黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的研究

1、黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的研究严金玲严文华(通讯作者)李斌曾洁钟声杨人泽(赣南医学院第一附属医 院江西赣州341000)【摘要】 目的 观察黄花倒水莲提取物促凝血作用及机制的影响。方法 采用 体外血浆法测定药物对凝血作用的影响。采用凝血因子分析仪测定血浆纤维蛋白 原、优球蛋白溶解时间、活化部分凝血活酶时间。结果 黄花倒水莲提取物能明 显缩短血浆凝血酶时间；减小凝血酶原时间；升高血浆纤维蛋白原和延长优球蛋 白溶解时间；缩短活化部分凝血活酶时间。结论 黄花倒水莲提取物具有明显的 促凝血作用，其促凝血作用机制可能与升高血浆纤维蛋白原和优球蛋白溶解时间; 降低活化部分凝血活酶时间有关。【关键词

2、】黄花倒水莲 凝血酶时间(tt)凝血酶原时间(pt)血浆纤维蛋白原 (fib)优球蛋白溶解时间(elt)活化部分凝血活酶时间(aptt)黄花倒水莲(pfh)又称假黄花远志，主产于湖南、广西、江西、广东 和云南等地，药用其全草1-2o其性平、微温、味甘、微苦;具补益气血、健脾 祛湿、活血化瘀、调经等功效。研究表明：黄花倒水莲根含有皂昔、多糖、有机 酸、氨基酸等，具有明显的抗衰老、改善心肌缺血、免疫调节、抗应激、抗衰老、 抗病毒活性35等作用，主治虚弱虚肿、急慢性肝炎、腰腿酸痛、跌打损伤。有 人报道黄花倒水莲提取物抗血脂作用6、对实验性胃黏膜损伤的保护作用、对 实验性肝损伤的保护作用。现报道黄花倒

3、水莲提取物促凝血作用及机制的研究。1材料和方法1.1材料黄花倒?k莲提取物的希9备取干燥黄花倒200g,加双蒸水过液面2cm,煮沸2次。30min/次，合 并滤液，浓缩至400mlo加3倍量95%的乙醇，放冰箱静置过夜，次日减压过滤， 并回收滤液中乙醇，继续浓缩滤液得无醇味的提取物。提取物加双蒸水至200ml 使药液为相当于生药lg/ml用0.5%naoh调整ph为7.0。置冰箱中备用。1.1.2试验动物健康成年sd大鼠(江西中医学院实验动物中心提供)，体重300400g, 雌雄各半，随机分纽，1.1.3药品与试剂10%的水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，批号：20090407)；枸 椽酸钠

4、(1:9)真空采血管(江西富尔康实业集团有限公司，批号：20090903)；凝 血酶原时间测定试剂盒和凝血酶时间测定试剂盒(上海太阳生物技术有限公司产 品)。统计分析：实验结果均以x±s表示，数据进行单因素方差分析。2方式与结果2.1分组及给药清洁级sd大鼠15只，随机分为三组：a.空白对照组；b.低剂量黃花倒 水莲提取物组(1.5g/kg)； c.高剂量黄花倒水莲提取物组(3.0g/kg)o高、低剂量 组每天以相应量的药物灌胃，空片对照组给予等量生理盐水灌胃，每天一次，持 续5天。2.2黄花倒水莲提取物对体外凝血时间的测定实验前动物禁食12h,末次给药后0.5h,以10

5、%的水合氯醛麻醉 (0.35ml/100g),用毛细管从眼睛内眦部插入眼底，血液即进入毛细管内，直至血 液从毛细管内流出，舍弃第一滴，然后取洁净玻片接一滴血(直径约5mm左右)， 并按下秒表开始计吋，每10-20s用清洁6号针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观 察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝为止即为凝血时间，记录凝血时间。表1黄花倒水莲提取物对大鼠玻片凝血时间的影响(-x&plusmn;s； n=5)与空白组比较，*p<0.05； *p<0.01o2.3黄花倒水莲提取物对凝血酶原吋间(pt)的测定取待测血浆0.1ml,37°c水浴孵育3min,加入37°

6、c预温的凝血活酶0.2ml, 混匀，立即启动秒表，记录凝固吋间，即为凝血酶原时间值(s)。每个样品重复实 验5次，取其平均值。图1黄花倒水莲提取物对凝血酶原时间的影响与空白组比较，*p<0.05o2.4黄花倒水莲提取物对凝血酶时间(tt)的测定眼眦取血后，暴露大鼠腹腔，分离腹主静脉，用枸椽酸钠抗凝(1： 9)真 空采血管自腹主静脉采血2ml,轻轻摇匀，后3000r/min离心15min,取上清液， 即待测血浆。取待测血浆o.lml, 37°c水浴孵育3min,加入凝血酶0.1 ml,混匀，立 即启动秒表，记录凝固吋间，即为凝血酶吋间值。每个样品重复实验5次，取 其平均值。图2黄

7、花倒水莲提取物对凝血酶时间的影响与空白组比较,*p<0.05o2.5黄花倒水莲提取物对优球蛋白溶解吋间(elt)的测定sd 大鼠，体重 200&plusmn;20g,心脏采血 1.8ml, o.lmol/l 草酸镀 1：9抗凝,3000r/min离心lomin,分离贫血小板血浆。取0.5ml新鲜血浆,按文献 方法制得纤维蛋白凝块，加不同浓度的黄花倒水莲提取物，对照组加生理盐水， 37°c孵育，记录凝块完全溶解吋间。表2黄花倒水莲提取物对优球蛋白溶解时间的影响(-x&plusmn;s； n=5)与空白组比较，*p<0.05； *p<0.01o2.6黄花

8、倒水莲提取物对活化部分凝血活酶时间(aptt)的测定大鼠心脏取血4.5ml,置入含3.8%枸椽酸钠0.5ml的离心管中，动脉血 与抗凝剂的比例严格控制为9： 1,混匀后以3000r/min的速度离心lomin,用微 量进样器分别取得所需血浆量，参照lg-paber血小板聚集器凝血因子分析仪操 作规程进行测定，记录aptto表3黄花倒水莲提取物对活化部分凝血活酶时间的影响(-x&plusmn;s； n二5)与空白组比较，*p<0.05； *p<0.01o2.7黄花倒水莲提取物对血浆纤维蛋白原(fib)的测定大鼠采集血浆后，置离心管中，56°c加热lomin,然后30

9、00r/min离心 lomin,参照lg-paber血小板聚集器凝血因子分析仪操作规程进行测定，记录 fibo表4黄花倒水莲提取物对血浆纤维蛋白原的影响(x&plusmn;s； n=5)与空白组比较,*p<0.05； *p<0.01o3讨论实验表明：黄花倒水莲提取物既能影响内源性凝血途径，又能作用于外 源性凝血途径。能明显的促进血液凝固，其促凝血作用机制可能与升高血浆纤维 蛋白原和优球蛋白溶解时间；降低活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间国际标 准比值有关。本研究为黄花倒水莲促凝血作用的提供了有利的基础实验证据。但其对 各凝血因了的影响程度还有待进一步的探讨。参考文献江苏新医学院中药大辞典m上海：上海科学技术出版社，1996： 2079. 陈书坤.中国远志属植物的分类研究.植物分类学报，1991,29(3):193-2293秦华珍，夏新华，李钟文等黄花倒水莲多糖的抗席激作用j 广西中医药,1996, 19(3)： 52-54.4李梨平，王伟华黄花倒水莲对乙肝病毒e扰