硫酸奈替米星检验操作规程

1、题目： 硫酸奈替米星检验操作规程编 码ZL2-页 码共19 页版 本1复印份数：起草人：苟希侠审核人：批准人：颁发部门：质量管理部分发部门：办公室执行日期：变更记录修订号 批准人 执行日期变更原因及目的：·目的 指导硫酸奈替米星原料的检验，为硫酸奈替米星原料的检验提供书面依据。·范围 硫酸奈替米星原料。·责任 中心检验室、检验员。·内容1、性状1.1.1取本品少量放在白纸板上目视观察为白色或类白色粉末或疏松块状物。1.1.2取本品少许放入口中味微苦，用鼻闻无臭。1.1.3取本品少量，置洁净的烧杯中，久置于空气中变为淡黄色。 1.1.4取本品1g加10ml

2、水全部溶解。1.1.5取本品1g分别用10000ml乙醇、氯仿者不能全部溶解。1.2比旋度 1.2.1检验用具：WZZ2A型旋光仪1.2.2供试品溶液的制备：精密量取本品适量，用水制成10mg/ml作为供试品溶液。1.2.3按WZZ2A型旋光仪操作规程打开旋光仪，稳定15分钟。1.2.4将水注入试管中排除汽泡作为空白溶液，校零。共19 页第1页1.2.5将供试品溶液注入试管中排除汽泡，测定记录显示屏数据，按下复测按钮反复写3次 取平均值吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程计算公式：（a）=100A / LC其中：L为试管长度，C为100ml中所含溶值克数，A为测得旋光度。1.2.6 注

3、意事项 1.2.6.1每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正1次以确定在测定时零点有无变化，如第2次校正发现零点有变动，则应重新测定旋光度。1.2.6.2 对温度有严格要求的供试品，在测定前应将仪器及供试品置规定温度的恒温水浴箱内恒温至少1小时，如有特殊规定温度应调节至120±0.5。1.2.6.3 未接通电源前应检查仪器样品室内有无异物，钠光灯和其它示数开关是否放在有关或规定的位置，钠光灯启辉后仪器不许搬动，以免损坏钠光灯。 1.2.6.4 钠光灯启辉后至少20分钟后发光才稳定，测定或读数对应在钠光灯稳定后读数，尽量使用直流电路供电，不测定时，间隔置于交流供电，以延长钠光灯寿

4、命。 1.2.6.5 测定零点或停点时，必须按动复测钮数次使检偏镜分别向左或向右偏离光学零位，减少仪器的机械误差，同进通过观察左右复测数次的停点，检查仪器的重复性和稳定性，必要时，也可用旋光标准石英管校正仪器的准确度。 1.2.6.6 测定管若有汽泡，应先使汽泡浮于凸颈处或除去透光面两侧的玻璃，应用软布擦干。 1.2.6.7 测定管两端的螺帽应旋至适中的位置，并注意测定管测定时的位置和方向。 2、鉴别 2.1.1鉴别用仪器：薄层色谱硅胶G薄层板、层析缸。2.1.2鉴别用试液：二氯甲烷、甲醇、浓氨溶液；0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液：取0.2g茚三酮加水饱和的正丁醇溶液（向正丁醇中国入水充分混

5、匀即可）。 2.1.3 供试品溶液的制备：取本品适量制成3mg/ml的溶液即可。2.1.4 标准品溶液的制备：取奈替米星标准品适量制成3mg/ml的溶液。2.1.5 取2.1.3 及2.1.4的两种溶液按1：1比例混合。2.2操作步骤2.2.1照薄层色谱法将三种溶液各2ml点于同一薄层板上。共19页第2页2.2.2 以二氯甲烷甲醇浓氨溶液（4：4：2）为展开剂展开晾开。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程2.2.3 喷以0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液。 2.2.4 在110加热20分钟即可显示出斑点。2.2.5 注意事项2.2. 5.1 点样时，样点为圆点，点样基线距底边2.0cm，

6、点样时切勿操作薄层表面。2.2.5.2 将点好样品的薄层板放入展开剂的浓度为距，薄层板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）密封缸盖，待展开至规定距离（1015cm）取出薄层板晾干。3、酸度3.1检验用仪器：PHS3C型酸度计及其复合电极。3.2检验步骤：3.2.1取本品适量加水制成40mg/ml溶液作为供试品溶液。3.2.2打开PHS3C型酸度计电源，将温控旋钮调制室温稳定15分钟。3.2.3用邻苯二钾缓冲液定位，用混合磷酸盐缓冲液校正。3.2.4供试品溶液浸没复合电极，轻轻晃动，放稳后看显示屏读数反复测定3次取平均值。3.3注意事项3.3.1酸度计的精密度和准确度应符合规定每年检定

7、一次。3.3.2应用新沸过并冷至室温的纯化水制备缓冲液，用标准缓冲液校正和测定供试品溶液前，用水充分洗涤电极并用滤纸将水吸干。3.3.3标准缓冲液配置后可使用23个月，但发现有混浊，发毒或沉淀现象时应停止使用重新配制。3.3.4复合电极使用期限为一年。4、溶液澄清度4.1试剂乌洛托品（AR级）、硫酸肼（AR级） 4.2仪器与用具容量瓶、恒温干燥箱 4.3操作步骤：共19页第3页4.3.1本法系在室温条件下，将用水稀释至一定浓度的供试品溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃等（内径1516mm，平底，具塞，以无色、透明、中性硬质玻璃制成）中，在浊度标准液制备5分钟后，在暗室内垂直同置于伞

8、棚灯下，照度为1000LX，从水平方向观察、比较；用以检查溶液的澄清度或其浑浊度程序。除另有规定外，供试品溶解后应立即检视。正文中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5浊度标准液。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程4.3.2浊度标准贮备液的制备：称取105干燥至恒重的硫酸肼1.00g，置100ml置瓶中，加水适量使溶解，必要时可在40的水浴中温热溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，放置46小时；取此溶液与等容量的10%乌洛托品溶液混合，摇匀，于25避光静置24小时，即得。本液置冷处避光保存，可在两个月内使用，用前摇匀。4.3.3浊度标准原液的制备：取浊度标准贮

9、备液15.0ml，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取适量置1cm吸池中，照分光光度法。在550nm的波长处测定，其吸收度应在0.120.15范围内。本液应在48小时内使用，用前摇匀。4.3.4浑浊度标准液的制备取浊度标准原液与水，按下表配制，即得。本液应临用时制备，使用前充分摇匀。级号0.51234浊度标准原油/ml水/ml2.5097.505.095.010.090.030.070.050.050.05、溶液颜色5.1试剂K2Cr2O7(AR级) 、 CuSO4(AR级) 、 Na2SO3(AR级) 、 CoCl2、 EDTA2Na 5.2仪器与用具纳氏比色管 5.3操作步骤：

10、5.3.1第一法：除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解，置于25ml的纳氏比色管中，两管同置白色背景上，自上向下透视，或同置白色背景前，平视观察；供试品管呈的颜色与对照比较，不得更深。共19页第4页 5.3.1.1比色用重铬酸钾液：取重铬酸钾，研细后，在120干燥至恒重，精密称取0.4000g，置500ml量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。每1ml溶液中含0.800mg的K2Cr2O7。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程 5.3.1.2比色用硫酸铜液：取硫酸铜约32.5g，加适量的盐酸溶液（140）使溶解成500ml，精密量取10ml，置碘量瓶中，加水50m

11、l、醋酸4ml与碘化钾2g，用硫代硫酸钠滴定液 （0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失。每1ml硫代太酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于24.97mg的CuSO45H2O。根据上述测定结果，在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液（140），使每1ml溶液中适含62.4mg的CuSO45H2O，即得。 5.3.1.3比色用氯化钻液：取氯化钻约32.5g，加适量的盐酸溶液加氨试液至溶液加氨试液至溶液由浅红色转变至绿色后，加醋酸醋酸钠缓冲液（pH6.0）10ml，加热至60，再加二甲酚橙指示液5滴，用乙二胺四腊酸二钠滴定液（0.5mol/L）相当于11.90mg的C

12、oCl26H2O。根据上述测定结果，在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液（140），使每1ml溶液中适含59.5mg的CoCl26H2O，即得。 5.3.1.4个种色调标准贮备液的制备：按下标量了比色用氯化钻液、比色用重铬酸钾液、比色用硫酸铜液与水摇匀，即得。各种色调标准贮备液的配制表色 调比色用氯化钻液/ml比色用重铬酸钾液/ml比色用硫酸铜液/ml水/ml黄绿色黄色橙黄色橙红色棕红色22.51.24.010.612.012.522.823.319.020.020.07.204.0045.068.872.766.4680 各种色调色号标准比色液的制备按下表量取各色调标准贮备液与水，摇匀，即得。

13、各色调号标准比色液的配制表色号12345678910贮备液加水量/ml0.59.51.09.01.59.02.08.02.57.53.07.04.55.56.04.07.52.510.006、有关物质共19页第5页6.1检验用仪器：薄层色谱板、层析缸。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程6.2检验用试剂：三氯甲烷、甲醇、浓氨溶液 0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液。6.3标准品溶液：取奈替米星标准品制成1.5mg/ml和3mg/ml的溶液，作为标准品溶液（1）、（2）取西梭米星标准品加水制成1.44mg/ml的溶液，作为标准品溶液（3）。6.4供试品溶液的制备：取本品加水制成150mg/

14、ml的溶液作为供试品溶液。6.5操作步骤：6.5.1照薄层色谱法将四种溶液各2ml点于同一薄层板上。6.5.2以二氯甲烷，甲醇浓氨溶液（4：4：2）为展开剂展开，晾干。6.5.3喷以0.2%茚三同水饱和正丁醇溶液。6.5.4在110加热20分钟，即可显出斑点。6.6注意事项6.6.1点样时，样点为圆点，点样距线底边2.0cm点样时切勿损伤薄层表面。6.6.2将点好样品的薄层板放入展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）密封缸盖，待展开至规定距离（1015cm）取出薄层板，晾干。7、硫酸盐7.1仪器与用具：三角烧杯、滴定管、移液管7.2操作步骤： 7.2

15、.1精密称取本品约0.12g，加水100ml使溶解7.2.2用浓氨溶液调节PH至11。7.2.3精密加氯化钡滴定液（0.1mol/L）10ml，酞紫指示剂5滴。7.2.4用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol/L）滴定。7.2.5至紫色开始消退加入乙醇50ml，继续滴定，只蓝色消失。7.3注意事项：滴定过程PH保持11。7.4计算公式：V×9.601×F共19页第6页 ×100% m吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程8、细菌内毒素8.1检验用材料鲎试剂（0.5Eu/ml）、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水。8.2检验用设备电热干燥箱，恒温水浴

16、箱，酒精温度计，旋涡混合器。8.3检验用具移液管、封口膜、时钟、试管8.4检验步骤8.4.1将移液管用洗涤剂和自来水洗净，控干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出将洗液控干，用自来水将残余的洗液洗净，再用新鲜纯化水冲洗干净后置适宜的密闭金属容器中，迅速置干燥箱中。8.4.2将玻璃器皿置恒温干燥箱后，将恒温干燥箱调至250，待恒温干燥箱温度升至设定温度后，记时1小时后，关断电源，待恒温干燥箱温度自然降至室温，取出金属容器。8.4.3取细菌内毒素工作标准品1支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后开启，（应防止玻璃屑落入瓶内）。按标准使用说明书用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水，用封口

17、膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟，再用内毒素检查用水制成1Eu/ml浓度的内毒素溶液，作阳性对照液。8.4.4取本品加内毒素检查用水使之稀释成0.25mg/ml作为供试品，备用。8.4.5再取1支细菌内毒素工作标准品，按10.4.3方法，用本品制成1.0Eu/ml，作为供试品阳性对照液备用。8.4.6在制备内毒素溶液和供试品阳性对照液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂8支，手指轻弹瓶壁瓶颈部，使颈部瓶壁上的粉未落入瓶内，用75%乙醇棉球擦拭瓶外壁后，开启，加入0.1ml内毒素检验用水轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。8.4.7取溶解后的鲎试剂原安瓿8支，取其中2支各加入供试品

18、0.1ml作供试品管。8.4.8其中2支加0.1ml的内毒素阳性对照溶液，作阳性对照管。8.4.9其中2支加入0.1ml的内毒素检查用水阴性对照管。共19页第7页8.4.10其中2支加入0.1ml的供试品阳性对照液，作为供试品阳性对照管。8.4.11将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37±1水浴中，保温60±2分钟，此过程应避免受震动，以免造成假阴性结果。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程8.4.12将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180：其中管内凝胶不变形、不滑脱者为阳性，凝胶不能保持完整，并从管壁滑脱者为阴性。8.4.13供应品2管均为阴性，阴

19、性管为阴性，阳性管和供试品阳性对照为阳性，应认为符合规定，否则应另取复试。8.5注意8.5.1实验前，须用肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒。8.5.2试验时须戴工作帽和口罩。8.5.3本试验应在洁净室或洁净工作台内进行。8.5.4用移液管吸取样品时，须用洗球，勿用嘴吸、吹，防止唾液溅入。9、水分9.1检验试剂 I2（AR级）、SO2（AR级）、C5H5N（AR级）、无水CH3O4（AR级）9.2仪器与用具附滴定装置的棕色瓶、微量水分测定仪9.3操作步骤9.3.1原理： 本法是根据碘和二氧化硫在吡啶和甲醇溶液中能与水起定量反映的原理以测定水分。所用仪器应干燥，并能避免空气中水分的侵入；测定操作者宜

20、在干燥处进行。本法即为费休氏法中的容量测定法。9.3.2费休氏试液的制备与标定9.3.2.1配制：称取碘（置硫酸干燥器内48小时以上）110g，置干燥的具塞烧瓶中，加污水吡啶160ml，注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300ml，称定重量，将烧瓶置冰浴中冷却，通入干燥的二氧化硫置重量增加72g，在加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存。临用前主在标定浓度。共19页第8页9.3.2.2标定：用水份测定仪直接标定。或取干燥的具塞玻瓶，精密称入重蒸馏水约30mg，除另有规定外加无水甲醇25ml，用本液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永

21、停滴定法指示终点：加作空白试验，按下式计算。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程WF = A- B式中 F为每1ml费休氏试液相当于水的重量，mg；W为称取重蒸馏水的重量，mg；A为滴定所消耗费休氏试液的容积，ml；B为空白所消耗费休氏试液的容积，ml。9.3.2.3测定法：精密称取供试品适量（约消耗费休氏试液15ml），除另有规定外，溶剂为甲醇，用水分测定仪直接测定。或将供试品至干燥的具塞玻瓶中，加溶剂25ml，在不断振摇（或搅拌）下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点；另作空白试验，按下式计算。（A-B）F供试品中水分含量（%） = ×100%

22、W式中 A为供试品所消耗费休氏试液的容积，ml； B为空白所消耗费休氏试液的容积，ml； F为每1ml费休氏试液相当于水的质量，mg； W为供试品的重量，mg。9.4注意事项：9.12.1配制时所用试剂的纯度，特别是含水量应严格控制在0.1%一下，如试剂水分超过规定，可是选用干燥的分子筛将其水分除掉后再用。本试液接触的一切仪器均应清洁干燥，标定或测定时宜在干燥环境中进行。9.12.2配制本试液时必须配戴眼镜等保护用具。9.12.3本试液不稳定，随放置时间增加浓度逐渐降低，因为碘、二氧化硫、吡啶、甲醇四中组分在一起容易发生副反应。当F值降低至3.0mg/ml以下时，滴定终点不敏锐，不宜再用。F值

23、应在12.0mg/ml以上。9.12.4某些固体供试品需先溶于无水甲醇（或规定溶剂）25ml中，在以法测定。另作空白试验矫正。共19页第9页10、炽灼残渣吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程10.1仪器与用具：高温炉、坩锅、坩锅钳、通风柜。10.2试药与试液硫酸（分析纯）10.3操作方法10.3.1空坩锅恒重 取坩锅置于高温炉内，将盖子斜盖在坩锅上，经700-800炽灼约3060分钟，取出坩锅，稍冷片刻，移置干燥器内并盖上盖子，放冷至室温（一般约需60分钟），精密称定坩锅重量。再在上述条件下炽灼约30分钟，取出，置干燥器内放冷、称重、重复数次直到恒重。 10.3.2称取供试品 取供试品

24、2.0g，置已炽灼恒重的坩锅内，精密称定；10.3.3炭化 将盛有供试品的坩锅斜置电炉上（避免供试品骤然膨胀而逸出），炽灼至供试品全部炭化呈黑色，并不冒浓烟，放冷至室温。“炭化”操作应在通风柜内进行。10.3.4灰化 除另有规定外，滴加硫酸0.5-1.0ml，使灰化物全部湿润，继续在电炉或煤气灯上加热至硫酸蒸气除尽，白烟完全消失（以上操作应在通风柜内进行），将坩锅移置高温炉内，盖子斜盖于坩锅上，在700-800炽灼约60分钟，使供试品完全灰化；10.3.5恒重 按操作方法（13.3.1）自“取出坩锅稍冷片刻”起，依法操作，直至恒重。10.4注意事项炽灼残渣检查同时做几份时，坩锅宜预先编码标记，

25、盖子与坩锅应编码一致。坩锅从高温炉取出的先后次序，在干燥器内的放冷时间，以及称量顺序，均应前后一致；每一干燥器同时放置坩锅最好不超过4个，否则不易恒重。11、重金属11.1仪器与用具：纳氏比色管、过滤器、滤膜、50ml注射器11.2试药和试液11.2.1标准铅溶液 精密称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Pb）11.2.2硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲（pH3.5）与抗坏血酸等均按药典规定

26、。共19页第10页11.2.3稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖约5g，置磁坩埚中，在玻璃棒下断搅拌下，加热至呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于滴瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程11.3操作方法11.3.1取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5ml蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后，加水15ml滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，微热溶解后，移至乙管中，加水稀释成25ml。11.3.2空白对照的制备：取配制供试溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3

27、.5）2ml与水15ml微热溶解后，移至甲管中，加标准铅溶液一定量，加水稀释成25ml。11.4注意事项11.4.1在弱酸条件下测定时，应严格控制溶液的酸碱度，因为pH值3.0-3.5，硫化物沉淀比较完全，酸度太大或太小都使颜色显色浅，从而结果不正确。11.4.2本法以10g -20gPb35ml所产生的浑浊度为最佳目视比色范围。11.4.3在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺试液作为显色剂，如用硫化钠试液，容易分解析出硫，引起浑浊而影响比色。在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂。11.4.6供试品在未加硫乙酰胺以前带色，可用稀焦糖液，将标准溶液调整，使两者颜色一致，而后加硫代乙酰胺；若滴加

28、稀焦糖溶液，仍不能使颜色一致时，可加其他对测无干扰的试液，如加常用的指示液调色。如按上述方法仍不能使供试品管与标准管颜色一致时，可取该药品上规定的二倍量的供试品试液，加水溶解后，分成两等分，在一分中加硫代乙酰胺试液，用滤膜（孔径3m）滤除金属硫化物沉淀后，加入规定量的标准铅溶液作为对照溶液，再与另一分供试溶液按药典规定方法处理比较。或者将供试品作有机破坏，除去颜色，再作重金属检查。11.4.7微量高铁离子的存在，能在弱酸溶液中氧化硫化氢溶液而析出硫，产生浑浊而影响重金属的比色，因此必须除去；药典中利用加入抗坏血酸或盐酸羟胺使微量高铁还原成亚铁离子，因亚铁不干扰检查。11.4.9药品本身生成不溶

29、性硫化物，影响重金属的检查，可加入掩蔽剂以避免干扰。如检查硫酸锌或葡萄糖酸锑钠中的重金属，在碱性溶液中加入氰化钾或在中性溶液中加入酒石酸，使与锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依次检查铅盐。共19页第11页11.4.10含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，经滤纸过滤时，因滤纸能吸附Pb2+而造成Pb2+的大量损失，故一般不应经过滤。必要时可加对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程11.4.11具有芳环或杂环的有机药物，如需先行炽灼破坏，右按中国药典（1995年版二部附录制（H）操作，使与有机物分子结合的重金属游离，但应注意炽灼的

30、温度不能高于600，以免重金属损失，温度适宜。11.4.12为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1ml（或与盐酸1ml相当的稀盐酸）使用氨试液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试药在坩埚或瓷皿中蒸干后，依法检查。11.4.13为使有机物分解破坏完全，炽灼残渣需加硝酸加热处理，故必须蒸干除去氧化氮，否则，亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色检查。蒸干后残渣加盐酸处理，使重金属盐成为盐酸盐，置水浴上蒸干，赶除残留盐酸，再加蒸馏水溶解，以氨试液调至对酚酞指示液显中性，依法检查，使供试品液的pH值仍为

31、3.5左右。11.4.14标准铅液应在临用前，精密量取铅贮备液新鲜配制，使用不得超过一周，以防止铅的水解而造成误差，否则贮存时间过久，显色不得超过一周，以防止铅的水解而造成误差，否则贮存时间过久，显色愈浅。但硝酸铅贮备液（内含适量硝酸，可防止水解），则可放置较长时间，并需注意制标准铅液用的玻璃仪器，均不得有铅的杂质。11.4.15硫化钠试液稳定性与硫化钠的纯度的很大关系，采用分析纯硫化钠配制，贮存色瓶中可保持12个月。11.4.16硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，可与重金属离子生成有色硫化物的均匀混悬液。PH3.5 11.5记录与计算11.5.1计算标准铅溶液度计算207.2

32、5;0.1598×1000 331.2×10001mol的硝酸铅Pb（No3）2的质量为331.2g，含铅（Pb）207.2g；称取硝酸铅0.1598g配成1000ml贮备液，含Pb量为： 0.1mg/ml贮备液依法稀释十倍后所得标准铅溶液的浓度为每1ml含10µg的Pb。共19页第12页11.5.1.2重金属限量计算 吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程标准铅溶液体积（ml）×标准铅溶液浓度（g/ml）供试品理（g）重金属限量 ×100 11.5.1.3标准铅溶液取样量计算 根据取供试品量及限量计算，如取供试品2.0g，依法检查，规定

33、含重金属不得过百万分之五，应取标准铅溶液（10gPBml）多少毫升？重金属限量×供试品重（g）标准铅溶液浓度(g/ml)（/V 11.6结果判定11.6.1甲管与乙管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。12、含量12.1仪器与用具12.1.1 操作室光线明亮，操作室应分为两面三刀部分，彼此分开；一部分为一般操作间，一部分为半无菌操作间半无菌操作间，设有紫外线灯达到空气消毒。应装有空调设备，控制室温在。操作台可用稳固的水泥台，台而用玻璃板垫平，用水平仪校准，保持水平。室内注意抗生素的污染。12.1.2 双碟 为硬质玻璃或塑料培养平皿，内径约90mm,高1617mm,碟底厚薄均匀水

34、平，无气泡。碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸，碟内加水23ml,再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置玻璃仪器专用洗液或其它清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，置150160干热灭菌2小时或高压121蒸汽灭菌30分钟，备用。12.1.3陶瓦盖 内径约103mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期干燥、清洗。12.1.4钢管 内径（6.1±0.1）mm外径（8.0±0.1）或（7.8±0.1）mm,每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端面光洁平坦，管壁厚薄一致。每次使用后应置11000新洁尔灭溶液内

35、，浸泡2小时以上，进行灭菌后再行洗涤，先用水洗涤，超声波超声30分钟或用沾有去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗，淋干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的容器内，在150160干热灭菌2小时备用。共19页第13页12.1.5钢管放置器 置于半无菌操作间内，有6孔和4孔两种，钢管下落时应垂直平稳、位置正确，双碟升降平稳。应保持清洁，防止抗生素污染。可定期用75乙醇棉擦拭，并用乙醇棉火焰烧小孔。置钢管的玻璃管定期干烤灭菌。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程恒温培养箱 隔水式，3537及2426，隔板上可备有带孔的玻璃板并垫平。灭菌刻度吸管 吸取菌液及培养基用。试验用后应立即置5石炭酸或1：100

36、0新洁尔灭溶液中消毒后再按玻璃容器常规洗涤。吸口处塞入脱脂棉（应松动，透气），置适宜容器中，120以上干革命热灭菌2小时或121蒸气灭菌30分钟，烘干备用。12.1.6玻璃容器 包括滴定管、移液管、刻度尺、容量瓶等，按“下班器皿检定规程”进行标定，要符合一等品规定，每次应用前用洁液浸泡，水冲洗、蒸馏水冲洗3次，淋干。12.1.7称量瓶 具塞，重量在10g以下。用毕先用水冲洗、淋干，置清洁液浸泡2小时以上，水洗、蒸馏水冲洗3次，置洁净的大平皿中，在120干热3小时，待冷至7060时，取出置于干燥器中备用 。12.1.8毛细滴管 用玻璃管拉制，管口光滑。应用清洁液浸泡、水冲洗、蒸馏水冲洗3次，置适

37、宜容器中，在120干燥3小时后备用 。12.1.9 天平 分析天平，感量0.1mg.12.2.0 抑菌圈直径（面积）测量仪12.2.1 可用ZX-300A型或CHB型抑菌圈面积测量仪及适当的测试仪。仪器必须按抑菌圈测量仪检验规程检验，符合规定者方能应用。12.2.2游标卡尺 精度0.05mm,长度125mm。12.2.3超净工作室用于菌种的接种或传代.超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。12.2.4试液 磷酸盐缓冲液(PH7.8),取磷酸氢二钾5.59g与磷酸氢二钾0.41g,加水使成1000ml,滤过。12.2.5培养基号培养基。12.2.6试验用菌种短小芽胞杆菌，为冷冻干燥菌种。12.2

38、.7菌种的复苏与保存 在无菌室或超净工作台内进行。12.2.8 菌种的复苏12.2.9 把冻干菌种管、灭菌1ml毛细滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或超净工作台。12.3.0将冻干菌种管外壁用碘洒擦洗消毒、稍干，用75乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌毛细滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。共19页第14页12.3.1取灭菌镊子,大火焰旁,将炸裂的管口打开,放入灭菌双碟内,另取一支毛细滴管,在火焰旁吸取营养肉汤少许,加至菌种管底部,将冻干菌块搅动促使溶解,随即吸出管内菌液,分别接种

39、至营养琼脂斜面及普通肉汤内,并将毛细滴管及菌种管投入消毒液内,将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面置3537培养2224小时。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程12.3.2 取出培养物,仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏镜检，呈典型菌落后，转种3代即可应用。如发现菌形不典型，可进行平板分离单菌落。12.3.3 菌种的接种与保存12.3.4准备需用的培养基,培养基应新鲜制备,如斜面已无冷凝水者,不宜再使用.标签上注明菌名及接种日期.自冰箱取出的菌种斜面,应在室温放置约30分钟,待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。12.3.5点燃酒精或其它灯,在左手握住菌种斜面,将管口靠近火焰旁,右

40、手接处棒后端,将接种环烧红30秒钟,随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼,往反通过3次.右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拨开棉塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。12.3.6取出接种棒,在火焰旁将培养基管棉塞堵上,然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。12.3.7将已接种毕的细菌管置3537培养2224

41、小时，霉菌管一般置2425霉菌培养箱内培养7日.取出后放入冰箱保存,一般13个月转种一次。12.3.8菌悬液的制备12.3.9短小芽孢杆菌Bacillus pumilus CMCC(B)63202悬液 取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水12ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁瓶内，均匀摊布，在3537培养7日。取菌苔少许涂片，革兰氏染色镜检，应有芽孢85以上，用灭菌水10ml将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，在7075水浴内加热30分钟将菌体杀死，待冷后放冰箱贮藏为浓菌液。12.4 操作方法12.4.1 称量12.4.1.1 称量前

42、,将标准品从冰箱取出,使与室温平衡;供试品应放于干燥器内至少30分钟方可称取.共19页第15页12.4.1.2 称量 供试品吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程与标准品应用同一天平;吸湿性较强的搞生素,在称量前12小时更换天平内干燥剂.12.4.1.3 标准品与供试品的称量最好一次取样称取,不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内,标准品称量不可少于20mg,取样后立即将称量瓶或适宜的容器及被称物盖好,以免吸水.称样量的计算：WV.CP式中 W为需称取标准品或供试品的重量（mg）;V 为溶解标准品或供试品制成浓溶液时用容量瓶的体积量（ml）；C 为标准品或供试品浓溶液的浓度（uml或&

43、#181;gmg）；P 为标准品的纯度或供试品的估计效价（umg或µgmg）。12.4.1.4稀释 稀释操作应遵照容量分析的操作规程。12.4.1.5 从冰箱中取出的标准品溶液,必须先在室温放置,使其温度达到室温后,方可量取.12.4.1.6标准品与供试品溶液的稀释应采用容量瓶，每步稀释，取样量不得少于2ml为宜，稀释步骤一般不超过3步。举例： 取浓溶液1000uml。第一步 取5ml(1000uml)50ml容量瓶100uml第二步 取5ml(100uml)50ml容量瓶10uml(H) 取5ML(100uml)100ml容量瓶5uml(L)12.4.1.7每次吸取溶液用密刻度玻璃

44、吸管,量取溶液前要用被量液流洗吸管23次,吸取样品溶液后,用滤纸将外壁多余液体擦去,从起始刻度开始放溶液.12.4.1.8稀释标准品与供试品用的缓冲液应一批和同瓶,以免因PH或浓度不同影响测定结果.12.4.1.9 稀释时,每次加液至容量瓶近刻度前,稍放置片刻,待瓶壁的液体完全流下,再准确补加至刻度.12.4.2.0 (2.2)法,标准品与供试品高、低溶液浓度之比为2：1或4：1。（3.3）法，标准品与供试品高、中、低溶液浓度之比这1：0.8.但所选用的浓度必须在剂量反应直线范围内.12.4.2.1双碟的制备 在半无菌室内进行,应注意微生物及抗生素的污染,培养基应在水浴中或微波炉中融化,避免直

45、火加热.12.4.2.2 底层 用灭菌大口吸管(20ml)或其它37灭菌分装器,吸取已融化的培养基20ml注入双碟内,等凝固后更换干燥的陶瓦盖，放于3537培养箱中保温，使易于摊布菌层。共19页第16页12.4.2.3菌层 取出试验用菌悬液,按已试验妥的菌量(2.2)法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在1822mm,(3.3)法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在1518mm,用灭菌吸管吸取菌悬液加入已融化并保温在水浴中(一般细菌4850,芽孢可至60)的培养基,内,摇匀作为菌层用.用灭菌大口10ml吸管或其它分装器,吸取菌层培养基5ml,使均匀摊布在底层培养基上,置水平台上,用陶瓦圆盖覆

46、盖,放置2030分钟,待凝固,备用.吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程12.4.2.4放置钢管 用钢管放置器,将干热灭菌的镊子或适宜方法将钢管装于玻璃管中,放于钢管放置器上,将双磺打开,放入双碟台上,托起双碟台,使钢管平稳落在培养基上,注意使各个钢管下落的高度基本一致.钢管放妥后,应使双碟静置510分钟,使钢管在琼脂内稍下沉稳定后,再开始滴加抗生素溶液.12.4.2.5滴加抗生素溶液12.4.2.6 每批供试品取410个双碟,滴加溶液用毛细滴管或定量加样器,在滴加之前须用滴加液洗23次.12.4.2.7 滴加标准品与供试品溶液,因实验设计方法不同而异.(2.2)法,在双碟的4个钢管中

47、分别成对角滴加标准(S)及供试品(T)高(H)低(L)两种浓度的溶液.(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及供试品高、中（）低种浓度溶液，并使相同浓度成对角。滴加溶液的顺序：（2.2）法SHTHSLTL;(3.3)法SHTHSMTMSLTL.滴加溶液至钢管口平满,注意滴加溶液间隔不可过长,因溶液的扩散时间不同影响测定结果.12.4.2.8每份滴加的溶液为1单位,但双碟数每次不起过5个,如1份溶液滴加双碟数目多,可分次滴加.每种溶液各用1支毛细滴管.12.4.2.9 滴加完毕,用陶瓦盖覆盖双碟,平稳于双碟托盘内,双碟叠放不要超过3个,避免受热不均,影响抑菌圈大小,以水平位置平稳移

48、入培养箱中间位置,3537或3032培养至所需时间.12.4.3.0抑菌圈测量12.4.3.1 将培养妥的双碟取出,打开陶瓦盖,将钢管倒入盛有1:1000新洁尔灭溶液或其它消毒液内,换以玻璃盖,按样品号排妥;测量抑菌圈前应检查抑菌圈是否圆整,如有破圈或圈不圆整应将该碟弃之,切记主观挑选抑菌圈及双碟,使结果造成偏倚.12.4.3.2 测量抑菌圈可用抑菌圈自动测量分析系统,也可用游标卡尺;使用游标卡尺测量时,眼睛视线应与读数刻度垂直,用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量.12.4.3.3记录与计算 两剂量法计算公式共19页第17页P-1T2+T1-S2-S1T2+S2-T1-S1

49、15;I×100吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程式中 P为供试品效价（相当于标示量或估计效价的百分数）；S2为标准品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和；S1为标准品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和；T2为供试品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和；T1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和；I为高、低剂量之比的对数值，2：1进，I=0.301。4:1时,I=0.602。12.4.3.4结果判断12.4.3.5 可靠性测验 该法的设计是根据量反应平行线原理,在实验所用的剂量范围内,以数剂量和反应呈直线关系,供试品和标准品的直线应平行.当用卡尺没量后的结果

50、,将参数输入电脑,有专用(2.2)法和(3.3)法的软件程序进行统计学处理.用测量仪测量抑菌圈时,测量与统计学处理一次完成,统计学分析按药典生物检定统计规定进行F的显著性测验.(2.2)法要求直线回归、剂间P0.01,偏离平行P0.05;(3.3)法除(2.2)法的规定外,尚考查二次曲线和反二次风线P0.05,试验结果认为可靠,方可进行诳价和可信限率计算.12.4.3.6可信限率 考核实验的精密度，除药典各论另有规定外，本法的可信限率不得超过5。上述各项规定都能符合者，试验结果成立。12.4.3.7 实验计算所得效价低于估计效价的90或高于估计效价的110,则检验结果公作为初试,应调整供试品估

51、计效价,予以生试.12.4.3.8 原料药效价测定一般而双份样品,平行实验以便核对.对不符合规定的样品应至少有2次符合规定的结果,才能发出报告.12.4.3.9效价结果的数字按药学规定取舍小数位.12.4.4.0供试品测定操作要点12.4.4.1原料药品 是指大包装或半成品干燥粉末或结晶性粉末,不含辅料,一般测定纯度(umg或µgmg),根据抗生素品种及厂方提供的效价进行估计单位,称取样品,估计效价尽量接近真实效价,如估计效价与真实效价距离较远时,可先作初测试验,然后按初测结果来估计效价,再作精密测定.原料药品一般皆以干燥品或无水物计算效价，先测其含水的供试品效价，再根据供试品的水分

52、或干燥失重的结果折算成干燥品或无水物的效价。干燥品效价（umg）=湿品效价（umg）I供试品干燥失重量13、薄膜过滤法：共19页第18页13.1本法适用于有抗菌作用或大容量的供试品。13.2按集菌使用规程安装好集菌仪。吉林玉皇药业有限公司硫酸奈替米星检验操作规程13.3取供试品擦拭消毒后，除去塑料盖，插好倒灌，进行抽滤，滤液从排液管排出。13.4同法操作将培养基抽到全封闭式集菌培养器中。13.5取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的镕基作阴性对照。13.6阳性对照管应根据供试品特性在接种橱内加入相应对照菌液1ml。（抗细菌药物以金黄色葡萄球菌为对照菌，抗厌氧菌药物以生孢梭

53、菌为对照菌，抗真菌药物以白色念珠菌为对照菌）。13.7需气菌、厌气菌培养基管置3050培养箱中，真菌培养基管置2025培养箱中各培养7日；阳性对照管细菌应在培养2448小时，真菌应在培养2472小时有菌生长。13.8结果判定：当阳性管显浑浊并确有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊，但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格。如需气菌、厌气菌及真菌培养管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，应重新2倍量取样，分别依法复试，除阳性对照管外，其它各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。共19页第19页题目： 注 射 用 硫酸奈替米星检验

54、操作规程编 码ZL2137-1页 码共 20 页版 本复印份数：起草人：苟希侠审核人：批准人：颁发部门：质量管理部分发部门：办公室执行日期：变更记录：2005年5月5日修订号 ：ZL2137-1批准人 执行日期变更原因及目的：质量标准升级·目的 指导注射用硫酸奈替米星原料的检验，为硫酸奈替米星成品的检验提供书面依据。·范围 硫酸奈替米星成品。·责任 中心检验室、检验员。·内容1、性状1.1.1取本品少量放在白纸板上目视观察为白色粉末或疏松块状物。2、鉴别 2.1.1鉴别用仪器：薄层色谱硅胶G薄层板、层析缸。2.1.2鉴别用试液：二氯甲烷、甲醇、浓氨溶液；0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液：取0.2g茚三酮加水饱和的正丁醇溶液（向正丁醇中国入水充分混匀即可）。 2.1.3 供试品溶液的制备：取本品适量制成3mg/ml的溶液即可。2.1.4 标准