生物样品中尼古丁及其代谢产物的GC-MSD法测定

1、生物样品中尼古丁及其代谢产物的gc-msd法测定孙晓红于波包金洋刘彤罗侃（哈尔滨市疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨 150056）【摘要】目的建立对牛物材料中尼古丁及其代谢产物的分析方法。方法 建立的 尼古丁及其代谢产物的气相色谱质谱联用的检测技术和方法，为烟草暴露评价提 供了客观可靠的方法。结果尼古丁和可替宁的检出限为分别为0.06μg/ml> 0.14μg/ml,测定下限分别为 0.020μg/ml> 0.048μg/mlo rsd 尿液中 尼古丁和可替宁分别为2.02%2.62%、5.27%-7.24%；头发中尼古丁和可替宁

2、分别 为1.09%2.89%、2.71%-6.61%o尿液中尼古丁及可替宁的加标回收率分别为 82.01%-105.90%> 82.20%-99.78%；头发中尼古丁的加标回收率分别 85.33%-103.91%o结论由于采用了毛细管气相色谱分离技术和选择离子扫描采 集数据，可有效排除其他组分对尼古丁的干扰。【关键词】牛物样品gc-msd尼古丁及其代谢产物吸烟和被动吸烟是肺癌、慢性呼吸系统疾病、冠心病、脑卒中等多种疾 病发牛和死亡的重要危险因素。在世界前8位死因中，吸烟是其中六种疾病的危 险因素。近几年，我国人群二手烟暴露状况没有任何改善。保护非吸烟者免受二 手烟的危害己迫在眉睫。尼古丁

3、是烟草中存在的一种生物碱，可以作为烟草暴露 的特异性污染物，尼古丁半衰期较短，其代谢物可替宁因半衰期长而作为检测吸 烟和戒烟的标志物。尼古丁及其代谢物的实验室样品分析方法使用气相色谱质谱 联用技术。1材料与方法1.1试剂和材料1.1.1三氯甲烷：色谱纯；1.1.2尼古丁：色谱纯；1.1.3可替宁：色谱纯；1.1.4嗤ii林：色谱纯;1.1.5甲醇：分析纯；1.1.6 naoh 溶液：c （naoh） =1.5mol/l,取 60.0g 的 naoh 溶于 1l 纯水 中，混匀；1.1.7氨气:99.999%或以上纯度。1.2样品米集尿液：收集烟草暴露2-3小吋的受试者尿液（约30ml）于已编号

4、的50ml 聚丙烯塑料瓶中，加入硫酸氢钠0.5gl.og （以防止尿样腐败，同时保证尿样中 尼古丁和可替宁在运输和贮存过程中稳定），拧紧瓶盖，于4°c冰箱中冷藏可保 存一周，零下20°c可保存一个月。头发：取受试者枕后离头皮2cm处的头发（约辽）收集在已编号的纸质信封中， 常温保存。1.3分析步骤1.3.1标准溶液准确称取loo.omg尼古丁、可替宇溶于异丙醇溶液中，配成每毫 升含10陀的尼古丁、可替宁标准混合储备液；称取约400mg 溶于10mlc7 溶液中，配成每毫升含40mg pfltt的内标一级溶液；分别移取0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, l.oml混

5、合储备液于6个：loml容量瓶中，再各加入o.lml内标一级溶液, 用 c7 稀释至lj 100ml,酉己成浓度分别是 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0μg/μl, 含内标约0.4μg/μl的标准系列。另取0.1ml40mg/ml的内标一级溶液， 用c7稀释到10ml,配成含内标0.4μg/μl的内标二级溶液，用于向样品 中加入内标。1.3.2样品处理头发：取约500mg的头发依次用纯水、二氯甲烷洗涤，去除外源性物 质的干扰，自然晾干后剪至l-2mm,准确称取100mg的头发加入3mll.5m n

6、aoh 溶液，超声30分钟后水浴37度消解3小吋。取消解完全的头发2ml,加入lml 含有内标物隆咻的三氯甲烷，在涡旋混合器上充分混合75秒（先混合40秒，再 混合35秒)，将混合液离心5min(7000rpm),静置待分层后弃去上层水相，下层 有机相待测。尿液：将保存于4°c冰箱中的尿液在室温下放置30min,取2ml的尿液 于试管中，加入100μl 2m naoh溶液，lml含有内标物卩奎啦的三氯甲烷，在 涡旋混合器上充分混合75秒(先混合40秒，再混合35秒)，将混合液离心 5min(7000rpm),静置分层后弃去上层水相，下层有机相待测。1.3.3仪器分析条件

7、进样口温度：250°c；载气流量：iml/min；分流比：20:1；柱子程序升温:初始温度140°c保持lmin,5°c/min升到160°c保持lmin, 再以30°c/min升到230°c保持lmin;再以75°c/min升到280°c保持2min。离子源温度：230°c；四级杆温度：150°c；接口温度：280°c；溶剂延 迟：3min；sim采集数据，尼古丁特征离子分别为m/z： 162, 133, 84, 42,其中 84为定量离子；可替宁特征离子分别为m/z： 98, 11

8、9, 147, 176其中98为定 量离子；二苯胺特征离子分别为m/z： 51, 66, 77, 169其中169为定量离子。2结果与讨论2.1实验条件的选择2.1.1色谱柱的选择为了减少柱流失而选择ms柱，因此选择db-5ms 毛细管色谱柱(0.25mm×30m×0.25m)。2.1.2气相色谱条件的选择在保障各组分的充分分离，又得到比较理想 的色谱峰型，并使实验吋间尽量缩短，选择炉温：i40°c(lmin)→(30°c/min) →230°c(lmin) →(75&#

9、176;c/min) →280°c(2min)进样口 ： 250°c,分流比： 20:1,载气流量：lml/min,溶剂延迟：3min； o2.2标准工作曲线及检出限在选定的色谱工作条件下进样，以尼古丁、可替宁标准品浓度为横坐标,峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程见表3小结由于采用了毛细管气相色谱分离技术和选择离子扫描采集数据，可有效 排除其他组分对尼古丁的干扰。尼古丁和可替宁的检出限为分别为0.06μg/ml> 0.14μg/ml,测 定下限分别为0.20μg/ml> 0.48μg/ml。rsd尿液中尼古丁和可替宁分别 为2.02%2.62%、5.27%7.24%；头发中尼古丁和可替宁分别为1.0 9%-2.89%> 2.71%-6.61%o尿液中尼古丁及可替宁的加标回收率分别为82.01%-105.90%> 82.20%-99.78%；头发中尼古丁的加标冋收率分别85.33