实验2分离以尿素为氮源的微生物2实用教案

1、一一. .实验实验(shyn)(shyn)原理原理 尿素尿素 NH3 中性中性 碱性碱性 酚红颜色：酚红颜色： (酸性酸性)黄色黄色(hungs) 红色红色( (变色(bins)(bins)范围 pH6.4-8.2) pH6.4-8.2)第1页/共13页第一页，共13页。二二. .实验实验(shyn)(shyn)目的目的 使用以尿素使用以尿素(nio s)(nio s)为唯一氮源的培养基分离细菌为唯一氮源的培养基分离细菌( (有脲酶有脲酶) ) 通过指示剂（酚红）颜色的变化通过指示剂（酚红）颜色的变化(binhu)(binhu)检知培养基检知培养基pHpH的变化的变化(binhu)(binhu

2、)(脲酶催化的化脲酶催化的化学反应学反应) )第2页/共13页第二页，共13页。三三. .实验实验(shyn)(shyn)步骤步骤. .倒平板倒平板(pngbn)(pngbn). .制备一定制备一定(ydng)(ydng)浓度梯度的细菌悬液浓度梯度的细菌悬液g g土壤土壤mlml无菌水，振荡，为无菌水，振荡，为-2-2稀释液，依次制备稀释液，依次制备-3-3、-4-4、-5-5的土壤稀释液。的土壤稀释液。.稀释涂布分离法分离细菌稀释涂布分离法分离细菌. .制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基P26P26. .培养观察培养观察（倒置，（倒置，37 24-48h

3、37 24-48h）（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）第3页/共13页第三页，共13页。配制配制(pizh)培养基培养基 尿素尿素(nio s)(nio s)培养基培养基 葡萄糖葡萄糖 0.025g 0.025g NaCl 0.12g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖琼脂糖 0.5g 0.5g 酚红酚红 0.25g 0.25g 尿素尿素(nio s) (nio s) 10ml10mlLBLB培养基培养基 蛋白胨：蛋白胨： 0.25g0.25g 酵母提取液：酵母提取液： 0.12g0.12g NaCl NaCl： 0.25g0.25g 琼脂糖琼脂糖：

4、0.5g 0.5g 对照组对照组选择选择(xunz)培养基培养基实验组实验组为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？第4页/共13页第四页，共13页。接种(jizhng) 取0.1ml菌悬液第5页/共13页第五页，共13页。涂布分离(fnl)第6页/共13页第六页，共13页。涂布分离(fnl)第7页/共13页第七页，共13页。37倒置(dozh)培养按浓度按浓度(nngd)捆成一摞捆成一摞恒温恒温(hngwn)37培养培养第8页/共13页第八页，共13页。1 1、为什么要用琼脂糖代替、为什么要用琼脂糖代替(dit)(dit)琼脂配琼脂配置

5、固体培养基置固体培养基 因为琼脂因为琼脂(qingzh)是未被纯化的混合物，内是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂含一定量的含氮化合物。如果用琼脂(qingzh)固化培养基，会为细菌提供一定量固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂(qingzh)糖而不用琼脂糖而不用琼脂(qingzh)做固化剂做固化剂思考题：第9页/共13页第九页，共13页。2 2、有脲酶的细

6、菌在生态、有脲酶的细菌在生态(shngti)(shngti)稳态上起稳态上起什么作用什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与土壤碱化，氨还与SO42-SO42-等离子形成化合物，使等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且而且(r qi)(r qi)利用了所形成的氨，有利于自然利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。界中氮的循环。第10页/共13页第十页，共13页。3 3、有脲酶的细菌菌落周围、有脲酶的细菌菌落周围(zhuwi)(zhuwi)为什么有着色

7、的环带出现。为什么有着色的环带出现。 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色(hungs)，碱性里呈红色。培养，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。第11页/共13页第十一页，共13页。4 4、与全营养培养基上的菌落数比较、与全营养培养基上的菌落数比较(bjio)(bjio)，为什，为什么尿素培养基上只有少数菌落么尿素培养基上只有少数菌落 表明能利用尿素表明能利用尿素(nio s)的细菌在土壤菌落中只占有极少数。的细菌在土壤菌落中只占有极少数。5.5.本实验分离出来的细菌本实验分离出来的细菌(xjn)(xjn)一定都是以尿素为氮源的细菌一定都是以