液相色谱仪日常维护及常见故障解决实用教案

1、会计学1液相色谱仪日常液相色谱仪日常(rchng)维护及常见故障解维护及常见故障解决决第一页，共66页。第1页/共66页第二页，共66页。溶剂溶剂(rngj)信息信息避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。在有机溶剂中的有机酸溶液。在有机溶剂中的有机酸溶液。含有强络合

2、剂含有强络合剂(h j)的溶液。的溶液。四氯化碳和异丙醇或四氯化碳和异丙醇或THF混合液。混合液。第2页/共66页第三页，共66页。溶 剂UV截止波长（nm）乙 睛190水190环 己 烷195己 烷200甲 醇210乙 醇210乙 醚220二氯甲烷220氯 仿240四氯化碳265四氢呋喃280（220）甲 苯285所以在使用紫外检测器时，所用波长(bchng)应至少比所用溶剂的截止波长(bchng)大20nm以上。在使用紫外检测器时，所用波长与所用溶剂的截止波长接近（或低于截止波长）时，容易产生噪音(zoyn)干扰，从而影响检测结果。第3页/共66页第四页，共66页。生色团分子式实 例最大吸

3、收波长（nm）羰基（酮）RRC=O丙酮271羰基醛RHC=O乙醛293羧基RCOOH醋酸271酰胺RCONH2乙酰胺208次乙基RCH=CHR乙烯193亚次乙基RC=CR乙炔173睛RC=N乙睛160硝基RNO2硝基甲烷271溶剂、PH、温度等都会影响生色团的最大吸收(xshu)峰的强度和位置。第4页/共66页第五页，共66页。溶剂溶剂(rngj)过过滤滤不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：l使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。l用滤膜过滤溶剂去除微生物。l每两天更换或过滤溶剂。l避免溶剂瓶直接日照。l向溶剂中加入0.0

4、001-0.001M的叠氮化钠。第5页/共66页第六页，共66页。第6页/共66页第七页，共66页。第7页/共66页第八页，共66页。目的(md)脱气(tu q)方法：氦气脱气(tu q)回流加热脱气(tu q)真空脱气(tu q)超声脱气(tu q)排除(pich)溶解在流动相中的氧气和氮气 2 脱气机第8页/共66页第九页，共66页。12 mlSolenoid valve第9页/共66页第十页，共66页。阻尼器/压力(yl)传感器泵驱动(q dn)溶剂(rngj)瓶梯度比例阀主动输入阀AV出口球阀BOV清洗阀Purge Valve柱塞杆Piston第10页/共66页第十一页，共66页。二元

5、泵工作二元泵工作(gngzu)原理原理DamperPurge valveMixerABInlet valveOutlet valveWasteInlet valveOutlet valve第11页/共66页第十二页，共66页。第12页/共66页第十三页，共66页。样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小4 进样器第13页/共66页第十四页，共66页。六通阀手动进样阀 - 六通阀ToWasteSample Loop(Fixed Volume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToCol

6、umnPumpFrom PumpTo Waste手动进样器第14页/共66页第十五页，共66页。第15页/共66页第十六页，共66页。自动进样器Metering device6-port valveSampling unitFrom pumpTo columnTo waste准备准备(zhnbi)位置位置调用调用(dioyng)样品样品瓶瓶吸样品吸样品进样和运行进样和运行(ynxng)位置位置标准进样过程标准进样过程 .第16页/共66页第十七页，共66页。第17页/共66页第十八页，共66页。色谱色谱(s p)柱柱保护保护 过滤所有的溶剂和样品过滤所有的溶剂和样品 使用保护使用保护(boh)

7、(boh)柱柱 仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。 柱子在不使用时，两端密封保存柱子在不使用时，两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的注意色谱柱的pHpH值使用范围值使用范围 不要高压冲洗柱子不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相不要高温下过长时间使用硅胶键合相第18页/共66页第十九页，共66页。第19页/共66页第二十页，共66页。第20页/共66页第二十一页，共66页。第21页/共66页第二十二页，共66页。逻辑判断及处理问题 化学品 环境 机器*色谱柱/保护柱*电源 *泵

8、*溶液*地线 *进样器*样品(yngpn)*温度 *检测器*湿度 *数据处理单元*清洁程度第22页/共66页第二十三页，共66页。第23页/共66页第二十四页，共66页。第24页/共66页第二十五页，共66页。第25页/共66页第二十六页，共66页。第26页/共66页第二十七页，共66页。第27页/共66页第二十八页，共66页。第28页/共66页第二十九页，共66页。第29页/共66页第三十页，共66页。无样品峰无样品峰未进样未进样 泵未工作泵未工作漏液漏液流动相或样品的问题流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题数据采集装置的问题或其与检

9、测器连线的问题最简单快捷的检查最简单快捷的检查 - 泵是否工作泵是否工作, 系统是否漏液系统是否漏液, 进一针丙酮溶液检查检测器读数进一针丙酮溶液检查检测器读数(dsh)及及数据单元是否有响应数据单元是否有响应 第30页/共66页第三十一页，共66页。第31页/共66页第三十二页，共66页。第32页/共66页第三十三页，共66页。第33页/共66页第三十四页，共66页。1.压力(yl)无现象判断故障排除面版灯不亮电源不通检查电源接头松脱拧紧接头泵头漏液接口太松拧紧泵头螺丝泵密封垫磨损更换密封垫第34页/共66页第三十五页，共66页。现象判断故障排除泵不送溶剂泵头有气泡排气泡，溶剂需脱气使用的溶

10、剂黏性太高换低黏性溶剂溶剂贮液器中过滤器脏清洗贮液瓶、过滤器，排空阀打开关闭排空阀控制器设定不正确设置正确流动相不够补足流动相第35页/共66页第三十六页，共66页。现象判断故障排除压力值高泵流速设定太高设定正确的流速流动相使用不恰当使用恰当的流动相缓冲结晶盐沉淀冲洗样品与流动相不互溶稀释或改变流动相柱温太低升高温度色谱柱性能下降换柱2.压力(yl)高第36页/共66页第三十七页，共66页。现象判断故障排除压力值高溶剂贮液器中过滤器脏清洗链接管路阻塞冲洗，必要时更换进样阀阻塞冲洗进样器第37页/共66页第三十八页，共66页。现象判断故障排除压力值低泵流速设定太低设定正确的流速色谱柱选择不恰当更

11、换恰当的色谱柱柱温过高降低柱温系统漏液检查漏液位置并维修流动相使用不当改变流动相3.压力(yl)低第38页/共66页第三十九页，共66页。4.压力(yl)不稳现象判断故障排除压力变化重现性好采用梯度所引起的压力是正常泵内有气泡溶剂脱气不适当排气泡，溶剂需脱气压力波动泵密封垫损坏更换密封垫溶剂混合器故障清洗或更换混合器漏液连接口太松拧紧接口管路损坏更换第39页/共66页第四十页，共66页。1.峰前沿(qinyn)现象判断故障排除峰前沿柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度第40页/共66页第四十一页，共66页。2.峰拖尾现象判断故障排除峰拖尾柱性

12、能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相第41页/共66页第四十二页，共66页。3.峰变宽现象判断故障排除峰变宽柱性能下降更换色谱柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱流动相选择不当选择恰当的流动相流动相流速太低调节流速第42页/共66页第四十三页，共66页。现象判断故障排除峰变宽缓冲液浓度太低增加浓度系统没到达平衡使系统到达平衡进样器问题检查进样器环境温度变化使用柱温箱漏夜检查漏夜的位置并维修出现两个或多个未被完全分离的物质的峰选择其它色谱

13、条件以改善分离效果检测器时间常数太大使用较小的时间常数第43页/共66页第四十四页，共66页。4.峰分叉(fn ch)现象判断故障排除峰分叉柱性能下降更换色普柱保护柱失效换柱芯色谱柱或保护柱被污染清洗柱或保护柱，必要时更换进样体积太大或样品浓度太高降低进样体积或降低样品浓度样品溶剂不溶流动相改变溶剂或采用流动相溶解样品第44页/共66页第四十五页，共66页。5.无峰现象判断故障排除无峰检测器参数设置错误设置正确的检测器参数样品降解检查样品配制过程，更换样品自动进样器故障检查进样器无样品加样品检测器与数据处理装置链接故障检查并正确链接第45页/共66页第四十六页，共66页。6.负峰现象判断故障排

14、除出现所有负峰连接数据处理系统信号线接反正确连接记录仪或检测器信号极性相反改变极性设置出现一个或几个负峰离子对分离体系对峰的影响在流动相中溶解样品使用的流动相吸收高使用流动相稀释样品自动进样器注射进空气清洗自动进样器第46页/共66页第四十七页，共66页。7.鬼峰现象判断故障排除色谱图出现鬼峰样品前处理时产生降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品前一次进样的洗脱物增加分析时间或梯度洗脱、提高流速、如问题仍存在，两次进样间用强溶剂冲洗色谱柱注射器脏清洗注射器、冲洗进样口第47页/共66页第四十八页，共66页。现象判断故障排除色谱图出现鬼峰流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过

15、滤器、使用HPLC级试剂柱被污染清洗柱或更换柱六通阀污染清洗六通阀检测器污染清晰检测器管路污染冲洗流动相中含有稳定剂或稳定剂变化使用无防腐溶剂第48页/共66页第四十九页，共66页。8.保留(boli)时间变化现象判断故障排除保留时间不重复系统不问或未达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温波动大使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱被污染冲洗柱或更换柱溶剂配比不合适调节溶剂配比进样体积太大或样品浓度太高减小进样体积第49页/共66页第五十页，共66页。9.保留(boli)时间不断变化现象判断故障排除保留时间不断变化流速变化重新设定流速,检查泵 是否正常工作系统没有达到平衡分析之前

16、应有足够的时间使系统平衡柱被污染冲洗柱或更换柱流动相被污染清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂系统泄漏检查并进行维修第50页/共66页第五十一页，共66页。现象判断故障排除保留时间不断变化流动相脱气不够充分清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂 室温变化使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境柱恒温箱设置有误设置正确的温度第51页/共66页第五十二页，共66页。10.基线漂移现象判断故障排除基线漂移系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡室温不稳使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使

17、用HPLC级试剂流动相脱气不充分脱气重新平衡系统第52页/共66页第五十三页，共66页。现象判断故障排除基线漂移流动相配比不当或流速变化更改配比或流速柱被污染冲洗柱或更换柱固定相流失为说明问题存在，用一段连接管路代替色谱柱，通流动相检测基线检测池被污染或有气体用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池第53页/共66页第五十四页，共66页。现象判断故障排除基线漂移测定的波长选择有误使用分光光度计说明背景吸收，如背景值高，说明流动相含有紫外吸收化合物导致基线漂移。使用的流动相应在紫外截止波长以外，或更换溶剂系统泄漏检查并进行维修样品中有强保留的物质用强度合适的溶剂清洗色谱柱第54页/共66页第五十五页，

18、共66页。现象判断故障排除无规则基线噪音系统不稳或没有达到平衡分析之前应有足够的时间使系统平衡系统泄漏检查并进行维修流动相污染或分解清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入口过滤器、使用HPLC级试剂柱被污染冲洗柱或更换柱色谱柱填料流失或阻塞更换色谱柱11.无规则基线(jxin)噪音第55页/共66页第五十六页，共66页。现象判断故障排除无规则基线噪音流动相混合不均或混合器工作不正常维修或更换混合器检测池被污染或用甲醇或其他强极性的溶剂冲洗流通池系统内有气泡用强极性的溶剂清洗系统检测器内有气泡清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器检测器灯能量不足更换灯第56页/共66页第五十七页，共66页。12.规则(

19、guz)基线噪音现象判断故障排除规则基线噪音流动相、检测器或泵内有气泡流动相脱气，冲洗系统除去检测器或泵内的空气室温不稳稳定环境温度。使用柱温箱、将系统置于恒温、空气对流小的环境流动相回收使用除非特殊需要不使用回收溶剂流动相混合不完全使流动相混合均匀或使用低黏度的溶剂第57页/共66页第五十八页，共66页。现象判断故障排除规则基线噪音泵振动在系统中假如脉冲阻尼器泵入口管路松或阻塞检查泵入口管路在同一水平上有其他设备关掉仪器，检查干扰是否来自于外部第58页/共66页第五十九页，共66页。1.定量(dngling)结果现象判断故障排除精密度降低样品预处理时样品降解或混入杂质用标准品对照、检查样品处理过程，换新样品保留时间改变，峰形不正常见“峰形不正常”的故障排除方法检测器响应故障检查检测器第59页/共66页第六十页，共66页。现象判断故障排除精密度降低峰积分不