单克隆抗体与动物细胞融合

1、 为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性鼠鼠B淋巴细胞淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导人工诱导杂交瘤细胞杂交瘤细胞 动物细胞融合（动物细胞融合（技术技术）：是指）：是指（在一定的条件下在一定的条件下）两个或多个细）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。胞融合形成一个单核细胞的过程。问题：问题：抗体由什么抗体由什么细胞产生？其化学细胞产生？其化学本质是什么？与抗本质是什么？与抗原作用的特点？主原作用的特点？主要分布在哪里？要分布在哪里？2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 一个天然一个天然抗原物质可有抗原物质可有多

2、种和多个决多种和多个决定簇定簇。教材中。教材中所说的抗原分所说的抗原分子刺激淋巴细子刺激淋巴细胞，说的也就胞，说的也就是是抗原决定簇抗原决定簇刺激刺激B B淋巴细淋巴细胞，使其分裂胞，使其分裂分化出分化出特异性特异性的效应的效应B B细胞细胞，分泌分泌特异性抗特异性抗体。体。抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。体的特异性差、灵敏度低。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概

3、念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 单单: : 单个细胞单个细胞 克隆克隆: : 无性繁殖无性繁殖 单克隆单克隆抗体抗体: :单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的

4、化学性质单一化学性质单一特异性强特异性强的抗体的抗体提示提示1 1：对：对B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？的？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能

5、大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞 实验目的实验目的: :制备单克隆抗体制备单克隆抗体. . 实验原理：实验原理： 实验过程：实验过程：2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备 看书上看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 描述单克隆描述单克隆抗体制备过抗体制备过程步骤程步骤注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选

6、筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 22.诱导细胞融合的诱导细胞融合的手段有哪些？手段有哪些？注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克

7、隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，若细胞两两融合后，有几种融合情况？有几种融合情况？注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 24.第一次筛选出的杂交瘤第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？养和专一抗体检测？5.5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交

8、瘤细胞？性抗体的杂交瘤细胞？ 有限稀释法有限稀释法稀释多次稀释多次稀释稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。问题：问题：单克隆抗体的突出优点是什么？单克隆抗体的突出优点是什么？特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 克隆单个杂交瘤细胞，可制备克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原抗一种抗原决定簇的决定簇的特异单克隆抗体。特异单克隆抗体。2.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速 (“生物导弹生物

9、导弹” 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)1、检验医学检验医学诊断试剂诊断试剂目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：病原微生物抗原、抗体的检测；肿瘤抗原的检测；免疫细胞病原微生物抗原、抗体的检测；肿瘤抗原的检测；免疫细胞及其亚群的的检测；激素测定；细胞因子的测定。及其亚群的的检测；激素测定；细胞因子的测定。2、蛋白质的提纯、蛋白质的提纯单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离性的固相基质上，并

10、制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或PH，欲分，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。3、肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术、肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外，将放射性标记物与单克隆杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏目前单克隆抗体主要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏反应。因此，制备人反应。因此，制备人-人单克隆抗体或人源化抗