计数培养基适用性检查验证方案

1、计数培养基适用性检查验证方案1. 验证目的:细菌、孫菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检杳。本次验证的目的是确 认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。2. 参照标准：2010版中国药典二部附录x门微牛物限度检查法。3. 验证项营养琼脂培养皐和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。4. 验证小组人员及职责：4.1验证小组人员：小组人员职务姓名所在部门职务组长质量部经理组员质量部组员质量部检验员4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2认真观察并做好验证原始记录。4.2.3对实施验证的结果负责。5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数

2、不小于对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌 落形态大小与対照培养基上的菌落一致。6. 试验材料：6丄被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.2.仪器设备：6.2.1. *蒸汽灭菌器6.2.2.*净化工作台6.23* 争彳匕扌犁台6.2.4. *霉菌培养箱（2328°c）6 2.5. *电热恒温培养箱（3035°c）6.2.6. *远红外烘箱627 *电热鼓风干燥箱6 ? q*63验证用培养基名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基酵母浸出粉豚葡萄糖琼脂培养基6.4.验证

3、用菌株:（第代）验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）人肠埃希菌营养肉汤3035 °c1824金黄色葡萄球菌营养肉汤3035 °c1824枯草芽他杆菌营养肉汤3035 °c1824白色念珠菌改良马丁培养基2328 °c2448黑曲霉菌改良马丁琼脂培养基2328 °c57 （天）7菌液制备7.1. 接种人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物 至营养肉汤培养慕或 营养琼脂培养基屮，培养1824小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基 或改良马丁琼脂培养基中，培养2448小时。上述培养物川0.9%无菌氯化钠溶液制成每 lml含菌

4、数为50loocfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养 基中，培养57天，加入35ml含0.05% （v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶 液，将抱子洗脱。然后，用适宜方法吸出抱了悬液至无菌试管内，用含0.05% （v/v）聚 山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含抱了数50loocfu的也了悬液。菌悬液在室温卜放置应在2小时内使川，若保存在28°c可在24小时内使用。黑 曲霉砲子悬液可保存在28°c,在验证过的贮存期内使用。8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽抱杆菌分别収lml接种至营养琼脂培养基中，

5、置 3035°c培养48小时；白色念珠菌、黑曲每分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置23 28°c培养72小时。菌落计数结果(2个平1111计数取平均值)见下表菌落计数结來(cfu / ml)试验次数io-'稀释计稀释ict?稀释123123123大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽他杆菌口色念珠菌黑曲霉9.适用性检杳:取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各50loocfu,分别注入无菌平皿屮, 立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035°c培 养48小时,计数;取白色念珠菌、黑曲霉各50loocfu,分别注入无菌平皿中，立即倾 注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置232lc培养72 小时，计数；取白色念珠菌50loocfu,注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉j东葡萄糖 琼脂培养基，平行制备2个平血，混匀，凝固，g 2328°c培养72小时，计数。同时, 用相应的対照培养基替代被检培养基进行上述试验。9.2.结果见附表10.结论计数培养基适用性检杳验证记录验证菌株平皿号供试品组cfu / ml对照培养基组cfu / ml回收率应 $70%大肠埃希菌（培养3天计数）12一平均值金黄色葡萄球