滋阴明目片质量标准探究

1、滋阴明目片质量标准探究摘要：目的建立滋阴明目片的质量标准。方法采 用薄层色谱法对滋阴明目片中的牡丹皮、山萸肉、羌活、石 菖蒲进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对丹参中的丹酚酸 b进行含量测定。色谱柱为kromasil ods柱(250 mmx4. 6 mm, 5 um),以甲醇-乙月青-1.67%甲酸水(24 ： 10 ： 66)为流动 相，检测波长为286 nm,流速为1. 0 ml/min,柱温：30 °co 结果 在薄层色谱中可检出牡丹皮、山萸肉、羌活、石菖蒲 的特征斑点，且斑点清晰，易于观察。丹酚酸b的进样量在 0.321.92 ug范围内线性关系良好,r=0.999 9 (n

2、=5), 平均加样回收率为99.91%, rsd=o. 63% (n=6)o结论该法专 属性强，重复性好，结果准确，可用于滋阴明目片的质量控 制。关键词：滋阴明目片；质量标准；丹酚酸b；薄层色谱 法；高效液相色谱法滋阴明目方是湖南中医药大学第一附属医院眼科协定 处方制剂，由山萸肉、熟地黄、黄精、牡丹皮等药材组成， 具有滋阴、活血、利水的功效，临床用于原发性视网膜色素 变性等眼疾疗效显著1-2 o滋阴明目片是由滋阴明目丸改 剂型而成，为控制滋阴明目片的质量，确保其临床疗效，本 研究采用薄层色谱法对方中牡丹皮、山萸肉、羌活、石菖蒲 进行定性鉴别，高效液相色谱法对方中丹参的主要成分丹酚 酸b进行含量

3、测定。1仪器与试药agilent 1100 series高效液相色谱系统（安捷伦科技 有限公司），kq-600型超声波清洗器（昆山市淀山湖检测仪 器厂），ar2140电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）。牡丹皮对照药材（批号121521-200504）、山萸肉对照药 材（批号121528-200408 ）、羌活对照药材（批号 121362-200407）、石菖蒲对照药材（批号 121536- 200502）. 丹酚酸b对照品（批号must-12020104），均由中国药品生物 制品检定所提供。滋阴明目方药材（湖南中医药大学第一附 属医院采购，批号20120615,经刘绍贵教授鉴定均符合药典 标准

4、）。乙睛为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1薄层色谱鉴别2. 1. 1牡丹皮取本品样品6. 0g,研细，加无水乙醇超 声提取（功率250 w,频率40 khz） 30 min,放冷，滤过， 滤液挥干，加2 ml丙酮溶解作为供试品溶液。取不含牡丹 皮的阴性样品6.0 g,同法制成阴性对照溶液。另取丹皮对 照药材l.og,同法制成对照药材溶液。照2010年版中华 人民共和国药典（一部）附录vib薄层色谱法试验31160, 吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照药材溶液各10 nl, 点于同一块硅胶g薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 （20 ： 5 ： 0.5）为展开剂，展开

5、，取出、晾干，喷以2%香草 醛硫酸乙醇溶液（1-10）,于105 °c烘箱加热至斑点显色清 晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应位置上显相 同颜色橘黄色荧光斑点，阴性对照溶液色谱则无此斑点。2. 1.2山萸肉取本品样品3. 0 g,研细，加乙酸乙酯 20 ml,超声处理20 min,滤过，滤液挥干，残渣加2 ml无 水乙醇溶解作为供试品溶液。取缺山萸肉的阴性样品3.0g, 同法制成阴性对照溶液。另取0.5 g山萸肉对照药材，同法 制成对照药材溶液。照2010年版中华人民共和国药典（一 部）附录vib薄层色谱法试验326,吸取供试品溶液、阴性 对照溶液和对照药材溶液各10 ul,

6、点于同一块硅胶g薄层 板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20 ： 4 ： 0.5）为展开剂，展 开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105匸加热至 斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应 位置显相同颜色的斑点，阴性对照溶液色谱则无此斑点。2. 1. 3羌活 取本品样品4. 0g,研细，加石油瞇（60-90） 30 ml回流提取30 min,滤过，滤液挥干，残渣加1 ml乙 酸乙酯溶解作为供试品溶液。取缺羌活的阴性样品4.0 g, 同法制成阴性对照溶液。另取0.5 g羌活对照药材，同法制 成对照药材溶液。照2010年版中华人民共和国药典（一 部）附录vb薄层色谱法试验31170,

7、吸取供试品溶液、阴 性对照溶液和对照药材溶液各10 ul,点于同一块硅胶g薄 层板上，以正己烷-苯-乙酸乙酯（16 ： 8 ： 8）为展开剂，展 开、取出、晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，置365 nm紫外 光灯下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应位 置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液色谱则无此斑 点。2. 1. 4石菖蒲取取本品样品4. 0 g,研细，加石油瞇 （60-90） 30 ml回流提取30 min,滤过，滤液蒸干，残渣 加1 ml石油瞇溶解作为供试品溶液。取缺石菖蒲的阴性样 品，同法制成阴性对照溶液。另取0.5 g石菖蒲对照药材， 同法制成对照药材溶液。照2010年版中

8、华人民共和国药 典（一部）附录vib薄层色谱法试验385,吸取供试品溶 液、阴性对照溶液和对照药材溶液各5 ul,点于同一块硅 胶g薄层板上，以石油瞇（60-90） -乙酸乙酯（20 : 5）为 展开剂，展开、取出、晾干，放置1 h,置于365 nm紫外灯 下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应位置上 显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液色谱则无此斑点。2.2含量测定2. 2. 1色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：kromas订 ods 柱（250 mmx4. 6 mm, 5 um）；流动相：甲醇-乙-1.67% 甲酸溶液（24 ： 10 ： 66）；检测波长：286 nm；流速：1.0

9、 ml/min；柱温：25 °c；理论塔板数按丹酚酸b峰计算不低 于 2000o2. 2.2对照品溶液制备 称取经五氧化二磷干燥至恒重 的丹酚酸b对照品适量，精密称定，置25 ml容量瓶中，加 入80%甲醇溶解，定容，制得每iml含丹酚酸b 0. 16 mg的 对照品溶液。2.2.3供试品溶液制备 取滋阴明目片3片，研细，取0.5 g,精密称定，置10 ml容量瓶中，加 80%甲醇10 ml,超声处理(功率250 w,频率40 khz) 30 min, 放冷后定容至刻度，滤过，续滤液作为供试品溶液。2. 2.4阴性对照溶液制备取缺丹参的其余药味，按制 备工艺要求制成不含丹参的阴性对照

10、制剂，以供试品溶液制 备的方法制备阴性对照溶液。2. 2.5阴性干扰试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴 性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果在丹酚酸b色谱峰 位置处无相应峰出现，表明方中其他药味对丹酚酸b的测定 无干扰。色谱图见图2。2. 2.6线性关系考察 精密吸取“2.2.2”项下对照品 溶液2、4、6、8、10、12 ul分别进样，测定峰面积。以 峰面积值对进样量进行线性回归，得回归方程 y=1035. 6x-20. 733, r=0. 999 9 (n=6)o 丹酚酸 b 进样量在 0.321.92 ug范围内线性关系良好。2. 2.7精密度试验 精密吸取供试品溶液在拟订的色谱 条件下

11、重复进样6次，结果峰面积的rsn1.91%,表明仪器 精密度良好。2. 2.8稳定性试验 取同一供试品溶液分别于配置后0、 1、2、4、8h进样，测定丹酚酸b的峰面积，结果峰面积的 rsd=1. 36%,表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。2. 2.9重复性试验 取批号为20120816的样品，平行制 备6份供试品溶液，并依法测定丹酚酸b的含量。结果丹酚 酸e的平均含量为1.79 mg/g, rsx1.24%,表明该方法重复 性好。2.2. 10加样回收率试验 精密称取6份批号为20120816 的样品，分别加入丹酚酸b对照品适量，按“2.2.3”项下 方法制备并测定，结果见表1。3讨论滋阴明

12、目片中丹参活血袪瘀，协助君药补肾养阴、益肝 明目，共奏滋补肝肾、活血化瘀之功。丹酚酸b为丹参中的 有效成分之一，因此，笔者以丹酚酸b的含量作为滋阴明目 片的质量控制指标，参考有关文献4-6建立了 hplc测定本 品中丹酚酸b含量的方法。2010年版中华人民共和国药典（一部）中测丹参中 丹酚酸b含量的流动相为甲醇-乙睛-甲酸-水 （30 ： 10 ： 1 ： 59）,在此流动相比例下丹酚酸b出峰时间过 早，与其他峰不能很好分离，故将比例调整为甲醇-乙睛 -1. 67%甲酸溶液（24 ： 10 ： 66）；而且在试验中，比较了分 别用60%、70%、80%的甲醇超声提取30 min或者加热回流1

13、h的样品处理方法，结果发现，加热回流1 h制备的供试品 溶液中的丹酚酸b含量稍高于用超声提取30 min制备的供 试品溶液，但差别不大，其中用80%的甲醇提取的浓度最高, 考虑到超声提取方法简便、节能，故确定用80%的甲醇超声 提取30 min。上述方法能将样品中的杂质与丹酚酸b分离开, 且稳定可靠、准确，重复性好，可用于滋阴明目片的质量控 制。滋阴明目片中的山萸肉、羌活、石菖蒲药材均采用2010 年版中华人民共和国药典的薄层色谱法鉴别，结果表明 山萸肉、羌活、石菖蒲的阴性无干扰。牡丹皮的薄层鉴别则 先采用药典方法，药材无斑点，后将制备过程中的乙瞇提取 换成乙醇提取，则能得到明显橘黄色斑点，阴性无干扰。以 上4味药材的鉴别可作为滋阴明目片的质量标准。参考文献：1 艾明，孙明，李岱视网膜色素变性的治疗进展j. 国际眼科杂志，2010, 10 (7)： 1324-1326.2 何文安，张虎，代丽华，等.视网膜色素变性的研 究进展j.基层医学论坛,2008, 12 (35)： 1132-1133.3 国家药典委员会中华人民共和国药典：一部s. 北京：中国医药科技出版社，2010.4 蒋桂