慢性乙型肝炎患者淋巴细胞亚群变化及意义

1、慢性乙型肝炎患者淋巴细胞亚群变化及意【摘要】目的：通过观察慢性乙型肝炎病人与正常人外周 血中淋巴细胞亚群的变化，研究乙肝的发病机制与宿主细胞 免疫功能的关系。方法：收集2009年10月至2010年3月 在黑龙江中医药大学附属第一医院就诊的慢性乙肝病人32 例和健康人20例的外周血，使用流式细胞仪检测淋巴细胞 亚群并分析其差异及临床意义。结果：慢性乙肝患者与正常 对照组比较，cd3+、cd44+及cd3+细胞数均减少（p<0. 05）； 与正常对照相比外周血nk细胞减低（p0. 05）；与正常对 照相比外周血b淋巴细胞升高（p0. 05）o结论：慢性乙肝 患者血中细胞免疫功能紊乱，t淋巴细

2、胞亚群失衡等可能与 乙肝病毒感染后慢性化有关。【关键词】慢性乙型肝炎；t细胞亚群；nk细胞；b淋 巴细胞【中图分类号】r512. 6+2【文献标识码】a【文章 编号】1007-8517 （2012） 10-0074-02乙型肝炎病毒（hbv）感染人数众多，我国hbv感染率 为60%,乙肝表面抗原阳性率约10%,是导致慢性肝病最 常见的原因。hbv感染可以引起肝细胞的免疫性损害，其病 理过程涉及到t细胞、b细胞、nk、nkt等细胞。本文通过 分析慢性乙肝病人与健康人免疫细胞的差异，来探讨乙型肝 炎发病机制与宿主细胞免疫功能的关系。1材料和方法2009年10月至2010年3月在黑龙江中医药大学附属

3、- 第一医院就诊的慢性乙型肝炎病人32例和健康人20例，诊 断符合肝病学会联合修订的病毒性肝炎的诊断标准。乙肝患 者中男23例、女9例，年龄18-63岁，平均年龄34±13岁， 血清中谷丙转氨酶均超过正常2倍以上。所有病人均未接受 过任何与肝病相关的治疗。健康对照组20例，男14例、女 6例，年龄1861岁，平均年龄34±9岁。1. 1仪器与试剂 使用美国bd公司facsculiber流式 细胞仪测定样本中的淋巴细胞亚群，试剂均由该公司提供。1. 2检测方法标本制备：(1)用k2-edta抗凝管收集外 周静脉血2ml混匀，2ml用于流式细胞仪测定，室温下送检。(2)抗体标记

4、：取2支检测管，分别加入如下抗体组合， 每种抗体20 u 1。cd4、cd8.cd3细胞亚群抗体；cd16+56. c叽9抗体；(3)上述管中加入50卩1全血，混匀避光室温孵 育20分钟；(4)加入500 u 1ofhlysec溶血素，混匀避光 26°c水浴溶血10分钟；(5)加入2mlpbs洗液，振荡混匀， 1500r/min,离心5rain,弃上清；(6)重复步骤(5)； (7) 每管加入0. 5mlpbs洗液，混匀避光放置，2h内完成上机检 测。仪器检查达标准后开始检测。每管读取细胞5000个， 将流式细胞仪检测的各亚群占淋巴细胞总数的百分比与血 常规结果中淋巴细胞计数值相乘，

5、得到各亚群细胞的数。1. 3统计学处理实验数据用土s表示。采用spss统计 软件进行分析。多组比较采用方差分析，组间两两比较采用 q检验。p<0. 05有统计学意义。2结果每组之间淋巴细胞亚群、淋巴细胞及白细胞总数进行比 较：病人组淋巴细胞和白细胞计数显著低于对照组。淋巴细 胞亚群中b细胞计数、nk细胞计数低于对照组（见表1）; 外周血cd4+t、cd8+细胞低于对照组（见表2）。3讨论hbv主要是通过引起宿主自身的免疫反应而造成肝细胞 的损伤。国内外初步研究显示，慢性乙型肝炎病人体内存在 着细胞免疫功能的紊乱，t淋巴细胞亚群失衡，使机体不能 有效清除入侵的乙肝病毒，导致疾病的慢性化。我

6、们通过检 测慢性乙肝病人和正常人的淋巴细胞亚群的变化，来了解是 否存在淋巴细胞亚群免疫功能紊乱。实验结果显示，与正常 对照相比，慢性乙肝患者cd4+、cd8+t细胞计数减少。cim+t 为辅助性t细胞，能促进b细胞等其他免疫细胞的增殖和分 化，调节体液免疫和细胞免疫；cd8+t细胞由细胞毒性t淋 巴细胞和抑制性t细胞组成。国内外研究显示在急性乙肝患 者体内存在着针对乙型肝炎病毒强烈多克隆cim+t细胞反应 和细胞毒性t淋巴细胞（ctl）反应，而在慢性乙肝患者中 这种反应很弱或检测不到。这就提示乙型肝炎病毒感染后 hbv特异性cd4+t细胞和cd8+t细胞反应对病毒的清除和疾 病的转归起重要的作

7、用。cim+t细胞和cd8+t细胞计数的减 少，可能导致机体细胞免疫功能降低，乙肝病毒感染后不易 被清除，与疾病慢性转归密切相关，但是，cd8+t细胞数量 改变不能完全反映其功能上的变化，并且外周血中cd8+t细 胞数量并不能完全反映肝细胞的情况。因此，尚需完善t细 胞功能方面的检测及进行肝组织活检来进一步分析ctl与乙 肝临床转归的关系。慢性乙肝患者nk细胞计数低于正常对照。nk细胞是机 体自然免疫的主要承担者，也是获得性细胞免疫的核心细 胞。研究发现nk细胞缺陷的病人易发生多种危及生命的病 毒感染，这可能与nk细胞缺乏导致的ctl功能丧失有关。 在对乙肝病毒的细胞免疫中hbv特异性的ctl反应对疾病的 转归起着决定性作用。因此nk细胞减少可能与hbv感染后 慢性转归密切相关。与正常对照相比，慢性乙肝患者外周血 b淋巴细胞亚群比例升高。b淋巴细胞具有产生抗体、清除、 提呈抗原、分泌细胞因子参与自身免疫等作用，b细胞通过 分泌抗体中和游离的病毒颗粒，阻止病毒进入肝细胞和阻止 细胞间的病毒传播。活化b细胞是一类抗原呈递细胞，能够 产生大量参与免疫调节、炎症反应及造血过程的细胞