常用血细胞化学染色原理及应用

1、常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）原理  粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。正常血细胞的染色反应：1. 粒细胞系-原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。2. 单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反

2、应。3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系-均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）原理  过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。正常血细胞的染色反应：1. 粒细胞系-原粒细胞多呈阴性, 至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性

3、反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。2. 单核细胞系-原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）（+）阳性反应。3. 淋巴细胞系-大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。4. 红细胞系-红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。5. 巨核细胞系- 巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应。6. 其他-浆细胞呈阴性反应,少数呈较弱阳性。巨噬细胞可呈阳性反应。均定位于胞质内。1临床意义1）急性白血病类型的鉴别  红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反

4、应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。2）各类贫血的鉴别  MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。3）其他细胞类型的鉴别  戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼匹克细胞PAS染色为弱阳性，空泡中心阴性。非霍奇金淋巴细胞PAS

5、染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应。骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法）（NAP） 原理  中性粒细胞内碱性磷酸酶在pH9.4-9.6时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。阳性 （+）1分：胞质见浅红色，无颗粒或有少量细小颗粒但小于胞质1/4面积。（+）2分：胞质见红色，有较粗红色颗粒但小于胞质1/2面积。（+） 3分：胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积3/4以上。（+）4分：胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积甚至可掩盖于

6、胞核上。2正常血细胞的染色反应：1. 碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他细胞均呈阴性反应。2. 成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分的计算100（包括分叶核和杆状核粒细胞），参考值为7-51 。临床意义生理变化：新生儿高，老年低； 应激状态可增高； 月经前期高，行经后降低； 妊娠后逐月增高NAP 积分增高：1. 细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、活力显著升高；病毒感染无明显变化。鉴别细菌性感染和病毒感染。2. 慢粒NAP积分明显减低，常为“0”，缓解时上升。类白血病,由化浓性球菌引起的类白反应,NAP活力明显升高。鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效。3. 急性粒细胞白血病

7、NAP减低，急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,鉴别急粒和急淋。4. 急单减低。5. 再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。对再障的诊断疗效观察和估计病情均有一定意义。阵发性睡眠性血红蛋白尿NAP减低，可鉴别PNH和再障。6. 真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,而继发性红细胞增多症NAP无明显变化，鉴别真红和继发红细胞增多症。7. 骨髓增生异常综合征NPA减低。8. 红白血病NAP减低，镰形细胞型贫血，家族地磷酸酶血症减低；慢淋、骨髓纤维化、原发性血小板增多和红血病增高。9. 其它应用肾上腺皮质激素、雌激素、和ACTH后NAP增高。（4）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染

8、色的原理和临床意义NAS-DCE原理  细胞内的氯乙酸ASD萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸ASD萘酚，产生ASD萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。3正常细胞反应 :1. 粒细胞系-中性粒细胞(除原粒细胞外)均可呈阳性或强阳性,且酶活性并不随细胞成熟而增强，定位于胞浆内。嗜酸粒细胞为阴性和弱阳性，嗜碱为阳性。 2. 单核为阴性，个别阳性。淋巴细胞系、浆细胞系、幼红细胞系、血小板均呈阴性。临床意义 临床上主要用于急性白血病类型的鉴别 急性粒细胞白血病时，白血病性原粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病、急性淋巴

9、细胞白血病：白血病性细胞为阴性反应；（5）-醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义（-NAE）原理  血细胞中的-醋酸萘酚酯酶（-NAE）水解基质液中的-醋酸萘酚，释放出-萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。正常细胞阳性反应:1.粒细胞系-各期粒细胞均为阴性，少数粒细胞可呈阳性反应,不被NaF抑制。2.单核细胞系原单为阴性或弱阳性，单核和幼稚单核为阳性, 被NaF抑制。3.巨核细胞系-巨核细胞和血小板为阳性。4.其他红细胞系-幼红和淋巴一般为阴性，少数可可呈弱阳性，不被NaF抑制，浆细胞阴性。临床意义  主要用于急性白血病类型的鉴别。

10、单核细胞阳性受氟化钠抑制，其他不受抑制。（6）碱性-丁酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义-NBE原理  细胞内的-丁酸萘酚酯酶（-NBE）在pH碱性条件下水解基质液中的-丁酸萘酚，释放出-萘酚，后者与基质液中的重氮盐耦联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。4正常细胞阳性反应:1.粒细胞系-各期粒细胞均阴性。2.单核细胞系分化差的原单阴性，分化好的原单阳性，幼稚及成熟单核细胞呈阳性，被NaF抑制。3.淋巴细胞-T、非T非

11、B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞阴性。4.其他细胞幼红细胞、巨核细胞系、浆细胞均呈阴性或弱阳性。组织细胞可以呈阳性，但不被NaF抑制。临床意义 与-NAE临床意义相同，敏感性不如-NAE，而特异性较差，是急性白血病常用的化学染色。 （7）酸性磷酸酶染色的原理和临床意义原理  细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚ASBI水解，释出萘酚ASBI，再与重氮盐耦联，形成不溶性有色沉淀，定位于胞浆中。临床意义1）白血病类型鉴别  多毛细胞白血病的多毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性反应，并耐L酒石酸抑制作用；慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤的淋巴细胞ACP染色也可阳性

12、，但可被L酒石酸抑制，有助于与多毛细胞鉴别。2）鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞T淋巴细胞ACP染色呈阳性反应；B淋巴细胞ACP染色呈阴性反应。3）戈谢细胞和尼曼匹克细胞的鉴别戈谢细胞ACP染色呈强阳性反应；尼曼匹克细胞呈阴性或弱阳性反应。（8）酯酶双染色的原理和临床意义原理  血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。氟化钠抑制试验是以相同方法制备2份基质液，其中一份加入适量NaF，另一份不加NaF作对照。将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同基质液中，分别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。属于非特异性酯酶染色。 用油镜观察计数100或200个被检细胞，

13、分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。 抑制率（%）=（抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分）/抑制前阳性率或阳性积分×1005 临床意义鉴别急性白血病类型，除单核细胞被NaF抑制，都不受抑制。都阳性。（9）骨髓铁染色的原理和临床意义原理  骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁）和幼红细胞胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于细胞内外铁存在的部位。细胞外铁：观察骨髓小粒重点铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。分为（-）、（+）、（+）、（+）、（+）细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼细胞的百分比。根据蓝色铁粒的多少分为型、型、型、型及环铁粒幼红细胞（指幼红细胞胞质内蓝色颗粒在6颗以上，围绕核周二分之一以上者）。1. 正常人骨髓细胞外铁为+-+。2. 大多数为+铁粒幼细胞阳性率为19%-44%。铁染色（iron stain；IS）中的细胞外铁反映骨髓中铁的储存量，细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。临床意义1）鉴别缺铁性贫血骨髓细胞外铁减少甚至消失，铁粒幼细胞的阳性率明显减低，经有铁剂治疗后，细胞外铁增多。作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的方法。2）有助于铁粒幼细胞贫血的诊