实验室环境和人体表面微生物检查

1、实验室环境和人体表面微生物检查实验室坏境和人体表面微生物的检杳实验报告一 1 一实验室环境和人体表而微生物的检査李雪彤2009级生科3班摘要：生物界的微生物多达几万种，对以说是无处不在。本次试验我们学习了培养基的 制备及基木的灭菌方法，并接种了实验室环境（空气、桌面）和人体表面的微生物。经过 一周的培养，培养皿上形成了肉眼可见的菌落，我们可以观察处在各种环境下的微生物菌 落的形态特征。让我们对微生物的培养和菌落的特征有了初步的了解。同时，证明了实验 室坏境和人体表面存在多种多样的微生物，因此，我们应该意识到在微生物实验屮“无菌 操作”的重要性关键词：实验室坏境、人体表面、微生物坏境培养菌落1刖

2、吞：本次实验的冃的，是要学习并掌握培养基的制备原理和制作步骤，以及灭菌原理和操作 过程，通过实验证明实验室和人体表而存在微生物，并观察不同微生物类群的菌落其形态 颜色等特征。2材料与方法：2. 1材料：2.1.1菌种來自于实验室环境和人体农而的菌种。2. 1.2培养基牛肉膏蛋白豚琼脂平板。2. 2培养基的配制2.2.1溶液及试剂牛肉膏、蛋白月东、nack琼脂条、无菌水，naoh溶液及hc1溶液2.2.2仪器和其他用貝培养皿、三角瓶、试管、烧杯、接种坏、酒精灯、记号笔、牛皮纸、灭菌棉签、试管 架、废物缸等。2. 2方法与步骤：1.2.1牛肉膏蛋白月东培养基制备（见表1）。步骤：称量熔化调pi】表

3、1实验空环境和人体表面微生物的检查实验报告-2 -1.2.2实验步骤1.2.3注意事项:1）在培养基的配制过程中，不必等到琼脂完全溶化再调节piitfl,因为灭菌过程中温 度为121°c,且冇足够长的时间可以使其溶解。另外，在加热时有水分的蒸发散失，所以 要略微多加蒸憾水。2）琼脂融化过程屮要控制好火力并不断搅拌，以免培养基沸腾溢出或焦糊。3）高压蒸汽灭菌时： 不能装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌-效果。 三角烧瓶与试管口端均不应与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 加热同吋打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空厲。 切断电源或关闭煤气，当压力表的压力降至0时才可打开排气

4、阀。如果压力未降到0就打开排气阀，会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶 口或试管口，造成棉塞沾染培养基。4）制备平板和接种过程中，三角瓶口和培养川i开口要在酒精灯火焰20cm范围内，防 止杂菌进入。5）标签写在皿底，如果写在皿盖上，同时观察多个培养皿，打开盖时，易泯淆。字尽 量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。字尽量小，写在皿底一 边,以免影响观察结果。表2：培养皿编号后接种情况实验室环境和人体表面微牛:物的检查实验报告-3 -3结杲及分析接种日期：2010年9月22 h观察日期：2010年9月29日3. 1. 1实验结果 表3菌落 形态特征3

5、.1.2实验结果分析1、通过观察比较各个培养基上的菌落的形态及数目，置于空气屮 的平板中菌落种类更多样，原因：接触面大，空气流动性大，微生物种类数忖较多。实验室环境和人体表而微工物的检查实验报告-4 -2、不同的坏境下接种的微生物大多形态各异，因此可以说明不同的坏境中微生物的种 类变化较大。3、从形态特征看町以知道菌落的特征,來分离菌落。根据相关组别的菌落数冃观察，町以得到以下结论：1、通过比较1-1在空厲中放置5分钟后28摄氏度培养和37摄氏度培养两组的培养皿 上的菌落数量以及1-5、1-4在空气屮放置10分钟后28摄氏度培养和37摄氏度培养两组 的培养皿上的菌落数量，28摄氏度培养皿中的菌

6、落数多于37摄氏度的培养皿中的菌落 数，由此可推断出，28摄氏度的环境对能更加适合菌落的生长2、2、通过比较3-3洗手前培养皿和3-6洗手后培养血上的菌落数量，洗手前的菌落数 量较少，但是菌落较人型，菌落面积大，菌落种类多，这说明洗手前我们的手上细菌较 多。洗手后的培养皿中，菌落数量多，但菌落面积很小，菌落种类减少，这说明通过洗 手，除去了一部分细菌，但手上仍存在一定量的细菌。3. 3. 1实验结果见表5表5某菌种在两种菌种来源基上的数冃3. 3. 2实验结果分析1、从形态特征看可以知道菌落的特征，来初步判断是否是同一种菌种。2、通过分析3-2-空-10-2-37和3-1-手前-2-37中存在

7、同样的菌种，可以初步推断手上 的某些菌种川能來源于空气。4课后习题1 思考一：列举2-3类微牛:物，说明它们在本实验条件下（肉膏蛋白腺琼脂平板， 37°c）不能生长。因为牛肉音蛋白豚培养基是用来培养细菌的，故不能培养真菌，例如:霉菌，酵母菌.其次 实验是在37摄氏度进行，对能有些微生物不适合在此温度下培养。2. 思考二：比较各种來源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多？为什么？洗手后的 菌落数最多。因为在取样时，手指在培养基上按了很多下，而且菌种类型只为两种，相互 间的抑制作用较小，而其他取样的培养基虽然菌种数h多，但是各种菌间的抑制作用较 强，限制了菌株的生长。菌落类型为洗手前最多。

8、因为手接触了很多细菌或霉菌，包括空气小的，都町通过手的 接触进入培养基。3. 思考三：比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细实验室环 境和人体表面微生物的检查实验报告-5 -菌生长，你认为是什么原因？洗手前菌落数比洗手后菌落数少，但是菌种数冃多。洗手前，多数菌落为霉菌洗手 后，人多数为小型细菌菌落，而且数量较多。猜测原因为，洗手前的平板，後菌生长叮能 抑制了细菌牛长，因而菌落数较少；洗手后，霧菌被除公，细菌生长不受影响，故细菌菌 落较多。4. 思考四：完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围小？你如何体会“微生物既是我们的朋友又是我们的敌人” ？生产方面：它们在土壤

9、物质转化和促进植物生长有着极为重要的作用，例如根瘤菌， 圆褐固氮菌都是将氮元素活化，让植物来利用的微41物。在牛物工程方面，用酵母菌酿 酒，用乳酸菌制酸奶，用毛霉制腐乳。述对以制造生物杀虫剂，如苏方金杆菌，日本金龟子芽胞杆菌，对人畜无害，是一种比较绿色的杀虫剂。然而，有一些微生物属于动植物细 菌和病毒，给农牧业生产带来危害，如烟草花叶病毒，禽流感病毒。生活方而：当双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌在肠道内生长、繁殖，将阳止外而的病原 体入侵肠道，构筑成一个生物屏障，対人的健康有益。也有一些我们经常'听说的微生物対 人的健康冇害，如结核杆菌会引发结核病，流行感冒病毒会引发感冒等等。5. 思考五：

10、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是否为无 菌的？因为在配制培养基的过程屮沾染很多微生物，如果不立即灭菌，那么培养基冷凝后接种 了微半物，会影响微乞物的4:长，并且是培养的微牛物不纯。将灭菌后的培养基冷凝后放入37摄氏度恒温箱中培养，如果若干天后培养基上没有菌 落出现，则断定培养基为无菌的。6. 思考六：在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题，为什么？pii值应调节为7. 0-7. 2之间，并且在加入naoii溶液时要注意不要加入过量，因为即使 后期用hc1溶液中和调节，牛成的盐类物质仍然会影响培养液的配制。培养基配方的选定：同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别

11、。因此，除所用 的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核 对，再依据自己的使丿tju的，加以选用，记录其來源。培养基的配制记录：每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其來源，和 各种成份的牌号，最终pll值、消毒的温度和时间制备的口期和制备者等，记录应复制一 份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。培养基成分的称収：培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完 成，不要中断。对将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方而军做出记号，并将所需称 取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后

12、，还应 进行一次检査。培养基各成分的混合和溶化：培养棊所川化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得 为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁泯入培养基屮，使细菌不易生长。最好使用不锈钢萬加 热溶化，可放入人烧杯或大烧瓶屮置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消壽器屮蒸煮溶化。在锅 中溶化实验室环境和人体表而微生物的检查实验报告时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现冇焦化现象、该培养基即不能使 用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮 沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过 程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。培养基的灭菌：

13、一般培养基对采用121。c高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基 制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消壽，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明 胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于 经冷却约50° c左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出，冷至55°c-60°c 时，摆置成适当斜而，待其自然凝固。培养基的质量测试：每批培养基制备好以后，应 仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃 去。并测定其最终ph。将全部培养基放入36±1° c恒温箱培养过夜，如发现有菌生长， 即弃去。用有关的标准菌株接种广2管或瓶培养基，培养2448小时，如无菌生长或生长 不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。培养基的保存：培养基应存放丁冷暗处，最好