邻苯二甲酸二异辛酯对雄性小鼠主要脏器及生殖功能的影响

1、大学生科技园地邻苯二甲酸二异辛能对雄性小鼠主要脏器及生殖功能的影响于乐云'，王腺夏2,秦栋媛二郭 义七徐 扬，丰慈根二井长勤二美建义'(l新乡医学院根底医学院2005级.河南 新乡453003: 2新乡医学院三全学院2005级.河南 新乡453003： a新 多医学院生命科学技术系2005级，河南 新乡453003;4.新乡医学院生命科学技术系教研室，河南 新多453003)摘要：目的 观察邻呆二印酸二异辛能(dehp)对堆性小鼠土要脏器及生殖功能的影响.方法 将56朋雄性 小依24只随机分为4组.每级6只.对照组不做任何处理.低剂量坦皮卜注射dehp 100 mg 板'

2、;.中剂量组皮f注射 dehp300mg-kg 剂ht组皮下注射dehp500mg kg 每日1次，连续20 d,停止给药3 d后全部顼推脱臼处死。 测定小瓦体质量、主要朋管重量、柚子活动率、粒子存活率及甜子畸形率。结果 低剂量组,中剂量狙小ix肝脏系数勺 对照组比拟差异显著(p<0 05),高剂吊组小鼠肝脏系数与对照组比拟差异极显著(/><0 01):低剂瞄、中剂址组、 高剂此组的精子活动率和存活率随剂威的增加仃明显卜降趋势.低剂此组、中剂柄组、高剂量组蹬形数目随剂量的增 加逐渐增多。结论 dehp能明显引起小威肝脏及生用功能受损，关键诃:尊苯二甲酸二异辛能:雄性小鼠:脏器

3、:生殖功能中图分类；: r965文献标识码：a文章编1004-7239(20xx)05-0505-03efrect of cir( 2-etliylhexyl) phthautc on ma h organ and reproductive hinctihi or male m reyu lc-jun1 .wangmeng-xia2 .q in l i-yuan2. et al(i. gmdc 2005. colley of basicm alii me xiktw/ix rjirn/ college, x inxujng 453003. china: 2 gnule 2005, sanqua

4、n colley xmxiang college. xinxiting 453003. china)abstract: o hjeetke 1b in*estiga(e the effect of di-(2-eihylbexyl) phthalale (dehp) on main organ and 呷mduciive liinctbn of male mice m cthods iwcnty-four male mice were ninckinly divided inm 4 gmup s. 6 mice for each giwup. contrcil gioup do nothing

5、 lov dosage group.iniddle dose gmup and high dose gmup werv injected dehp loomg kg 1,300 mg kg 1 and 500 mg kg 1 with hjpodem ic. rcjpcctiwly once mx> day for 20 days on the thinl day after stopping giving medicine, killed (he m ice wi(h ceivical disbcalbn hie weight of m ice and main oim, (he iv

6、aclivit)1 and survival ni(to of jpesiudma. die rale of tcraldjpciii ia were detected results ccmpared with contwl gioup. (here was difference of liver cocfficient in bw dose gk>up and iniddle do* gioup< p <q 05). and (here was significantly ditlerence in high dose gwup (p <0 01). the rea

7、ctivity and sur vival mtb of *pcmiar»a decreased obvbusfy when the d(isc of di-(2-cthylkxyl) phthahic increased the nun her of tcran?pcr m ia was higher when (he dose of dr(2-e(hylbcxyl) phthalate incmiwd conclusion dh1p can aiuse lhe danage of ral's livvr and rcpkxiuciivv funcibnkev words:

8、 dr(2wcthylhcxyl) phthahtc: male m ice: organ; irpductivc functbn近儿年，发现人群中精子数普遍降低，科学家们 疑心与环境中某些干扰物可能有关,提出了叫:境 内分泌干扰物的概念对于这方面的研究有 壬基附如邻苯二甲酸二辛骼和邻苯二甲酸二丁 函及氯乙烯等。邻苯.甲酸:异辛酯di(2- ethyhhexyl)phthalate,dehp倔邻苯二甲酸酯类 是一种无色黏性液体微有气味.常用做气相色诰固 定液、不饱和化合物及含氧化合物的增型剂。邻苯 二甲酸酯类对动物造成的影响目前研究多通过灌胃枚 khjw：20d8-05- 14基金项h ：荷乡

9、医学院大学牛.科研立项资助课题<2006>作者简介:于乐云(1986.)女舸南伊川人，新乡医学浣基it医学院 本科2003竣指导老师洋惫根1963 "男.河向海乡人.教授.硕土生导师.研 究方向：而理遗传学. 方式进行染毒，由丁日常生活中人类大多通过皮肤 接触本类药品.因此木实验采用皮下注射染毒方式 研究dehp对小副主要脏器、生死系统的发育和粘 子活动率、存活率、畸变率的影响。以验证人们日常 使用的含有dehp的化装品、塑料用品等是否对人 类的不孕不育有影响，同时也为今后这方面的研究 和生活川品的制备提供一些可以参考的数据。1材料与方法l 1实验动物 锥性他康昆明种小鼠

10、24只，56 周龄.体质量(2& 0 ±2 0)go由新乡医学院实验动 物中心提供。l 2实验试剂与仪器 dehp,纯度99%.上海化 学试剂公司生产；dkp81型水浴箱 庆津市泰斯特仪器）.1dl80-2b型离心机（i：海安亭科 学仪器厂）yst00型显微镜（chinirn ikon）。l 3实驶方法l a 1动物处理 随机将24只小觎分为4组.每 组6只，对照组不做任何处理，低剂筮组皮卜注射 dehp 100 mg kg ',中剂量组皮下注射dehp 300mg-kg 高剂域组皮下注射dehp 500 mg kg'1，除对照组外，其他各组小鼠皮卜注射 备剂

11、量组药物溶液或者稀释溶剂，2日1次，连续 20 d.并且每天在相同的时间称体质量,在停止染毒 后的第3大将小国全部颈椎脱臼处死。l3 2主要脏器的测定 将处死小鼠的肝脏，肾 脏、脾脏、翠丸、附睾立即取出，称湿重并计算脏器系 数（m器系数=脏器湿重砌物体质胃）.l33精子悬液的制备 将称完湿重的右侧附睾 立即放入盛有5 ml 37 p生理盐水的平皿中，用眼 科财纵向苗开79个切li,让精了自由游出，放入 37 w温水浴箱中30 min.川1层擦镜纸过滤除去 附睾组织制得结子悬液。l a4精了活动率 将制备好的精子悬液取i2 滴滴于清洁的载玻片上.在（20五）笆的室温下 用普通光学显微镜，在10

12、x10倍镜下肉眼观察每只 鼠500个精子的活动力，在10min内完成，精子活 动状态按精子游泳状态分为4级'乃，【级：运动活 泼.宜线游动：i级:运动欠活泼，直线运动：m :原地 旋转；1也加忌无活动力。精子活动率（%）=（殷+1【 级+11级）梢子数目/（跋+ ii级*1呦+iw）精 了数 li xi00% °l a5精子存活率的计算精子存活率的计算参 照文献戚。吸取0 5ml粘子悬液放入干净试管中. 再加质量分数q 4%台盼蓝染液（1 5 ml用吸管轻轻 吹打混匀，染色2 min,然后制片，显微镜检查，计数, 染为蓝色的为死细胞,透明未染色的是活细胞,随机 计数100个，

13、计叶出死活细胞的比例，重复计数1次, 以2次观察结果的平均值作为活细胞的百分比值。l a6藉子形态学观察精子形态学观察方法参 照文献|9°将称完质量的左侧附睾立巴放入盛有（n =6, x ±05 ml 37姓理盐水的平皿中用眼科剪剪碎放入 37c水浴箱中温育20 min,使其充分游离，然后将 精子悬液通过4层擦镜纸过滤，除去组织块，将滤液 以1 000 rmin '离心5 min后.弃去上清液后与沉 淀混匀，滴片（每只小制制片2张）待玻片自然f燥 后,用体积分数35%的甲醇固定5 min.再用体积分 数2%伊红染色1 h,自来水冲去玻片上多余的染 液，晾干后高倍镜卜

14、观察，每片检查精了 200个o 1.4统计学处理实验数据以均数切；准任切 表示.组间比拟用方差分析.粘了畸形率的比拟采用 x检验。2结果2 1 dehp对小刷精了活动率和存活率的影响 低剂量组、中剂量组、高剂量组的精活动率和精子 存活率与对照组相比均有明显差异（p <0.（）1）,且 精子的活动率和存活率随剂的增加有明显下降趋 势,见表l表i各组小鼠精子活动率和精子存活率的比拟（n=6,7 k%）tah i comparison of reacth ity and survival rath of sp«r- matoz<ki of mtsamong each group

15、s ( n =6, x ±x. %>tlvm精子活动座.精子存活率对照组82 97 ±1. 386 39 ±1 32低剂m组4a 648552 17 ±15. 2妒中剂仙组32 24 ±j. 6146 36 ±1& 78*命补捋iix 54 y 6r1抵 79 +12 70*与 wstai 比坦别owttffft琢丸附攀对照组中剂量组q 044 53001 73q 060 84 10 009 57*q 056 24 也 007 55"q 072 32 坝 020 29bq 003 w 也 001 73q 006

16、 21 也 003 73(i 009 27 dfl 004 61(i 010 99 坦 009 38q 018 48 do 001 99q <)17 21 do 001 59a 017 13 ±1 001 63a <)19 71 也(mil 41q 007 71 4ft (x)l 55q 007 01 4ft (m)l 09(1 006 16 4£l (x)l 790 006 79 坦 <x)i isq 018 ii ifl 000 59q 002 25 4ft <xx> 29(1 002 23 ifl <xx> 61(1 (km)

17、 s9 廿i <xx» 27表2备狙雄性小鼠脏器系数的变化tah 2 comparison of male rats oran coefficient among each group ( n =6, x ±5)2 2 dehp对小鼠主要脱器的影响 低剂量组、中 剂量组小敝肝脏系数与对照组比拟差异显著（p < 。05）,高剂届组小鼠肝脏系数与对照组比拟差异 极显著（p<q 01）o低剂量组、中剂量组、高剂量组 小散的脾脏系数和肾脏系数与对照组比拟差异无统 计学意义，但随着剂量的增加有升高趋向低剂房 组、中剂量组、高剂最组小鼠的睾丸脏器系数和附睾 的脏器系数

18、与对照组比拟均无统计学意义，但附睾 脏器系数随剂量的升高逐渐降低。见表2.与对顾比拟” v。05?p<q 012 3 dehp对小鼠精子畸形率的影响 低剂量组 0.（）5）。中剂量组畸形率和对照组比拟差异显著 畸形率和对照组比拟差异无统计学意义（p >（pv0.05）,高剂挝组畸形率和对照组比拟差异极显著(p<q 01).精畸形的构成比中尼折花所占形数目随剂量的增加逐渐增多。具体畸形构成比及比例最大，低剂会组6& 42%,中剂量组71.50%,高数据见表3。剂量组61. 31%。低剂量组、中剂量组、高剂量组畸表3小肽粘子畸形率和各类魅子畸形构成比(n=6)tuh 3

19、the mte of lenttopenn ii unci the constituent netb of every khd of (cmtopenn ii of rats ( n =6)受检轴了数(个)杨子畸形数 f个)时形率舂便形4类料f瞪形的构诙比)(%)无钩胖无定形足折泠无头m对照坦2 400316ia 76a 68s 15& 091. 4772 80& 09q 74低2 40047619 38q 94a 224. 68s 266& 42& 48q 00中剂量坦2 4()056725 651r 001. 75a 506 2571. 50& 50

20、q 502 4007343(1 ssb11. 435 454. 096 8161. 311q 63q 28与对照fh比拟jr<a 05.bp<a oi3讨论dehp是邻苯二甲酸酯类中的一种,部苯二甲 酸惜类普遍用做驱虫剂和杀虫剂的载体和化装品， 涂料,农药的溶剂.dehp用量较大占邻苯：甲酸酣 类用虽的25%,本实验通过观察dehp对雄性小鼠 主要脏器重破的影响及生殖功能的影响o dehptij 以使小版肝脏重量变大在较低剂量即可引起肝脏 重量变大，由于肝脏是动物的主要解毒器官，因此 dehptij能有毒性可以使肝细胞内水分增多，肝细 胞变性坏死顷。dehp不能引起成年小敝翠丸和

21、附睾重量明显变化，但随假设剂筌的加大有明显降低 的趋势。有研究报道dehp能诱导未成年大鼠的睾 丸毒性处于发育期的雄性大版明显高于成年维性 大鼠”，诃能是由于dehp会影响生殖系统的发 育。由于本次实验采用的是成年小鼠,因此对于未 成年小m的发育毒性还有待后期实验进一步研究。 dehpt以降低精了的活动率和存活率，由于其内 分泌干扰作用山，可降低睾丸内睾耐水平，从而干 扰了下丘脑垂休性腺轴进而影响精子正常 存活所需的的类导致精了的活动率和存活率降 低。dehp高于100mgl '可能导致所有组织器 官形态发育异常叫.dehp具有抗雄激素作用,，!, 可以诱导精了发生突变，增高精子畸形率

22、。经皮f 注射吸收后的代谢产物目前不是十分清是，因此其 干扰粘子的机制还有待进一步研究o本实验显示大剂虽dehp能明显影响小鼠生k 发育，较小剂反即可导致生毗功能的下降，提示人们 在日常生活中尽量少使用含dehp的塑料用品及化 妆品，同时为提高生育质量和降低出生缺陷提供理 论依据。参考文献：(1)邓茂先.陈祥贵.环境内分泌扰物研斌展ul田外医学： 卫生学分删、2000.27，6邱&21 guud in r.murzin p、roberta.b h i：4i i mon ioring of occu*patbnal exposure r» di( 2-e(hylhcxyl> phthalate sun” of wotkers oposed t> phsliiols( j ). inta n-h ocatp environ health, 2007. 81 (8):959-96613)马金祥任洋善点向山.等.壬基酚对小米叶耻壮微站构的影 响【j .新多医学院学报.2006.23(3).229-23q14 i闹云国.瑞军秀.徐田蜂碍.