低浓度二氧化硫暴露对大鼠气道感觉神经的影响(1)

1、低浓度二氧化硫暴露对大鼠气道感觉神 经的影响 (1) 这篇低浓度二氧化硫暴露对大鼠气道感觉神经的影响 论文是程序自动抓取于互联网上， 查看更多请点击： 论文频 道： lwxz/ 作者：林汉军戚好文 方丽萍 【关键词】 二氧化硫；免疫组化；感觉神经； P 物质 【 Abstract 】 AIM:Tostudythepathologicalchangesofairwayinjuryandt heeffectontheaxonreflexofsensorynervebythesulfurdio xide ( SO2 ) oflowconcentration.METHODS ： SixteenSDma

2、leratsweredividedrandomlyinto2groups: c ontrolgroupandSO2group.Thecontrolgroupwasexposedtop ureair.SO2groupwasexposedtoSO2attheconcentrationofm g/,6hdailyforconsecutive3d.At4thday,wecollectedtheb ronchoalveolarlavagefluid,plasmaandlungtissue.Thenw ecountedthetotalcellnumberinBALF,measuredtheplasmaS

3、Pcontentandperformedtheimmunohistochemicalstainingo nthelungtissue.RESULTS:Comparedwiththecontrolgroup, thetotalcellnumberinBALFandplasmaSPcontentinSO2grou pincreasedsignificantly.HEstainingshowedtherewereag reatdealofinflammatorycellinfiltrationunderthetunic amucosabronchiorum;andSPimmunohistochemi

4、calstaining indicatedtherewasasignificantincreaseinthenumberofS PIRpositivefibersinSO2group.CONCLUTION:Exposuretolo wconcentrationofSO2wouldinjurehealthyratairway,ando neofitsmechanismsisneurogenicinflammationthatcanexa cerbatestheresponseofairwayinflammation. 【 Keywords 】 sulfurdioxide;immunohistoc

5、hemistry;sensoryneuron;su bstanceP 【摘要】目的 : 探讨低浓度 SO2 损伤大鼠气道病理变化 和对感觉神经轴突反射的影响 . 方法 :SD 雄性大鼠 16 只，随 机分为对照组和 S02 组.对照组暴露于正常空气中.S02 组暴 露于 mg/浓度的 SO2室内空气中，每日 6h,连续 3d.第 4 日采 集血清、 收集支气管肺泡灌洗液 , 留取肺组织 . 分别进行 BALF 细胞计数，测血清中 P 物质（SP）的含量，作肺组织病理切 片行 HE 及 SP 免疫组化染色.结果:SO2 组与对照组比较，BALF 中细胞总数明显升高；血清 SP 含量显著增加.肺组

6、织病理切 片 HE染色显示 SO2组支气管黏膜下有大量炎性细胞浸润； 免疫组化染色提示 SO2 组 SP 免疫阳性神经纤维数量明显增 加.结论：SO2 是损伤气道的重要病理因素， 气道内感觉神经 参与了气道损伤病理过程 . 关键词】二氧化硫；免疫组化；感觉神经； P 物质 0 引言 二氧化硫（SO2 是大气污染中的最主要成分，它是一 种辛辣、窒息性气体，能使呼吸系统生理功能减退，肺泡弹 性减弱， 肺功能降低， 引起气管炎、 支气管哮喘、 肺气肿等 . 特别是 SO2 与另一种空气污染物-可吸入性颗粒物的协同作 用对人体健康危害性更大.流行病学调查显示空气中 SO2浓 度超过mg/m3颗粒物浓度

7、超过 mg/m3时，呼吸系统疾病 的住院率明显上升 1. 对于已存在有呼吸系统疾病的患者， SO2 浓度升高可使患者咳嗽、咳痰、呼吸困难等症状加重， 以及肺功能下降2.但是 SO2 损伤气道的相关病理机制并 不十分清楚.P 物质是存在于气道内无髓鞘感觉神经 （C 纤维） 中的一种神经肽， SP 释放能增加气道内黏液分泌物的分泌以 及气道平滑肌收缩 3 . 本实验我们以模拟空气污染中 SO2 的浓度作为刺激因子，通过吸入观察 SO2 对气道内感觉神经 的刺激作用及气道形态学的改变，探讨 SO2 损伤气道诱发哮 喘及慢性气管炎的机制，为呼吸系统疾病的防治以及环保的 治理提供理论依据 . 1 材料和

8、方法 1.1 材料二级雄性 SD 大鼠，6 周龄，16 只，体质量 g , 购自第四军医大学实验动物中心 .1 X 10-7mL/LSO2 气体购自 北京普莱克斯实用气体有限公司；大鼠血清 SP 的 ELISA 检 测试剂盒购自美国 RapidBioLab 公司；抗 SP 兔抗大鼠一抗 及免疫组化染色试剂盒购于武汉博士德生物有限公司 . 1 2 方法 12 1 动物分组将大鼠随机分为 2 组即对照组和 SO2 组；每组 8 只. 对照组置于过滤空气室内 .SO2 组暴露于 mg/ （甲醛吸收副玫瑰苯胺分光光度法） 浓度的 S02 室内空气中， 每日 6h, 连续 3d. 整个实验过程控制温度和

9、湿度变化在 10 以内.室内 S02 浓度由西安市室内环境监测站协助监测 . 1. 2. 2 组织标本制作实验动物在 SO2 暴露结束后第 2 日后用戊巴比妥钠麻醉， 从腹主动脉取血 4mL 注入试管中 凝固后分离血清，在 4C条件下，3000r /min 离心 10min , 取上清液，待测血清中 SP 含量.随即结扎大鼠右肺，用 37 C 生理盐水 2mL 作左肺支气管肺泡灌洗 3 次，支气管肺泡灌洗 液（BALF）回收率约 80% .BALF1500r / min 离心 10min，力口 入与 BALF 等体积的生理盐水重悬沉淀的细胞， -20 C冻存. 分离心肺，将输液器针从右心室刺入

10、肺动脉，动脉夹固定， 剪掉左心耳，先用生理盐水量约 100mL 灌注，待流出液清亮 时，40mL/L 多聚甲醛 50mL 灌注，固定 24h,入 200g/L 蔗糖 PS 溶液中,4 C过夜恒冷箱切片，片厚分别为 8 卩 m 和 16 卩 m,待 做 HE 常规染色及免疫组化染色 . 1 . 2. 3BALF 细胞计数取 BALF 细胞悬液 1 滴置入血细胞 计数板中，光镜下分别计数各组 BALF 中细胞总数. 1. 2. 4 血清 SP 含量测定取血清上清液，用 ELISA 法测 血清 SP 含量，具体操作步骤参照 ELISA 试剂盒说明进行. 1. 2. 5 病理观察取 8 卩 m 冰冻切

11、片，常规 HE 染色，显 微镜下观察 . 1.2.6 免疫组化染色取 16 卩 m 冰冻切片，室温下干燥， 甲醇双氧水封闭组织内过氧化物酶，小牛血清封闭非特异性 抗体，加入 1 : 200 兔抗大鼠 SP 抗体，4 C过夜，滴加链亲 和霉素复合物（SABC,最后以葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵 法显色 . 常规脱水、 透明、封片 . 显微镜下计数细支气管内 直 径卩m SP 免疫阳性神经纤维数.对照组以 PBS 代替 1 : 200 兔抗大鼠SP 抗体，其余步骤相同. 统计学处理： 所有数据以 x s 表示，采用 SPSS 统计 软件进行处理，组间比较采用 t 检验，组间方差不齐时采用 t 检验，P0. 05 认为有统计学差异. 2 结果 2.1BALF 细胞总数对照组（n=8）为X 106/L ,S02 组（n=8） 为X 106/L, 两组比较，SO2 组 BALF 细胞总数显著升高. 血清 SP 含量对照组（n=8）为 pg/L , SO2 组（n=8）为 pg/L，两组比较，S