探讨牛大力对小鼠免疫功能的影响

1、探讨牛大力对小鼠免疫功能的影响摘要：【目的】观察牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响。【方法】选用 SPF级 KM小鼠，通过计算小鼠脾脏指数、胸腺指数、廓清指数和采用血清溶血素试验法、二硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法，观察高、中、低剂量牛大力 ( 剂量分别为 20、10、5 g ·kg - 1·d-1) 对正常小鼠免疫调节的影响。通过测定免疫抑制小鼠 ( 灌胃给予 40 mg·kg- 1·d-1 醋酸泼尼松 ) 脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数， 观察高、中、低剂量牛大力 ( 剂量同前 ) 对免疫低下小鼠免疫调节的影响。【结果】牛大力对正常小鼠脾脏指数、

2、胸腺指数以及廓清指数均无显著性影响，但能不同程度地增加免疫低下小鼠的脾脏指数、 胸腺指数及廓清指数。【结论】牛大力能不同程度地提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能。关键词：牛大力 / 药理学 ; 免疫功能低下 / 中药疗法 ; 溶血素 / 血液 ; 疾病模型，动物; 小鼠牛大力 (Radix Millettiae Speciosae) ，载于陆川本草，为蝶形花科植物美丽崖豆藤 Milletia speciosa Champ的干燥根。功能清肺止咳，清凉解毒，用于治疗咳血，痢疾，温病身热口渴，头昏等。本实验观察了不同剂量牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响，现报道如下。1 材料与方法动物 SPF级

3、 KM小鼠 , 体质量 1822 g ，雌雄各半 ;SPF 级豚鼠，体质250300 g ，均由广州中医药大学实验动物中心提供。合格证号： SCXK粤量。药物与制备醋酸泼尼松片由广东华南药业有限公司生产( 批号：071104) 。牛大力购于广州致信中药饮片有限公司 ( 批号： 070701), 制备方法：取牛大力干燥药材，用 10 倍体积的蒸馏水浸泡 1 h，加热煮沸 2 h，趁热过滤，残渣再加 6 倍体积的蒸馏水，加热煮沸 1 h ，合并 2 次滤液，浓缩至 1 g /mL 浓度备用，用时加蒸馏水稀释至所需浓度。试剂与仪器二硝基氯苯 (DNCB)由上海试剂一厂生产 ( 批号： 20XX010

4、1)，丙酮由天津市红岩化学试剂厂生产( 批号： 20XX730)。UNICO7200型光栅分光光度计由尤尼柯上海仪器有限公司提供，LDZ5型离心机由北京医用离心机厂生产，型高速离心机由上海安亭科学仪器厂生产，型隔水式电热恒温培养箱由上海跃进医疗器械厂生产。牛大力对正常小鼠免疫器官质量的影响 1-2 取 KM小鼠 60 只，随机分为 5 组：空白组，醋酸泼尼松组 ( 剂量为 40 mg·kg- 1·d-1) ，牛大力高、中、低剂量组 ( 剂量分别为 20、 10、5 g ·kg - 1·d-1) 。每天灌胃给药 1 次，连续给药 12 d 。末次给药 1

5、h 后，将小鼠脱颈椎处死，称体质量，取脾脏和胸腺，用电子天平称质量，计算脾脏和胸腺指数 (w) ：w脾 =m脾 /mbody，w胸腺 =m胸腺 /mbody。牛大力对正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响 1-3 分组及给药方法同。于末次给药 1 h 后，各鼠尾静脉注射50 g/L 中华墨汁生理盐水液10mL/kg，于注射墨汁后 2 min 及 12 min ，用毛细玻璃管从小鼠眼眶后静脉丛取血23 滴，吸20 L 溶于 1 g/L Na2CO3 mL溶液中，摇匀，于分光光度计680 nm处测吸光度 (D) 值，计算廓清指数 (IK)分别为 2 min 、12 min 时的吸光度，IK=(logD

6、2 -logD12)/(t12-t2)(D2t12 、 t2 分别为时间 12 min 、2 min)、 D12。牛大力对免疫低下小鼠免疫器官质量的影响取KM小鼠60 只，随机分为 5 组：空白组，模型组，牛大力高、中、低剂量组，给药剂量同 项下。除空白组外，其他各组小鼠上午灌胃给予 40 mg·kg- 1·d-1 醋酸泼尼松，空白组给予等容积的蒸馏水， 下午牛大力组小鼠灌胃给予相应药物，空白组和模型组灌服等容积的蒸馏水，连续12 d 。末次给药 1 h 后，处死小鼠，按项下方法计算脾脏指数与胸腺指数。牛大力对免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响4-5 分组及给药方法同项

7、下。按项下方法检测 IK 。牛大力对鸡红细胞致小鼠血清溶血素抗体形成的影响在鸡血中加入5倍体积的灭菌 Alsever 溶液，离心洗涤，用生理盐水配成体积分数5%生理盐水鸡红细胞混悬液。补体的制备：将 2 只豚鼠心脏采血，离心后分离血清，用10倍生理盐水稀释。取 KM小鼠 72 只，随机分为 6 组：空白组，模型组，醋酸泼尼松组 ( 剂量为 40 mg·kg- 1·d-1) ，牛大力高、中、低剂量组 ( 给药剂量同项下 ) 。除空白组外，各组小鼠先腹腔注射体积分数5%生理盐水鸡红细胞混悬液进行免疫，然后灌胃给药 1 次，连续 12 d 。末次给药后1 h ，眼眶静脉取血， 3

8、 000 r/min 离心 10 min ，取 30 L 血清用生理盐水稀释100 倍，取稀释后的血清 1 mL，与体积分数 5%生理盐水鸡血细胞混悬液、体积分数10%补体混合 , 在 37恒温箱中保温 30 min 后， 0冰箱中止反应，然后离心，取上清液于分光光度计 540 nm 处比色，测 D 值，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调零的基准。牛大力对DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响1 ，7 取KM小鼠60只，随机分为5 组：模型组，醋酸泼尼松组，牛大力高、中、低剂量组( 给药剂量同项下 ) 。首次给药后，用脱毛剂( 硫化钡加水调成稀糊状) 脱去背部颈毛，次日于脱毛的颈部

9、皮肤上滴 100 g/L DNCB 丙酮溶液 20 L/ 只致敏。小鼠每天灌胃给药 1 次，连续 14 d 。末次给药后 1 h ，各鼠脱去腹部毛后滴 25 g/L DNCB 丙酮溶液 30 L/ 只进行攻击。24 h 后, 尾静脉注射 10 g/L 伊文斯蓝溶液 10 mL/kg。 30 min 后，脱颈椎处死小鼠，剪取腹部蓝染皮肤，剪碎，用 11丙酮和生理盐水混合液 5 mL浸泡 24 h，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液于分光光度计 610nm处比色，测定 D值。统计学方法采用统计软件进行分析。用单因素方差分析进行统计学显著性分析。 组间差异显著性采用单因素方差分析中

10、的LSD方法进行多重比较检验。2 结果牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及廓清指数 (IK) 的影响表 1 结果显示，牛大力高、中、低剂量组对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及IK 无显著性影响，与空白组比较差异均无显著性意义。表 1 牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及廓清指数的影响牛大力对免疫低下小鼠脾脏指数、胸腺指数及廓清指数的影响表2 结果显示，与空白组比较，模型组小鼠的脾脏指数、胸腺指数与廓清指数均显著降低高模型小鼠的廓清指数 。表体形成的影响。牛大力高、中剂量组均能显著提 3 牛大力对鸡红细胞所致小鼠血清溶血素抗牛大力对 DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响表 4 结果显示，牛大力高、

11、中、低剂量组均能不同程度抑制小鼠迟发型变态反应， 但与模型组比较差异无显著性意义 。表 4 牛大力对 DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响3 讨论机体免疫功能状态对很多疾病有重要影响。研究表明清热药能增强免疫能力，抑制变态反应。 胸腺是 T 淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官， 脾脏则是体内最重要的外周免疫器官，也是 T、 B 淋巴细胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场所， 它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关， 在免疫功能低下时常有胸腺和脾脏萎缩， 体积变小。 本实验结果表明， 在醋酸泼尼松致小鼠形成免疫抑制的条件下， 牛大力水提液能增加小鼠胸腺和脾脏指数， 但对正常小鼠的胸腺指数、脾

12、脏指数无显著性影响。本实验选用小鼠炭粒廓清实验，观察牛大力对正常小鼠及免疫低下小鼠非特异性免疫的影响。 中华墨汁作为颗粒状异物静脉注射进入血循环，能迅速被单核吞噬细胞清除。 本实验结果表明， 牛大力水提液对正常小鼠的廓清指数无显著性影响，但可使醋酸泼尼松所致免疫低下小鼠的廓清指数显著增加， 即单核吞噬细胞功能明显增强。说明牛大力能增强机体的非特异性免疫功能。本实验选用血清溶血素实验，观察牛大力对特异性免疫的影响。经鸡红细胞免疫的小鼠，可产生溶血素即抗鸡红细胞抗体，这种抗体在体外与鸡红细胞、补体一起温育，即可使鸡红细胞溶解，释放出血红蛋白，使溶液成红色，根据颜色的深浅，可反映红细胞溶出量的多少，

13、而红细胞溶血与血清中抗体含量有关，测定其上清液的光密度， 则可间接判断血清中抗体形成的数量。 本实验结果表明，牛大力水提液能增加血清溶血素含量， 以中、低剂量组效果显著， 说明牛大力能增强机体的特异性免疫功能。DNCB是一种小分子半抗原 , 可透过上皮与角蛋白及胶原蛋白结合为全抗原 , 从而刺激 T 淋巴细胞致敏 , 使实验动物对此类物质产生过敏性。当 DNCB第 2 次攻击时 ,T 淋巴细胞与抗原反应释放淋巴因子而引起组织损伤 , 继而形成迟发性皮肤过敏反应 11 。本实验结果表明，牛大力水提液能一定程度抑制DNCB引起的小鼠迟发型皮肤过敏反应, 抑制 T 淋巴细胞介导的特异性细胞免疫应答。

14、【参考文献】徐叔云，卞如濂，陈修 . 药理实验方法学 M. 第 3 版 . 北京：人民卫生出版社， 20XX：934-935 ，945-946 ，1430.戴岳，杭秉茜 ,李佩珍，等 . 女贞子煎剂对小鼠免疫系统的作用J.中国药科大学学报， 1987，18(4) ： 301.邓文龙，刘家玉，叶尚钧，等. 人参对状内皮系统吞噬功能影响的研究J.中医杂志， 1983，24(7) ：546.张大方，金若敏 . 药理与中药药理实验 M. 上海：上海科学技术出版社， 20XX：89.黄蕾 , 文昌凡 . 丹柏四逆颗粒剂抗炎免疫作用的实验研究 J. 中国中医药信息杂志， 20XX， 1(2) ：120.李勇，夏翠英，章天寿，等. 前列康对鸡红细胞致小鼠溶血素抗体生成的影响 J. 安徽中医学院学报， 20XX，23(6) ： 32.