)u菌属特征(tzhng) u发酵葡萄糖产酸不产气u赖氨酸（）uH2S（）u尿素（）u动力（）志志贺贺菌菌属属第37页/共55页第三十七页，共56页。5.志贺菌属的鉴定(jindng) 先用志贺多价血清与菌种凝集(nngj)，如多价血清凝集(nngj)为志贺菌，多价里不包含鲍氏C16-20再进

18、一步用因子血清凝集(nngj)而定群。第38页/共55页第三十八页，共56页。6、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性(ynxng)组菌组菌属鉴别属鉴别 双歧索引图双歧索引图 +苯丙氨酸、葡萄糖酸盐 -甘露醇ONPG枸橼酸盐动 力H2S侧金盏花醇赖氨酸沙门菌属志贺菌属迟缓爱德华菌甲基红异型枸橼酸杆菌鸟氨酸葡萄糖产气耶尔森菌属丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌费劳地枸橼酸杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌第39页/共55页第三十九页，共56页。肠杆菌(gnjn)(gnjn)鉴定选用多少生化反应管为好苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸

19、、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPGONPG、靛基质靛基质(j zh)(j zh)、双糖（、双糖（H2SH2S） 第40页/共55页第四十页，共56页。九.API鉴定(jindng)系统(20E)菌液制成麦氏浊度(zhu d),加入20E板条,第41页/共55页第四十一页，共56页。1.变形杆菌菌落(jnlu)呈迁延性生长十、肠杆菌科某些(mu xi)菌株的特殊性质第42页/共55页第四十二页，共56页。2.克雷伯菌自身(zshn)菌落可拉出丝来第43页/共55页第四十三页，共56页。3.多源聚团菌在

20、M-H平板(pngbn)上产生黄色第44页/共55页第四十四页，共56页。4.沙雷菌M-H 平板上产生铁锈(tixi)红色第45页/共55页第四十五页，共56页。第46页/共55页第四十六页，共56页。6.能产生(chnshng)H2S的菌株变形杆菌 爱德华菌 伤寒(shnghn)沙门菌 费劳地枸橼酸杆菌大肠杆菌第47页/共55页第四十七页，共56页。大肠杆菌(d chn n jn)的特点对多种糖产酸产气对多种糖产酸产气,吲哚、甲基红、吲哚、甲基红、VP 、枸橼酸盐、枸橼酸盐(IMVC)+ + - -五种致病性大肠杆菌要用特异性五种致病性大肠杆菌要用特异性血清凝集加以血清凝集加以(jiy)鉴别鉴别第48页/共55页第四十八页，共56页。十一(ShY).沙门菌属的特点所有动物(dngw)可分离到沙门菌,有2000多血清可引起人类胃肠炎、败血症、伤寒第49页/共55页第四十九页，共56页。沙门(shmn)菌属的特点肥达反应(fnyng)第50页/共55页第五十页，共56页。十二(sh r).志贺菌属的特点急性菌痢-发烧,腹痛,脓血便,痢疾(l ji)志贺菌引起的菌痢死亡率高达20%慢性菌痢-反复发作二个月第51页/共55页第