消化道肿瘤免疫组化临床研究的申请

1、消化道肿瘤免疫组化临床研究的申请随着肿瘤病人的不断增加，摆在我们肿瘤专科医师面前 的责任越来越重大，我们腹外（2 ）科，病理科及检验科联合开展 消化道肿瘤免疫组化临床研究，希望对病人的预后及治疗起到指 导作用。在临床工作中，我们诊治了数以百计的胃肠道肿瘤患 者，我们发现，即便是同样期别，同种病理类型患者，其预后也 有所不同。免疫组化逐步走入消化道肿瘤医生的视线。我们期望 找到一些免疫组化指标，如同cerb-b2指导乳腺癌的预后和治疗 一样，能够指导消化道肿瘤病人的预后和治疗。这项工作国内外 各大医院均在临床研究中，还未得出明确结论。在众多免疫组化 指标中，我们筛选了以下几种作为我们研究对象，如

2、，egfr （表 皮生长因子受体），cd44v6, ki-67, vegf （血管内皮细胞生长因 子），mmp-9, cath-d,生长激素异常反应（pr），p-gp ，gst- ji , nm23o由于此项研究周期比较长，而且费用较高，完全由病 人自行承担，恐难进行，故恳请院领导给予帮助与支持。附：1. egfr （表皮生长因子受体） 是细胞信号传导系统的，现 已在许多肿瘤中发现表皮生长因子表达异常，且与肿瘤转移和病 人预后有密切关系。egfr在癌组织中的总的阳性率为56.4%.在弥漫型胃癌中 的阳性率为68% （低分化腺癌66.7%,印介细胞癌81.8%）, 肠型胃癌中为32.2% （管状

3、腺癌31. 3%,黏液腺癌33.3%）。淋巴结（+ ）为 71.1%,（-）为 42.5%.粘膜及粘膜下15.4%,肌层56.0%,浆膜及浆膜外70. 0 %。 临床意义弥漫型胃癌中egfr的阳性率比肠型胃癌高，分化差的印介 细胞癌或低分化腺癌的阳性率也比分化好的管状腺癌高，统计学 处理均有显著性差异，提示胃癌细胞分化程度越低，egfr的阳 性率越高。egfr的表达与胃癌的分期.分化程度.浸润深度及淋巴结 转移有相关性，egfr阳性的肿瘤可能有更强的分裂增殖活性及 侵袭性，用免疫组化方法检测肿瘤中的egfr的表达，可作为胃 癌的生物学恶性程度和判断预后的一个有用指标。2. cd44v6淋巴结转

4、移和复发是影响胃癌患者预后的主要 因素之一，淋巴结转移是一个复杂的过程。cd44v6可参与癌细 胞与基质的黏附作用及淋巴细胞归巢，从而有利与癌细胞的扩散 与转移。cd44v6广泛分布于细胞表面的跨膜糖蛋白，作为细胞基质透明质酸受体，参与细胞膜与基质的黏附作用及淋巴细胞归巢， 从而促进癌细胞的扩散与转移。研究表明，cd44v6与人类恶性 肿瘤的发生.侵袭与转移密切相关。在肿瘤cd44v6表达阳性的 病人中，其胃周淋巴结阳性率为81.1%,而表达阴性者的淋巴 结转移阳性率为52.2%。提示胃癌细胞在异常分化中，获得 cd44v6阳性的同时，也获得高转移的能力。检测蛋白表达对判 断胃癌患者淋巴结转移

5、潜能和预后、提供胃癌新的治疗靶点有重 要意义。3ki-67是一种新近发现的重要的反映肿瘤增殖活性的蛋白，与肿瘤的增殖.浸润.转移潜能和预后密切相关。ki-67 是与增殖细胞核抗原(pcna)相结合的单抗，而pcna的表达调 控着细胞增殖周期，故可利用ki-67单抗来反映细胞增殖的活 性。经对胃癌病人的研究发现，肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤分级 呈正相关，与预后呈负相关；进展期胃癌组织中的ki-67单抗表 达量较早期癌高，与远隔脏器转移呈正相关。同时分化越差、临 床分期越晚且有合并转移，ki-67表达阳性率越高，提示ki-67 与分化程度.临床分期有关。研究结果还提示ki-67表达于与原 发灶部位，

6、肿瘤大小无关，与术后生存期呈负相关。4. vegf(血管内皮细胞生长因子)肿瘤生长依赖于血管生成,丰富的血管可持续不断地向肿瘤提供营养和排除代谢产物，为其生长提供物质条件。肿瘤组织诱导的血管生成是一复杂的由多因素调节的过程，血管生成因子通过各种机制降解血管基底膜和周围的细胞外基质，促进内皮细胞分裂.游走和增殖，诱导宿主毛细血管新生并长入肿瘤组织。我们应用免疫组化和原位分子杂交技术检测人胃癌组织中vegf表达和微血管密度(mvd),分析vegf与mvd,及其与胃癌各临床病理指标和预后的关系。附表 vegf蛋白表达和mvd与胃癌各临床病理指标间关系指标例数vegfmvd阳性例数(%)p值土 s (

7、个)p值组织学类型i83(37. 5)40. 8 ±13. 5n188 (44. 4)>0. 0538. 5 ±16.1>0. 05m2110(47. 6)431土144iv94 (44. 4)47.1±15.1浸润深度m、sm72 (2& 6)28. 4 ±8.1pm> ss225(22. 7)<0. 0136. 9 ±10. 7<0. 01se. sei2718(66. 7)49. 6 ±15.1生长方式膨胀型2111(52. 4)41. 2 ±13. 9浸润型3514(40. 0)

8、>0. 0542. 5 ±16. 0>0. 05淋巴结转移有2717(63. 0)51. 5 ±13. 4无298(27. 6)<0. 0533. 4 ±10. 6<0. 01远处转移有97(77. 8)56.4 土 7.2无4718(38. 2)<0. 0539.1±14. 4<0. 05vegf是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，具有双重功增加微血管通透性，促进血浆纤维蛋白外渗，为血管形成过程中多种细胞迁移提供一个纤维网络；通过与内皮细胞上 两个特殊受体f 11和flk/kdr作用,直接刺激内皮细胞增殖，并产生纤

9、维蛋白溶酶原激活剂（组织型.尿激酶型）和胶原酶等，这不 仅可促进内皮细胞移动，有利于血管生成，而且还有利于肿瘤细 胞脱落进入血管或向邻近纤维蛋白和结缔组织基质扩散，为肿瘤的浸润转移创造条件。本研究中胃癌组织vegf阳性率为44. 6%,阳性表达者平均mvd值明显高于阴性表达者，与最近报道的胃癌 组织中vegf表达情况相近。而且癌肿浸润前缘vegf蛋白表达较 其它部位明显，微血管密度也较高,血管生成活跃，说明vegf蛋 白表达与血管生成部位的一致性。丰富的血管不仅增加了肿瘤细 胞进入循环的机率，而且肿瘤细胞还可以侵入邻近与毛细血管伴 行的淋巴管，或通过淋巴静脉连接进入淋巴管，促进淋巴转移。因 此

10、，在众多反映胃癌生物学行为的指标中，除组织学分型和生长 方式外，vegf表达和mvd与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转 移均有关系。vegf mrna表达与浆膜浸润.淋巴结转移也密切相 关。可见,vegf在促进胃癌血管生成的同时也促进了胃癌的浸润 转移。关于预后方面，资料显示vegf阳性或mvd43的胃癌患者 术后复发率较高，预后明显差于vegf阴性或mvd < 43者,进一步 证实了 vegf和血管生成在胃癌发展中的作用。5mmp-9是mmps家族中分子量最大的一个酶，其最主要的功能是降解细胞外基质中的iv. v型胶原和明胶。实体肿瘤的生 长、浸润和转移必须依赖肿瘤血管生成,微血管密度

11、(mvd)是反映 恶性肿瘤侵袭和转移等生物学行为的一个重要指标。研究表明， mmp-9异常表达与多种肿瘤的发生.发展有关，但确切机制尚有 待于进一步明确,促进血管生成可能是其机制之一。6. cath-d是一种蛋白水解酶，能溶解ecm (肿瘤细胞对细 胞外间质)> 基底膜和结缔组织。有研究表明cath-d主要通过刺 激细胞生长，溶解ecm.基底膜和结缔组织，为肿瘤浸润.扩散. 转移创造条件。本实验128例胃癌中105例(82. 0%)cath-d阳 性，cath-d的阳性率随着胃癌浸润深度和淋巴结转移站次.tnm 分期增加而升高，这提示肿瘤细胞浸润浅时cath-d蛋白呈阳性 率低，浸润程度

12、加深后cath-d的阳性率增加，其转移率亦增强, 这与国外文献扌艮道的结果一致。cath-d阳性者五年生存率明显 低于cath-d表达阴性者。由此可见，cath-d有望成为胃癌转移 复发的检测指标。附：mmp-9和cath-d在胃癌细胞上的表达呈正相关，即mmp-9阳性率越高，cath-d阳性率亦高，且mmp-9/ cath-d 组发生淋巴结转移和浆膜浸润的机会显著低于其他任何组，从而 可以推测mmp-9与cath-d在胃癌浸润转移过程中存在相互关联.共同作用。故联合检测mmp-9和cath-d,在判断肿瘤生物学行 为及预后方面有更大的意义。7.用免疫组化方法检测77例胃癌组织gst-ji的表

13、达，gst-ji在胃癌组织中的阳性表达率为67.53%,他们的研究还发 现，管状腺癌.乳头状腺癌gst-ji的表达高于其他类型癌，这 与临床上胃管状腺癌和乳头状腺癌对化疗药物易产生耐药，而神 经内分泌癌.印戒细胞癌等对化疗较敏感的现象相符合。发现检测胃癌gst-ji对化疗具有指导意义。gst-tt高表达 对顺铠.阿霉素.5-fu.丝裂霉素等耐药。临床上可根据胃癌 gst-ji表达情况，有目的地选择抗肿瘤药物，以提高化疗效果。8.胃癌患者对于trh会产生异常反应，称为生长激素异常 反应(pr),研究发现此异常反应在不同分期的胃癌中没有明显差 别，但是pr(-)的胃癌患者复发率低于阳性的患者，提示

14、pr可 能是一个较好的胃癌预后指标。9. p-gp用免疫组化方法检测55例胃癌发现p-gp表达占 87% ( 48/55 ), p-gp表达程度越高则预后越差。p-gp在正常胃 黏膜.异型增生及未经化疗的胃癌组织中均有表达，且表达强度 依次增加。正常胃黏膜内存在p-gp的表达也说明人类本身存在mdr1基因表达，即自身具有抵抗药物的特性，肿瘤细胞的形成 只是增加了这种抗药特性的表达。p-gp的表达强度还与胃癌的 浸润深度.淋巴结转移.临床分期呈正相关，p-gp高表达，生 存期短。从报道的大量文献看，检测p-gp有助于预测化疗敏感性， 对选择合适的治疗方案和实施有效的逆转措施具有重要意义。在 化疗

15、前进行p-gp的检测，可以指导临床用药，以减少用药的盲 目性。p-gp所介导的mdr化疗药物主要为长春花碱.长春新碱 和阿霉素，尤其对长春花碱的耐药起决定性作用，因此认为p-gp 阳性的胃癌患者选择化疗药物时应尽量避免使用脂性及生物碱 类药物，选用与p-gp关系不大的烷化剂和抗代谢类药物。10. nm23又称为抗转移癌基因，目前已被广泛应用于乳腺 癌、非小细胞肺癌.胃癌.大肠癌.肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤 的检测。几乎所有的研究都表明，nm23蛋白高表达患者淋巴结 转移率相对较低，存活期相对较长。nm23表达与lauren分型无 关，而与临床病理分期和淋巴结转移有显著的相关性，nm23阴 性表达者癌细胞淋巴结转移率明显大于阳性表达者，提示nm23 阴性表达者，癌细胞淋巴结转移潜力较大，预后可能较差。实验 研究结果提示nm23抑制