针对巨CK对免疫抑制法测定CK-MB的干扰及鉴别的探讨

1、针对巨ck对免疫抑制法测定ck-mb的干扰及鉴别的探讨史殿志 马连学向巧巧(辽宁省抚顺市矿务局总医院检验科 m3008)【中图分类号】r392【文献标识码】a【文章编号】1672-5085 (2013) 14-0200-01 【摘要】ck-mb测定作为诊断急性心肌梗死的特异性指标，已广为临床和检验 界认为是一个“金标准”。ck同功酶的分离和定量方法包括电泳、离子交换层析、 酶免疫抑制和放射免疫测定，现在较为常用的方法是电泳和酶免疫抑制。但巨 ck对免疫抑制法测定ck-mb有干扰，平时工作中应及时发现巨ck的干扰并鉴别 之。【关键词】ck； ck-mbck-mb测定作为诊断急性心肌梗死的特异性指

2、标，已广为临床和检验界 所关注。典型病例根据症状、病史的心电图不难诊断，但也有相当一部分(25-40%) 病例表现不典型，特别是在心电图上不出现异常的q波，给诊断带来了困难， 称之为无q波心梗。随着我院把ck-mb测定列入“牛化常规、牛化全项”的分 析组合中，使得ck-mb分析频率增加，我们在常规检验中经常遇到ck-mb总 ck50%,而总ck活性正常或轻度升高，甚至出现了 ck-mb高于总ck的反常现象， 而这些患者均无心肌梗死的临床表现。导致这一反常现象的原因是什么？1肌酸激酶(ck)ck是由m和b两类亚基组成的二聚体,ck有三种同工酶:ck-mm、ck-mb、 ck-bbo巨ck1是ck

3、同工酶与自身抗体的复合物，最多的是ckbb与igg或iga 的复合物，也有少数是ck-mm与igg或iga的复合物，巨ck2是一种低聚的线粒 体ck,乂称ck-mt,存在于细胞的线粒体膜上。当线粒体崩解时，线粒体膜的小碎 片进入血液，故ck-mt成低聚状态。2肌酸激酶同工酶(ck-mb)测定干扰已知ck有三种同工酶,即ck-mm (广泛分布在骨骼和心肌中)、ck-bb (主要分布在脑、肺、胃肠道、平滑肌等)和ck-mb (主要分布在心肌中)。琼 脂糖电泳可分别测定出血清中ck三种同工酶的含量（正常参考值ck-bb无或 微量，ck-mbo-5%, ck-mm 95-100%）免疫抑制法测定ck-

4、mb方法设计的前提 是由于ck-bb在正常人血清中极少，可将ck-bb忽略不计。其原理在于用特异的 抗ck-m亚基的抗体完全抑制ck-mm和ck-mb中m亚基的活性，然后测定ck-b 的活性，结果乘以2即为ck-mb活性。当血清中ckbb增加而用免疫抑制法测 定ck-mb吋，由于bb不受抑制，其活性已100%测出，且还要乘以2,成倍地扩 大了误差，以致出现ck-mb值等于或大于总ck活性的反常现象。此吋测得的 “ckmb”并不代表真正的ckmb水平，如果以此作为判断ami的标准就出现 问题，其至搅乱了临床诊断，造成误诊、漏诊。3巨ck的干扰巨ck1是ck同工酶与自身抗体的复合物，也有少数为ck

5、-mm与igg或 iga的复合物。巨ck2是一种低聚的线粒体ck,又称ck-mt, ck-mt存在于线粒 体内膜的外表面，由两个相同的亚基组成，其功能是偶联核昔酸移位酶的能量关 闭系统，在有氧的情况下通过磷酸肌酸穿梭机制提供肌肉收缩的能量。，当线粒 体崩解时ck-mt进入血液中。ck-mt的抗原性与ckm和ckb不同，故抗m的 抗体不能抑制ck-mt,导致ck-mb假阳性o ck-mt检测主要是电泳法、免疫化 学法、和组织化学方法，ck-mt在血清中有时以寡聚的形式存在，即巨ck2,在 电泳中出现于ckmm的后面，跑得最慢。ck-mt不同于胞浆型ck同工酶，常见 的肌病、手术等胞膜损伤，不能漏

6、出，只有当线粒体破坏吋，才能从血清中检出。4调查结果2010年一2011年ck-mb高于ck的120例病例调查见表认为出现巨ck2者98%为肿瘤病人ck-mt的岀现与恶性肿瘤高度相关5鉴别鉴别巨ck的方法主要有以下几种（1）琼脂糖凝胶电泳分析，可疑血清 进行琼脂糖凝胶电泳结合荧光染色扫描分析，发现巨ck1位于ck-mm和ck-mb 之间，巨ck2位于ck-mm的阴极侧（2）热失活法，将可疑血清置45°c20min测 定ck活性，发现ckbb和ck-mb几乎完全失活，而巨ck不受影响(3)免疫法 结合电泳法，将可疑血清先于抗人igg或iga的抗血清进行混合，置4°c过夜，离 心取上清液进行ck同工酶电泳。观察与lg反应前后电泳区带的变化。巨ck2无 任何变化，但巨ck1则不同。只要与相应的抗igg或iga抗血清发生反应后，原 有的异常带减弱或消失，则提示巨ck1的存在，其形成与该免疫球蛋白有关。6讨论为避免误诊、漏诊，在采用免疫抑制法测定ck-mb吋特别提出如下注 意事项:(l)ck-mb<16u/l为阴性，不用计算占总0的值。(2)ckmb参考范 围在总ck4-25%,至多也不&gt；30%o要按公式计算ck-mb占总ck的值并判 断其影响因