化学原料药质量研究及原始记录常见问题讨论余立

1、特性研究特性研究-理化、稳定性理化、稳定性对照品研究对照品研究- -标化、校正因子标化、校正因子方法研究方法研究- -建立、验证建立、验证原料药研究的特点原料药研究的特点 杂质研究杂质研究- -工艺、残留溶剂工艺、残留溶剂1432建立标准时要考虑的问题建立标准时要考虑的问题200820072006 200520042003 200220012000 常见研究误区以及供参常见研究误区以及供参考的经验和体会考的经验和体会 新版药典动态对化学原新版药典动态对化学原料药质量研究的影响料药质量研究的影响 研发原始记录中常见问研发原始记录中常见问题及改进建议题及改进建议 主要讨论内容主要讨论内容click

2、 to edit title style杂质控制杂质控制微粒控制微粒控制安全性安全性控制控制注射剂所用的原辅料应从注射剂所用的原辅料应从来源及来源及工艺等工艺等生产环节进行严格控制并生产环节进行严格控制并应符合注射用的质量要求。应符合注射用的质量要求。标准标准增项增项杂质谱的比较杂质谱的比较供注射用原料质控变化重点提示供注射用原料质控变化重点提示杂质控制力度大幅度提高杂质控制力度大幅度提高 未修订品种未修订品种有关物质有关物质（常规）（常规）增项增项增指标增指标严限度严限度改方法改方法tlchplc等度等度 梯度梯度理论板数理论板数 分离度分离度特定杂质特定杂质增订单列项增订单列项盐酸阿糖胞苷

3、盐酸阿糖胞苷项目项目20052005年版年版20102010年版年版含量限度含量限度97.097.0103.0103.0鉴别鉴别3 3项项检查检查干燥失重干燥失重-含量测定含量测定uvuv吸收系数法吸收系数法* 性状项下还有熔点和比旋度项性状项下还有熔点和比旋度项，第一次飞跃第一次飞跃第二次飞跃第二次飞跃纯度控制纯度控制杂质控制杂质控制杂质谱杂质谱控制控制有关物质有关物质的的研究研究 杂质质控理念的变迁杂质质控理念的变迁杂质谱的定义杂质谱的定义 impurity profile （杂质谱杂质谱）: a description of the identified and unidentified

4、 impurities present in a drug substance. 对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。的总的描述。 company logo名词解释已鉴定杂质已鉴定杂质identified impurity特定杂质特定杂质specified impurity潜在杂质潜在杂质potentialimpurity杂质谱杂质谱impurity profile已确证了已确证了结构特征结构特征的杂质的杂质在质量标准在质量标准中规定检查中规定检查并有自己限并有自己限度标准的杂度标准的杂质。已鉴定质。已鉴定或未鉴定或未鉴定按照理论推按照理论推测在

5、生产或测在生产或贮藏过程中贮藏过程中可能产生的可能产生的杂质，实际杂质，实际产品中不一产品中不一定存在定存在存在于药存在于药品中的杂品中的杂质组成或质组成或模式模式click to edit title style选择最优选择最优多种互补多种互补结构确证结构确证比较杂质的比较杂质的数数与与量量，一致或基本一致，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果的安全有效性结果杂质谱杂质谱比较比较杂质谱的比较杂质谱的比较新方法新方法分析方法的有效性（氨苄西林钠分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）舒巴坦钠）原方法原方法在对各国药典方法比较的基础

6、上确定分析方法项目项目原研厂标准原研厂标准拟定标准拟定标准ep7.0ep7.0usp34usp34jp15jp15含量限度按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg的效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150i.u.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120i.u.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180usp 肝素单位每1mg的效价不得少于110单位。性状白色或类白色的粉末，有引湿性白色或类白色的粉末，极具引湿性白色或几乎白色的粉末，有适度的引湿性白色到灰棕色的粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在

7、乙醚中不溶比旋度不小于+35(40mg/ml,水)应不小于+50(40mg/ml,水)鉴别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐a、具有抗凝血作用b、比旋度c、电泳法：d. 钠盐a、h-nmrb、ic法c、抗xa/抗iia：d、钠盐酸碱度5.07.5（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）5.58.0（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）6.08.0杂质谱的比较多种互补杂质谱的比较多种互补 不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长）不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长） 不同检测器（不同检测器（uv、dad） 不同原理的方法不同原理的方法 -分离或检测分

8、离或检测 杂质谱的比较多种互补杂质谱的比较多种互补 柱串联技术柱串联技术 适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，通过将一根通过将一根scxscx（阳离子交换）短柱与一根（阳离子交换）短柱与一根mg mg c c1818长柱串联长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。就可以简单达到将其分离的目的。 原理：原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于scxscx短柱的离子交换短柱的离子交换作用而被保留在短柱

9、中，而带负电荷的物质（通常为酸性物作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入c18c18长柱中，从长柱中，从而成功分离；然后由于而成功分离；然后由于mgc18mgc18长柱中疏水性基团间的相互作长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可

10、在阳离子交换短柱与短柱与c c1818长柱前接一根长柱前接一根nhnh2 2短柱（它可与阴离子发生交换作短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。物质达到更好的分离效果。 杂质杂质挥发性杂质挥发性杂质有机杂质有机杂质无机杂质无机杂质残留溶剂其它rp-hplc不同检测器不同检测器icp-ms离子色谱离子色谱互补方法互补方法hpcehptlcgc- mshs-gc梯度洗脱梯度洗脱hpgpc颜色控制颜色控制杂质谱分析的基本途经杂质谱分析的基本途经新杂质的研究新杂质的研究 药物杂质的可能来

11、源药物杂质的可能来源1.原料：原料：红霉素红霉素 a、红霉素、红霉素 b、红霉素、红霉素 c、红霉素、红霉素d、红霉素、红霉素 e、红霉素、红霉素 f、阿奇霉素阿奇霉素b、阿奇霉素、阿奇霉素c、阿奇霉素、阿奇霉素e、阿奇霉素、阿奇霉素f2.中间体：中间体：红霉素红霉素a肟（肟（z）、）、6，9-亚胺醚、氮红霉素亚胺醚、氮红霉素a、红霉素、红霉素a肟（肟（e）、红）、红霉素霉素 c肟（肟（e）、）、9，11-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素c 6，9-亚胺醚、红霉素亚胺醚、红霉素a内酰胺内酰胺 3.副产物：副产物：红霉素红霉素-n-氧化物、氧化物、n-去甲基红霉素去甲基红霉素a、n-去甲基阿奇霉素去

12、甲基阿奇霉素a、氨基阿奇霉素氨基阿奇霉素a、n-甲酰基甲酰基-n去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素a、n-去甲基去甲基-n-苯磺酰基阿奇苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素霉素、阿奇霉素n-氧化物、氧化物、3-去（二甲氨基）去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、去氢阿奇霉素、 o-甲苯甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素磺酰基红霉素肟、红霉素z肟重排物、氮红霉素肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、硼酸酯、 n，n-去去二甲基二甲基n-甲酰基阿奇霉素甲酰基阿奇霉素a、丙基阿奇霉素、丙基阿奇霉素、3-n， n-去二甲基氨基去二甲基氨基-酮酮基阿奇霉素基阿奇霉素a、阿奇霉素、阿奇霉素11，12-硼酸酯硼酸酯4.降解产物：

13、降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素去克拉克定糖阿奇霉素a、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水脱水-6，9-半缩酮、红霉素半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮螺缩酮阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：37种种company logo结构确证常用的方法热分析热分析粉末衍射粉末衍射核磁核磁元素分析元素分析质谱质谱紫外紫外红外红外模拟色谱图色谱图实际色谱图实际色谱图毒性快速评价平台 斑马鱼斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：优点： 杂质用量少杂质用量少 无需知道杂质结构无需知道杂质结构 实验周期短实验周期短（

14、34天一个周期）天一个周期）药物耳毒性检测药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后药后1神经丘消失。神经丘消失。给药后给药后系统对照组系统对照组（正常幼体）（正常幼体）增设有效项目指标加强安全性监控增设有效项目指标加强安全性监控 结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的结合药品的制

15、法和工艺特点，以及杂质的特殊性特殊性设立设立特色有针对性特色有针对性检测项目，最大限度解决安全检测项目，最大限度解决安全隐患。隐患。 人尿制品增加人尿制品增加乙肝表面抗原乙肝表面抗原检查：如检查：如尿激酶、尿尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁促性素、绒促性素、乌司他丁等等 重组品种增加重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性菌体蛋白残留量、外源性dnadna残留残留量量如如重组人生长激素、重组人胰岛素重组人生长激素、重组人胰岛素等。等。 含不饱和脂肪酸的品种增加含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值检查：检查：如如多烯酸乙酯（多烯酸乙酯（p p272272）等。等。增设有效项目指标增设有

16、效项目指标-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 含有含有不饱和脂肪酸不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程的药物在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可进一步生成进一步生成醛类醛类等化合物，而甲氧基苯胺值等化合物，而甲氧基苯胺值（也称（也称p-茴香胺值）就是茴香胺值）就是iso推荐的一种对此推荐的一种对此类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录类降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。值越高，说明其劣变程度越严重。 测定原理：测定原理：甲氧基苯胺甲氧

17、基苯胺与与醛醛反应生成醇胺，反应生成醇胺，醇胺脱水生成的醇胺脱水生成的醛亚胺醛亚胺可采用紫外可采用紫外-可见分光可见分光光度法在光度法在350nm波长处测定。波长处测定。 增设有效项目指标增设有效项目指标-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 注意：注意： 甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应应避免接触皮肤避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗，一旦失误，需用水冲洗1515分钟以上。甲分钟以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用需当天配制使用。以异。以异辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋辛烷作空白做基

18、线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超过了酸溶液的吸光度超过了0.20.2，则需重新配制试剂。，则需重新配制试剂。 供试品溶液中加入供试品溶液中加入0.250.25的的4-4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意应注意避光避光，在，在350nm350nm波长处的吸光度随时间的延长缓慢波长处的吸光度随时间的延长缓慢增加，需准确放置增加，需准确放置1010分钟后测定，尽量减小误差。分钟后测定，尽量减小误差。 本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过致反应不完全，测定值偏低

19、，当样品中水分含量超过0.1%0.1%时，可按时，可按10g10g样品加样品加1 12 g2 g无水硫酸钠无水硫酸钠的比例脱除水的比例脱除水分后测定。另外，应取用分后测定。另外，应取用新开启包装新开启包装的供试品。的供试品。2-2-乙基己酸乙基己酸 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用对生产工艺过程中使用2-2-乙基乙基己酸己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录方法增订为附录20102010年版药典二部（附录年版药典二部（附录 l l）；）； 如如: :头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄头孢地嗪钠、头孢呋辛钠

20、、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠西林钠等。等。2-2-乙基己酸乙基己酸 勘误：勘误： -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用对生产工艺过程中使用2-2-乙基乙基己酸己酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方法增订为附录方法增订为附录20102010年版药典二部（附录年版药典二部（附录 l l）；）； 如如: :头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠西林钠等。等。勘误：勘误： 目前中国不仅接受目前中国不仅接受了了ichich对化学药品中残留溶对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，

21、建立了具剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具有中国特色的残留溶剂检查方法。有中国特色的残留溶剂检查方法。中国药典中国药典20052005版中，对残留溶剂的分类及限度标版中，对残留溶剂的分类及限度标准已经与准已经与ichich的要求完全一致，但仅在附录中作为原的要求完全一致，但仅在附录中作为原则性统一要求。则性统一要求。 中国药典中国药典20102010版中，原料药要求在各论项下根据版中，原料药要求在各论项下根据其生产工艺制定残留溶剂检查方法其生产工艺制定残留溶剂检查方法抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细的残留溶剂检查方法的残留溶剂检

22、查方法p 从附录走向各论从附录走向各论残留溶剂残留溶剂 如：头孢泊肟酯如：头孢泊肟酯 残留溶剂残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录照残留溶剂测定法（附录 p p）测定。）测定。 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 略略 内标溶液的制备内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基

23、亚砜稀释制成每取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml1ml中约含中约含200g200g的溶液，作为内标溶液。的溶液，作为内标溶液。残留溶剂残留溶剂残留溶剂检查方法及验证残留溶剂检查方法及验证 ！ 除正文已明确列有除正文已明确列有“残留溶剂残留溶剂”检查的检查的品种必须依法进行检查外，其他未在品种必须依法进行检查外，其他未在“残留溶剂残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项的品种，如生产与未在正文中列有此项的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录应按附录“残留溶剂测定法残留溶剂测定法”检查并应检查并应符合相应

24、溶剂的规定符合相应溶剂的规定 检测方法进行了相应的调整：检测方法进行了相应的调整： 顶空进样甲烷气体，记录死时间顶空进样甲烷气体，记录死时间(t(t0 0) ) 顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保留时间留时间( ( t tr r ) )相对于参考物质保留时间相对于参考物质保留时间( ( ttr r ) )的相对调整保留的相对调整保留时间时间( relative adjustment retention time( relative adjustment retention time，rartrart) )法替代法替代rr

25、trrt法法 tr为组分的保留时间为组分的保留时间;tr为参比物的保留时间。为参比物的保留时间。 t0为为甲烷甲烷保留时间。保留时间。00ttttrartrr残留溶剂残留溶剂 检测方法选择：检测方法选择： 直接进样？顶空进样？限度比较？对照品法？标准直接进样？顶空进样？限度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？加入法？内标？外标？ 验证项目确定验证项目确定： 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？性试验？ 原始记录较常发现的问题原始记录较常发现的问题 连带问题：连带问题：按无水无溶剂计算按无水无溶剂计算残留溶剂方法建立、验证与常见问题

26、残留溶剂方法建立、验证与常见问题高聚物高聚物凝胶色谱法（凝胶色谱法（20102010年版新增的年版新增的1919个标准）个标准）原料原料 制剂制剂 头孢唑肟钠头孢唑肟钠 注射用头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠 头孢替唑钠头孢替唑钠 注射用头孢替唑钠注射用头孢替唑钠 头孢尼西钠头孢尼西钠注射用头孢尼西钠注射用头孢尼西钠 头孢噻吩钠头孢噻吩钠 注射用头孢噻吩钠注射用头孢噻吩钠 磺苄西林钠磺苄西林钠 注射用磺苄西林钠注射用磺苄西林钠 阿洛西林钠阿洛西林钠 注射用阿洛西林钠注射用阿洛西林钠 美洛西林钠美洛西林钠 注射用美洛西林钠注射用美洛西林钠 氯唑西林钠氯唑西林钠 注射用氯唑西林钠注射用氯唑西林钠 苯唑西

27、林钠苯唑西林钠 注射用苯唑西林钠注射用苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 高聚物高聚物2010版：品种增加版：品种增加,方法多元化方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶g-10（sephadex g 10）；短柱子的使用，减少分离时间）；短柱子的使用，减少分离时间 2、 商品凝胶柱商品凝胶柱tsk-gel g2000swxl ：头孢地嗪（北京所）：头孢地嗪（北京所） 3、ods柱，聚合物柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所) 4、柱切换、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱的（中检所），实现凝胶色谱与

28、反相色谱的统一统一高聚物高聚物盐酸头孢替安聚合物分析方法的比盐酸头孢替安聚合物分析方法的比较较sephadex g-10系统系统tsk-gel g2000swxl系统系统 0.8ml/min供注射用原料可见异物检查供注射用原料可见异物检查 头孢他啶：头孢他啶： 取本品取本品5 5份，每份份，每份3.0g3.0g，加，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤膜滤过）滤过）溶解，依法检查（附录溶解，依法检查（附录 h h），应符合规定。），应符合规定。 头孢地嗪钠：头孢地嗪钠： 取本品取本品5 5份，每份份，每份2.02.0g g，分别加，分别加微粒检查用水微粒检查用水溶解

29、，依法溶解，依法检查（附录检查（附录 h h），应符合规定。），应符合规定。有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反有些品种如碱性药物与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑应，产生白点、白块和玻璃屑有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不溶物生不溶物有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生有些品种如喹诺酮类药物对金属设备产生腐蚀，易有金属屑腐蚀，易有金属屑有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易有些品种如胰岛素等提取的生化大分子易产生蛋白沉淀产生蛋白沉淀有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块解度太低，产生白

30、点、白块引发不合格的部分原因引发不合格的部分原因供注射用原料不溶性微粒检查供注射用原料不溶性微粒检查 头孢他啶：头孢他啶： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤过）溶解滤膜滤过）溶解制成制成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法检查（附录的溶液，依法检查（附录 c c），每），每1g1g样品中含样品中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上以上的微粒不得过的微粒不得过600600个。个。 头孢曲松钠：头孢曲松钠： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒检查用水微粒检查用水溶解并制

31、成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50mg的的溶液，依法检查（附录溶液，依法检查（附录 c c），每），每1g1g样品中含样品中含10m10m以上以上的微粒不得过的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600个。个。供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求剂能符合注射剂的要求由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶由于光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查液成正比，故标准给出了不溶性微粒检查供试品供试品溶液浓度溶液浓度制剂最多有制剂最

32、多有1111个规格，个规格，均按均按每每1g1g样品中含样品中含1010 m m以以上的微粒不得过上的微粒不得过60006000粒，含粒，含2525 m m以上微粒不得过以上微粒不得过600600粒；粒； 强化不溶性微粒等项目控制强化不溶性微粒等项目控制强化不溶性微粒等项目控制强化不溶性微粒等项目控制供注射用原料不溶性微粒检查供注射用原料不溶性微粒检查可见异物可见异物/ /不溶性微粒检查不溶性微粒检查 原始记录问题原始记录问题 不详细不详细 无趋势无趋势 缺方法摸索及分析缺方法摸索及分析 原始记录建议原始记录建议控制生产环境和过程中的污染控制生产环境和过程中的污染- -外源异物外源异物考察药物

33、与容器的兼容性考察药物与容器的兼容性- -内源异物内源异物考察活性成分的稳定性以及与溶剂考察活性成分的稳定性以及与溶剂/ /添加添加物的稳定性物的稳定性- -内源异物内源异物深刻理解深刻理解“药品的质量源于设计药品的质量源于设计”认真做好认真做好处方研究处方研究/ /工艺验证和稳定性考工艺验证和稳定性考察察！可见异物检查的目的可见异物检查的目的 标准统一、规范、明确、严谨标准统一、规范、明确、严谨典型项目典型项目- -无菌检查方法无菌检查方法无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目之一，无菌检查是药物安全性风险控制的重要项目之一，但具体检查方法以前标准中均不给出，由检验者自但具体检查方法以前标准

34、中均不给出，由检验者自己摸索。抗生素阳性菌选用不注意抗菌谱，存在试己摸索。抗生素阳性菌选用不注意抗菌谱，存在试验的有效性、一次成功率等问题验的有效性、一次成功率等问题对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适对每个品种均要求经过验证，确定样品使用的最适宜宜方法方法（直接接种法？薄膜过滤法），最佳（直接接种法？薄膜过滤法），最佳溶解方溶解方式式、最佳、最佳冲洗液冲洗液、冲洗方式冲洗方式、敏感的、敏感的阳性对照菌阳性对照菌等等操作关键因素，并将上述内容按统一规范格式在质操作关键因素，并将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表述详细。量标准中单独立项表述详细。供注射用原料无菌检查供注射用原料

35、无菌检查供注射用原料无菌检查供注射用原料无菌检查 头孢呋辛钠：头孢呋辛钠： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸钠溶液（经碳酸钠溶液（经0.45m0.45m滤膜滤过）溶解制滤膜滤过）溶解制成成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法检查（附录的溶液，依法检查（附录 c c），每），每1g1g样样品中含品中含10m10m以上的微粒不得过以上的微粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒以上的微粒不得过不得过600600个。个。 头孢曲松钠：头孢曲松钠： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒检查用水微粒检查用水溶解并制成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50

36、mg的溶的溶液，依法检查（附录液，依法检查（附录 c c），每），每1g1g样品中含样品中含10m10m以上的微以上的微粒不得过粒不得过60006000个，含个，含25m25m以上的微粒不得过以上的微粒不得过600600个。个。无菌检查方法规范表述方式举例无菌检查方法规范表述方式举例氧氟沙星氯化钠注射液：氧氟沙星氯化钠注射液： 无菌无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml），每管培），每管培养基中加入养基中加入0.1mol/l硫酸锰溶液硫酸锰溶液1ml，以大肠埃希菌为，以大肠埃希菌为

37、阳性对照菌，依法检查（附录阳性对照菌，依法检查（附录 h），应符合规定。），应符合规定。乙酰谷酰胺注射液：乙酰谷酰胺注射液： 无菌无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，用取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%0.1%无菌蛋无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml100ml），以金黄色），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录 h h），应），应符合规定符合规定。注射剂制剂通则变化重点提示注射剂制剂通则变化重点提示 纯度要高、杂质要少、生物纯度要高、杂质要少、生物负荷要负荷要低低 从源头控制杂质的数和量、染菌的数和量、热从源头

38、控制杂质的数和量、染菌的数和量、热原或细菌内毒素原或细菌内毒素 重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型 注射剂用原料注重数量注射剂用原料注重数量 口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）原料药微生物限度检查原料药微生物限度检查注射剂制剂通则变化重点提示注射剂制剂通则变化重点提示 胰岛素（制剂为注射剂）胰岛素（制剂为注射剂） 取本品取本品0.2g,依法检查（附录依法检查（附录 j），每），每1g中含中含细菌数不得过细菌数不得过300个。个。 胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取）胰酶（制剂为口服制剂，来源于动物提取）

39、取本品取本品,依法检查（附录依法检查（附录 j），每），每1g供试品中细菌数不供试品中细菌数不得过得过10000个，霉菌和酵母菌总数不得过个，霉菌和酵母菌总数不得过100个。并不得个。并不得检出大肠埃希菌；每检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出供试品中不得检出沙门菌。沙门菌。原料药微生物限度检查原料药微生物限度检查注射剂制剂通则变化重点提示注射剂制剂通则变化重点提示 必要时必要时应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、应增设相应的安全性检查，如异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等 因为有些药物成分复杂、组分结构不清晰（如

40、多组分抗生素因为有些药物成分复杂、组分结构不清晰（如多组分抗生素动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂质动物来源提取的生化药等）、采用化学手段难于监控杂质 异常毒性：有可能污染异常毒性：有可能污染生物毒性生物毒性物质的品种物质的品种（发酵）（发酵） 过敏反应：有可能污染过敏反应：有可能污染异源蛋白异源蛋白或未知过敏反应物质的品种或未知过敏反应物质的品种 降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质的品种（腐败）（腐败）供注射用原料安全性检查供注射用原料安全性检查增设有效项目指标加强安全性监控增设有效项目指标加强安全性监控 用化学手段不能控制组成、

41、杂质无法控制的生物用化学手段不能控制组成、杂质无法控制的生物来源品种均增加了来源品种均增加了异常毒性、过敏反应异常毒性、过敏反应等动物试等动物试验：如验：如硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白等等硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白 鱼精蛋白主要存在于鱼类的成熟精巢组织中，与鱼精蛋白主要存在于鱼类的成熟精巢组织中，与dnadna紧密结合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一紧密结合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一种小而简单的球形碱性蛋白质，分子量在种小而简单的球形碱性蛋白质，分子量在1 1万以下，万以下，由由3030个左右的氨基酸组成，其中个左右的氨基酸组成，其中2/ 32/ 3以上是精氨酸，以上是精氨酸，几乎不含

42、芳香族氨基酸。几乎不含芳香族氨基酸。 吸光度吸光度 参照参照bp2008/ep6.0bp2008/ep6.0增订。根据本品组成，增订。根据本品组成，如果纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除的话，在如果纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除的话，在260260 280nm280nm的波长范围内吸光度应很小，但考察结果的波长范围内吸光度应很小，但考察结果远远超过远远超过bp2008/ep6.0bp2008/ep6.0所规定的所规定的0.10.1。 峰峰1. 1. 缩宫素；峰缩宫素；峰2. 2. 三氯叔丁醇，三氯叔丁醇，其余均为杂质峰其余均为杂质峰min051015202530mau 01020304012 4.63

43、2 5.438 6.300 6.820 7.063 7.461 8.621 9.139 9.668 9.998 10.603 10.962 11.855 12.181 12.743 13.577 15.421 19.188 25.374缩宫素注射液缩宫素注射液hplc检查色谱图检查色谱图编号编号单个最大杂质（单个最大杂质（%）总杂质（总杂质（%）18.928.328.333.339.224.748.325.056.727.666.122.175.520.089.431.299.331.0109.431.31117.333.31217.532.61317.632.5148.523.6158.02

44、4.7163.720.4178.429.8188.229.7198.129.7增设有效项目指标加强安全性监控增设有效项目指标加强安全性监控 成分复杂、杂质无法控制但质量与颜色相关度高成分复杂、杂质无法控制但质量与颜色相关度高的品种增加的品种增加溶液的颜色，溶液的颜色，如如糜蛋白酶糜蛋白酶等。等。溶液颜色检查的目的 自身自身性质性质 纯度纯度 杂质杂质含量含量- -简易、直观、快速、综合的对有色杂质进行检查简易、直观、快速、综合的对有色杂质进行检查稳定性差稳定性差质量与颜色联系紧密的质量与颜色联系紧密的安全性要求高安全性要求高用仪器定量测杂质困难用仪器定量测杂质困难检查颜色检查颜色的品种的品种适

45、宜进行溶液的颜色检查的原料建立方法时要考虑的问题建立方法时要考虑的问题溶剂溶剂浓度浓度稳定性稳定性临床安全性需要临床安全性需要工艺生产能力工艺生产能力同类产品水平同类产品水平溶液的溶液的颜色颜色制订限度时要考虑的问题制订限度时要考虑的问题主成分主成分纯度纯度杂质的杂质的含量含量稳定性稳定性数据数据临床安全性需要临床安全性需要工艺生产能力工艺生产能力同类产品水平同类产品水平颜色的颜色的限度限度应用色差计转换进口药注册标准-举例溶液的颜色溶液的颜色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液应无色；如显色，与同体积的比色液（取棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水，混匀）比较（中国药典2010年版二部

46、附录 a第一法），不得更深。色差计法应用举例说明：说明：企业标准按企业标准按epep检查，规定检查，规定“与与b5b5号标准比色液号标准比色液（epep第第5 5版版2.2.22.2.2溶液的颜色）比较不得更深溶液的颜色）比较不得更深”。因。因epep标准比色液从三原色开始就与中国药典不同，如按此标准比色液从三原色开始就与中国药典不同，如按此检查会有困难，故采用色差计进行了对比测定，结果检查会有困难，故采用色差计进行了对比测定，结果epep的的b5b5号标准比色液的色差值（号标准比色液的色差值（e e* *=3.58=3.58）与中国药）与中国药典典br3br3号（号（e e* *=3.19=

47、3.19）和）和br4br4号（号（e e* *=4.46=4.46）的中值）的中值（3.823.82）较为接近，约相当于）较为接近，约相当于br3.5br3.5号。因号。因br3br3号是取号是取棕红色贮备液棕红色贮备液1.5ml1.5ml加加8.5ml8.5ml水，水，br4br4号是取棕红色贮备号是取棕红色贮备液液2.0ml2.0ml加加8.0ml8.0ml水配制而成，所以本次复核将棕红色水配制而成，所以本次复核将棕红色贮备液贮备液1.8ml1.8ml加加8.2ml8.2ml水配制了专用比色液，该比色液水配制了专用比色液，该比色液的的e e* *为为3.643.64，与，与epep b5

48、b5号标准比色液的色差值几乎一号标准比色液的色差值几乎一致，按此转换限度既不改变质控原有水平，又方便在致，按此转换限度既不改变质控原有水平，又方便在国内检验。国内检验。 应用色差计转换进口药注册标准-举例药典采用现代分析技术举例药典采用现代分析技术举例 由于某些药物组成的复杂性，特别是一些生物大分由于某些药物组成的复杂性，特别是一些生物大分子药物，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质子药物，使用传统的分析方法已经不能满足当前的质控需要，控需要，20102010年版药典逐渐改用现代分析技术。年版药典逐渐改用现代分析技术。 首次运用首次运用毛细管电泳法毛细管电泳法 注射用抑肽酶：检查两个特定杂质

49、注射用抑肽酶：检查两个特定杂质 注射用盐酸头孢吡肟：注射用盐酸头孢吡肟： 方法方法1-1-毛细管电泳法毛细管电泳法 n- n-甲基吡咯烷甲基吡咯烷 方法方法2-hplc2-hplc法（羧基柱，电导检测）法（羧基柱，电导检测）毛细管电泳法检查特定杂质毛细管电泳法检查特定杂质抑肽酶由上海药检所起草，参考抑肽酶由上海药检所起草，参考uspusp增订增订去丙氨酸去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶酶和去丙氨酸抑肽酶检查项检查项色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：3030，电极液：磷，电极液：磷酸二氢钾溶液；分离压：酸二氢钾溶液；分离

50、压：12kv12kv；波长：；波长：214nm214nm结果：去丙氨酸抑肽酶结果：去丙氨酸抑肽酶rtrt为为0.990.99，去丙氨酸，去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽酶抑肽酶rtrt为为0.980.98，两相关物间分离度，两相关物间分离度1.401.40，去丙氨酸，去丙氨酸- -抑肽酶与抑肽酶间分抑肽酶与抑肽酶间分离度离度1.241.24、抑肽酶拖尾因子、抑肽酶拖尾因子1.81.8minutes1516171819202122232425au-0.006-0.004-0.0020.0000.0020.0040.0060.00818.35418.55418.792抑肽酶抑肽酶sds-p

51、agesds-page凝胶电泳图凝胶电泳图 本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得的肽酶抑制剂。 采用采用sds-pagesds-page凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结凝胶电泳的方法抑肽酶的有关物质，结果如图所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关果如图所示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和有关物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离物质的分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离药典采用现代分析技术举例药典采用现代分析技术举例 首次运用首次运用柱串联技术柱串联技术- -抑肽酶抑肽酶 参照参照usp32usp32用三根用三根tsktsk柱串联检查高

52、分子蛋白质。采柱串联检查高分子蛋白质。采用分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（用分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（tsk-tsk-g4000swxlg4000swxl柱）柱温柱）柱温3535，流速，流速1.0ml/min,1.0ml/min,二聚体二聚体rt0.9rt0.9，与主峰分离度，与主峰分离度1.41.4，主峰拖尾因子，主峰拖尾因子0.910.91。min01020304050mau 020406080 vwd1 a, wavelength=280 nm (xmm20090304000012.d) 28.522 30.036药典采用现代分析技术举例药典采用现代分析技术举例柱串联技术柱串联

53、技术 适用于适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质，的难分离物质，通过将一根通过将一根scxscx（阳离子交换阳离子交换）短柱与一根）短柱与一根mgmgc c1818长柱串联长柱串联就可以简单达到将其分离的目的。就可以简单达到将其分离的目的。 原理：原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于scxscx短柱的离子交换短柱的离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性物作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（

54、通常为酸性物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入c18c18长柱中，从长柱中，从而成功分离；然后由于而成功分离；然后由于mgcmgc1818长柱中疏水性基团间的相互作长柱中疏水性基团间的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开了 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与短柱与c c1818长柱前接一根长柱前接一根nhnh2

55、2短柱短柱（它可与阴离子发生交换作（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中性物质达到更好的分离效果。物质达到更好的分离效果。 药典采用现代分析技术举例药典采用现代分析技术举例 首次运用首次运用肽图分析技术肽图分析技术： 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内点，使用专一性较强的蛋白水解酶，一般为肽链内切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，切酶，作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，再通过一定的分离检测手段形

56、成特征性指纹图谱，再通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，用此法进行鉴别，专属性强，可鉴别仅相差一个氨用此法进行鉴别，专属性强，可鉴别仅相差一个氨基酸残基的不同种属来源的样品。基酸残基的不同种属来源的样品。 如如胰岛素胰岛素- -采用采用v8v8酶解酶解+hplc+hplc法；法； 重组人生长激素重组人生长激素- -采用胰蛋白酶酶解采用胰蛋白酶酶解+hplc+hplc法获得肽法获得肽图进行鉴别图进行鉴别等。等。胰岛素肽图胰岛素肽图人胰岛素酶解人胰岛素酶解-hplc-hplc肽图肽图猪胰岛素酶解猪胰岛素酶解-hplc-hplc肽图肽图电泳法电泳法- -等电聚焦水平板电泳法等电聚焦水平板电泳法

57、琼脂糖凝琼脂糖凝胶电泳法胶电泳法醋酸纤维素醋酸纤维素薄膜电泳法薄膜电泳法纸电泳纸电泳法法等点聚焦水等点聚焦水平板电泳法平板电泳法聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳法凝胶电泳法sds-聚丙烯酰聚丙烯酰胺凝胶电泳法胺凝胶电泳法典型的等电聚焦图谱典型的等电聚焦图谱重组人生长激素（二部第重组人生长激素（二部第566566页）页）用此法做鉴别用此法做鉴别 纯化水、注射用水和灭菌注射用水的增修纯化水、注射用水和灭菌注射用水的增修订订u纯化水、注射用水的修订纯化水、注射用水的修订增订：增订： 电导率电导率 氯化物氯化物硫酸盐硫酸盐钙盐钙盐二氧化碳二氧化碳 总有机碳测定总有机碳测定 易氧化物易氧化物药典中新检验技术

58、的应用药典中新检验技术的应用药典附录通用检测方法变化提示药典附录通用检测方法变化提示重金属检查法：重金属检查法： 甲管（标准）乙管（供试品）甲管（标准）乙管（供试品） + +丙管（标准丙管（标准+ +供试品）供试品） 如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查 勘误！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色勘误！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。与甲管（供试品）比较，不得更深。 附录通用检测方法中的变化提示附录通用检测方法中的变化提示澄清度检查法：澄清度检查法： 增加增加“几乎澄清几乎澄清”的定义：的定义：0.50.5号号1

59、1号号溶液颜色检查法溶液颜色检查法 恢复恢复“无色或几乎无色无色或几乎无色”的定义的定义 性状颜色描述与颜色检查项匹配：原有些液体制剂品种颜性状颜色描述与颜色检查项匹配：原有些液体制剂品种颜色检查项规定色检查项规定“与黄色与黄色2 2号标准比色液比较，不得更深号标准比色液比较，不得更深”，但性状描述为但性状描述为“无色或几乎无色的澄明液体无色或几乎无色的澄明液体”，与附录定，与附录定义不匹配，现修订为义不匹配，现修订为“无色至微黄色的澄明液体无色至微黄色的澄明液体”。 本版药典中极个别品种仍然存在此问题本版药典中极个别品种仍然存在此问题！尼莫地平注射液！尼莫地平注射液 药典附录变化提示药典附录

60、变化提示 引湿性试验指导原则引湿性试验指导原则重金属检查法：重金属检查法：phph测定法：测定法：不溶性微粒检查法：不溶性微粒检查法：可见异物检查法：可见异物检查法：渗透压摩尔浓度：渗透压摩尔浓度： 20102010年版年版20052005年版年版（1 1）供试品）供试品 符合药品质量标准符合药品质量标准（2 2）称量瓶称量瓶 试验前一天置试验前一天置252511 80802%2%环境中预引湿环境中预引湿（3 3）瓶盖同条件放置）瓶盖同条件放置（1 1）供试品）供试品 干燥失重或水分符干燥失重或水分符 合限度要求合限度要求（2 2）称量瓶称量瓶 没要求预引湿没要求预引湿（3 3）瓶盖）瓶盖 没