实验 光学显微镜的使用及显微绘图

1、细胞生物学实验细胞生物学实验12021-11-121光学显微镜的使用及显微绘图光学显微镜的使用及显微绘图2细胞膜的渗透性观察细胞膜的渗透性观察3液泡系的超活染色与观察液泡系的超活染色与观察4feulgen反应制作细胞反应制作细胞dna定性、定定性、定量测定样品量测定样品5减数分裂的观察减数分裂的观察6植物染色体标本的制备植物染色体标本的制备7动物染色体标本的制备动物染色体标本的制备8考马斯亮蓝染色显示细胞考马斯亮蓝染色显示细胞骨架骨架9细胞凝集反应及细胞吞噬细胞凝集反应及细胞吞噬10 细胞融合细胞融合11染色体分带技术染色体分带技术实验实验 1光学显微镜的使用光学显微镜的使用及显微绘图及显微绘

2、图 22021-11-12一、目的要求一、目的要求 （1）熟悉显微镜的结构和各部件性能。）熟悉显微镜的结构和各部件性能。 （2）掌握低倍镜）掌握低倍镜/高倍镜的正确使用方法，掌高倍镜的正确使用方法，掌 握油镜的使用方法。握油镜的使用方法。 （3）掌握显微绘图的基本方法）掌握显微绘图的基本方法 （4）了解细胞的基本结构，动物、植物和微）了解细胞的基本结构，动物、植物和微 生物细胞的基本共性和特性生物细胞的基本共性和特性32021-11-12二、仪器设备及材料二、仪器设备及材料 1. 光学显微镜光学显微镜/显微照相系统（带油浸物镜）显微照相系统（带油浸物镜） 2. 目镜测微尺及镜台测微尺目镜测微尺

3、及镜台测微尺 3. 香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯 4. 永久装片、擦镜纸永久装片、擦镜纸42021-11-12普通生物显微镜普通生物显微镜52021-11-12显微照相系统显微照相系统62021-11-12三、显微镜的构造三、显微镜的构造 1 1机械部分机械部分 支持和调节光学系统支持和调节光学系统charge-coupled device72021-11-12三、显微镜的构造三、显微镜的构造 2 2光学系统光学系统82021-11-12三、显微镜的构造三、显微镜的构造 3 3显微镜的能力显微镜的能力 .61. 0anr 显微镜的能力是质量和性能的标志。显微镜的能力是质量和性能的标志。能力包括

4、分辨率、放大率、焦点深度和视能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中场宽度等，其中最重要的是分辨率最重要的是分辨率。2sin.nanr：分辨率（分辨的两个点的最短距离），：分辨率（分辨的两个点的最短距离）， r值愈小，分辨率越大。值愈小，分辨率越大。：照明光线的波长：照明光线的波长(可见光平均波长可见光平均波长 约约550nm）。）。n.a.：物镜的镜口率：物镜的镜口率n：物镜和被检物体之间介质的折射率：物镜和被检物体之间介质的折射率：物镜的镜口角（从物镜光轴上的物点所发出：物镜的镜口角（从物镜光轴上的物点所发出的光线与物镜前透镜有效直径边缘所张的角度）。的光线与物镜前透镜有效直径边

5、缘所张的角度）。92021-11-12表表1 在在550nm光波下不同物镜的分辨距离光波下不同物镜的分辨距离 放大倍数（放大倍数（）1040100镜口率（镜口率（n.a.）0.280.651.25分辨距离（分辨距离（d）1m0.42m0.22m102021-11-12科勒照明科勒照明优点：优点：视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。 1893年德国杰出的学者年德国杰出的学者august kohler提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之间，加放一光源聚光镜和视场光阑，光源聚光镜把

6、光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的间，加放一光源聚光镜和视场光阑，光源聚光镜把光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的孔径光阑平面处。同时，聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光孔径光阑平面处。同时，聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光源，使点状的光源达到较大的照明，从而使样品得到均匀的照明，并防止了高温。这对显微源，使点状的光源达到较大的照明，从而使样品得到均匀的照明，并防止了高温。这对显微摄影和镜检观察至关重要。摄影和镜检观察至关重要。 112021-11-12四、油镜的原理四、油镜的原理 油镜（油浸系物镜，通常有黑圈或油镜（油浸系物镜，通常有黑圈或

7、oil的标志），以香的标志），以香柏油或石蜡油为介质。这类油的折射率与玻璃的折射率柏油或石蜡油为介质。这类油的折射率与玻璃的折射率大致相同。光线从被检物体直接射入物镜，其间因折射大致相同。光线从被检物体直接射入物镜，其间因折射或反射而引起的光线损失很小，所以可以充分利用镜口或反射而引起的光线损失很小，所以可以充分利用镜口角，显著提高物镜的分辨率。角，显著提高物镜的分辨率。 油镜（镜口率一般在油镜（镜口率一般在1.25左右）的分辨率在左右）的分辨率在0.2 m左右，这就是左右，这就是光学显微镜的分辨极限。光学显微镜的分辨极限。表表1 几种物质的折射率几种物质的折射率介质介质空气空气水水石蜡油石蜡

8、油香柏油香柏油加拿大树胶加拿大树胶光学玻璃光学玻璃折射率（折射率（n）1.0031.331.471.5151.5151.54122021-11-12五、显微镜的使用方法五、显微镜的使用方法使用显微镜的要领就是使用显微镜的要领就是从低倍物镜开始观从低倍物镜开始观察，先粗调后细调察，先粗调后细调。 在低倍物镜下找到要观察的东西后，在低倍物镜下找到要观察的东西后，再逐步加大物镜倍数，仔细观察。再逐步加大物镜倍数，仔细观察。132021-11-12低倍镜的使用低倍镜的使用 （1）检查检查：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。（2）准备准

9、备：将显微镜放于前方略偏左侧以便观察。打开电源开关，观察：将显微镜放于前方略偏左侧以便观察。打开电源开关，观察底座的光路中是否有光亮。慢慢调节同一旋钮，底座的光路中是否有光亮。慢慢调节同一旋钮，光线应逐步增强光线应逐步增强。转动粗调。转动粗调节钮，将载物台下降使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低节钮，将载物台下降使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低倍镜倍镜4 x对准载物台中央的通光孔（可听到对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒咔哒”声）。声）。（3）放标本片放标本片：标本片标签面向上，用标本夹夹好，把：标本片标签面向上，用标本夹夹好，把要观察的部分移要观察的部分移到通光

10、孔的正中央到通光孔的正中央。（4）调节焦距调节焦距：边从目镜中观察，边调节粗聚焦旋钮边从目镜中观察，边调节粗聚焦旋钮，使载物台缓慢上，使载物台缓慢上升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调节钮，使物像升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调节钮，使物像更加清晰。更加清晰。（5）换换10 x 物镜观察。此时，只须稍稍调节细调节旋钮即可。物镜观察。此时，只须稍稍调节细调节旋钮即可。142021-11-122021-11-1215低倍镜的使用低倍镜的使用 如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成：如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成： 转动调节

11、钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。转动调节钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。 物镜没有对正，应对正后再观察。物镜没有对正，应对正后再观察。 标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。 光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时，光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时， 易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。162021-11-12低倍镜的使用低倍镜的使用 高倍镜的使用高倍镜的使用 如按上述操作仍看不到物像时，可能由下列原因造如按上述操作仍看不到物像时，

12、可能由下列原因造成：成：观察的部分不在视野内，应在低倍镜下寻找到后观察的部分不在视野内，应在低倍镜下寻找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。，移到视野中央，再换高倍镜观察。标本片放反了，应把标本片放正之后，再按上述标本片放反了，应把标本片放正之后，再按上述步骤操作。步骤操作。焦距没调好，应仔细调节焦距。焦距没调好，应仔细调节焦距。如需要更换标本片时，应该先把载物台下降，然后如需要更换标本片时，应该先把载物台下降，然后把标本片移到载物台前方，再取下。把标本片移到载物台前方，再取下。（1）依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。）依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。（2）将需要观察的部

13、分移到视野的中央。）将需要观察的部分移到视野的中央。（3）眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜）眼睛从侧面注视物镜，用手移动转换器，换高倍镜40x。（4）眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调节钮，直至视野内看到清晰）眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调节钮，直至视野内看到清晰的物像为止。的物像为止。此时应把聚光器的孔径光阑适当调大，使之与物镜的镜口率相匹此时应把聚光器的孔径光阑适当调大，使之与物镜的镜口率相匹配。光源的强度也应调高。配。光源的强度也应调高。172021-11-12油镜的使用油镜的使用应先调低倍镜、高倍镜找到要观察的物像，然后再用油镜观察，操作如下：应先调低倍镜、高倍

14、镜找到要观察的物像，然后再用油镜观察，操作如下：（1）先用低倍镜观察标本，然后更换高倍镜，把待观察的部分移到视野中央。）先用低倍镜观察标本，然后更换高倍镜，把待观察的部分移到视野中央。（2）把载物台下降约把载物台下降约1.5厘米，再把油镜转到工作位置。厘米，再把油镜转到工作位置。（3）在盖玻片上所）在盖玻片上所要观察的位置要观察的位置滴滴一小滴一小滴香柏油。香柏油。（4）细心拧动粗调焦螺旋，使载物台慢慢上升。这时要仔细观察物镜前端与标）细心拧动粗调焦螺旋，使载物台慢慢上升。这时要仔细观察物镜前端与标本之间的距离，本之间的距离，先使物镜前端与油滴接触，然后再慢慢使载物台上升，至物镜前端先使物镜前

15、端与油滴接触，然后再慢慢使载物台上升，至物镜前端接近而没有碰到盖玻片为止。接近而没有碰到盖玻片为止。这步操作要特别小心，防止油镜压碎标本或损坏油镜这步操作要特别小心，防止油镜压碎标本或损坏油镜（油镜的工作距离约油镜的工作距离约0.2mm）。）。（5）眼睛要看目镜中，拧动细调焦螺旋，使）眼睛要看目镜中，拧动细调焦螺旋，使载物台慢慢下降到能看清标本载物台慢慢下降到能看清标本。这。这步操作要特别注意不要把细调焦螺旋的方向拧错，以防压碎标本。步操作要特别注意不要把细调焦螺旋的方向拧错，以防压碎标本。（6）看清标本后，把聚光器下的孔径光阑开到它的口径与视场的直径恰好一样）看清标本后，把聚光器下的孔径光阑

16、开到它的口径与视场的直径恰好一样大，使聚光器的镜口率与物镜的镜口率相配合。如果聚光器的镜口率小于物镜的镜大，使聚光器的镜口率与物镜的镜口率相配合。如果聚光器的镜口率小于物镜的镜口率，则物镜的镜口率就不能充分发挥。口率，则物镜的镜口率就不能充分发挥。（7）观察完毕后，下降载物台，把油镜转离光轴，）观察完毕后，下降载物台，把油镜转离光轴，立即作清洁工作立即作清洁工作。先用干的。先用干的擦镜纸擦一、二次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦两次，最后再用擦镜纸擦一、二次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦两次，最后再用干擦镜纸擦一次。干擦镜纸擦一次。擦拭时要顺镜头的直径方向擦拭时要顺镜头的

17、直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻，不可用力擦。如果聚光器上有滴油也要同样清洁。载玻片上的油可用，动作要轻，不可用力擦。如果聚光器上有滴油也要同样清洁。载玻片上的油可用“拉纸法拉纸法”擦净，即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，在纸上滴一些二甲苯，趁擦净，即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，在纸上滴一些二甲苯，趁湿把纸往外拉，这样连续作湿把纸往外拉，这样连续作34次，即可干净。次，即可干净。182021-11-12六、显微镜使用的注意事项六、显微镜使用的注意事项 1搬动显微镜时，要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠身体。切勿一手斜提或前后搬动显微镜时，

18、要一手握镜臂，一手扶镜座，两上臂紧靠身体。切勿一手斜提或前后摆动，不要发生太大震动，以防镜头或其他零件跌落。摆动，不要发生太大震动，以防镜头或其他零件跌落。2观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离观察标本时，显微镜离实验台边缘应保持一定距离(5cm)，以免显微镜翻倒落地。，以免显微镜翻倒落地。3使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握粗、细调节钮的转动方向使用时要严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握粗、细调节钮的转动方向与载物台升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。与载物台升降关系。转动粗调节钮向下时，眼睛必须注视物镜头。4观察带液体的临时标本时要加盖玻片，以

19、免液体污染镜头。观察带液体的临时标本时要加盖玻片，以免液体污染镜头。5粗、细调节钮要配合使用，粗、细调节钮要配合使用，细调节钮不能单方向过度旋转细调节钮不能单方向过度旋转，调节焦距时，要从侧面注调节焦距时，要从侧面注视载物台，以免压坏标本和镜头视载物台，以免压坏标本和镜头。6禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。7显微镜光学部件有污垢，可用擦镜纸或绸布擦净，切勿用手指、粗纸或手帕去擦，以显微镜光学部件有污垢，可用擦镜纸或绸布擦净，切勿用手指、粗纸或手帕去擦，以防损坏镜面。防损坏镜面。8凡有腐蚀性和挥发性的化学试剂和药品，如碘、乙醇溶液、酸类、碱类等都不可与凡有腐蚀性和挥发性的化学试剂和药品，如碘、乙醇溶液、酸类、碱类等都不可与显微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。显微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。9使用油镜观察样品后，随即用二甲苯将油镜镜头和载玻片擦净，以防其他的物镜玻使用油镜观察样品后，随即用二甲苯将油镜镜头和载玻片擦净，以防其他的物镜玻璃上沾上香柏油。璃上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用后马上洗手。二甲苯有毒，使用后马上洗手。10实验完毕，要将玻片取出，用擦镜纸将实验完毕，要将玻片取出，用擦镜纸将镜头擦拭干净后移开，不能与通光孔相对镜头擦拭干净后移开，不能与通光孔相对。切不可把显微镜放在直射光线下曝晒。切不可把显微