临床班医学微生物学实验八 肠道微生物感染的病原学诊断——粪便检查（2）

1、实验八实验八 肠道微生物感染的病肠道微生物感染的病原学诊断原学诊断粪便检查粪便检查（2）v致病性肠道杆菌的分离鉴定致病性肠道杆菌的分离鉴定 血清学鉴定（血清学鉴定（1 1份份/ /组）组）v肥大氏反应（肥大氏反应（1 1份份/ /组）组）v肠道杆菌：肠道杆菌：非致病菌：非致病菌：大肠杆菌等大肠杆菌等致病菌：致病菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌-肠道杆菌在形态和染色性方面无特征性肠道杆菌在形态和染色性方面无特征性如何鉴定致病性肠道杆菌如何鉴定致病性肠道杆菌?v利用肠道杆菌某些生物学性状（利用肠道杆菌某些生物学性状（生化反应、生化反应、抗原性抗原性等）的差异，对其进

2、行鉴别。等）的差异，对其进行鉴别。致病性肠道杆菌分离鉴定程序致病性肠道杆菌分离鉴定程序标本采集标本采集SS平板分离培养平板分离培养红色菌落红色菌落无色半透明菌落无色半透明菌落接种双糖铁培养基接种双糖铁培养基系统生化反应系统生化反应血清学鉴定血清学鉴定一一直直用用1 1号号或或2 2号号标标本本进进行行实实验验一、血清学鉴定（一、血清学鉴定（1 1份份/ /组）组）用上次接种在双糖铁培养基中的用上次接种在双糖铁培养基中的1 1号或号或2 2号致病细菌号致病细菌进行试验（由学生准备）进行试验（由学生准备）原理：原理： 玻片凝集反应玻片凝集反应目的：鉴定细菌，明确诊断目的：鉴定细菌，明确诊断方方 法

3、法1 1、分别加细菌抗血清及生理盐水各、分别加细菌抗血清及生理盐水各1 12 2滴滴2 2、待检细菌（各、待检细菌（各1 12 2环）环）伤寒抗血清伤寒抗血清痢疾抗血清痢疾抗血清N.S二、肥大氏反应（二、肥大氏反应（1 1份份/ /组）组）v原理：原理：用已知伤寒及甲、乙型付伤寒沙门氏用已知伤寒及甲、乙型付伤寒沙门氏菌抗原（菌抗原（O O，H H），检测病人血清中有无相应抗），检测病人血清中有无相应抗体及其效价的试管凝集试验。体及其效价的试管凝集试验。v目的：目的：辅助诊断伤寒或副伤寒辅助诊断伤寒或副伤寒 v所用已知抗原：所用已知抗原：伤寒杆菌：菌体（伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（）抗原、鞭

4、毛（H）抗原）抗原甲型副伤寒杆菌：甲型副伤寒杆菌：O抗原、鞭毛（抗原、鞭毛（A）抗原）抗原乙型副伤寒杆菌：乙型副伤寒杆菌：O抗原、鞭毛（抗原、鞭毛（B）抗原）抗原v正常值：正常值：O O抗体抗体1 1：8080 H H抗体抗体1 1：160160 A A、B B抗体抗体1 1：8080v方法：试管凝集反应（方法：试管凝集反应（4 4份）份）试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7NS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5待测血清待测血清（1种）种）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5丢弃丢弃细菌抗原细菌抗原（4种）种） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

5、0.5 0.51:401:801:6401:1601:3201:201:401:801:1601:3201:6401:128037放置过夜放置过夜生理生理盐水盐水空白空白对照对照肥大氏反应（肥大氏反应（1 1份份/ /组）组）实验方法实验方法充分混匀，置充分混匀，置37温箱过夜。温箱过夜。第二天取出观察结果，确定凝集效价。第二天取出观察结果，确定凝集效价。凝集效价：凝集效价：能与抗原产生明显凝集现象（能与抗原产生明显凝集现象（+）的血清的最高血清稀释度。的血清的最高血清稀释度。+：液体清澈透明，菌体全部形成凝集块，沉于底部液体清澈透明，菌体全部形成凝集块，沉于底部+：液体较透明，大部分菌体沉于

6、管底液体较透明，大部分菌体沉于管底+：液体稍浑浊，可见较多细小凝集液体稍浑浊，可见较多细小凝集-：液体浑浊，无凝集液体浑浊，无凝集结果观察结果观察观察时要注意：观察时要注意： 勿摇动试管勿摇动试管，以免凝集块摇散。，以免凝集块摇散。 观察盐水对照管，若管底有观察盐水对照管，若管底有沉淀沉淀，边缘整齐，边缘整齐， 摇荡后仍呈均匀浑浊摇荡后仍呈均匀浑浊 自第一管看起，管底有自第一管看起，管底有凝集块凝集块，边缘不整齐，边缘不整齐。 最后再摇动试管，最后再摇动试管，观察观察v结果分析：结果分析：O O、H H抗体均增高：肠热症可能大抗体均增高：肠热症可能大O O、H H抗体均不高：患病可能小抗体均不

7、高：患病可能小仅仅O O抗体高：感染早期或其他沙门菌感抗体高：感染早期或其他沙门菌感染染仅仅H H抗体高：预防接种，既往感染抗体高：预防接种，既往感染 应动态观察抗体效价变化应动态观察抗体效价变化肥大氏反应（肥大氏反应（1份份/组组） 第二天观察结果第二天观察结果血清学鉴定（血清学鉴定（1份份/组）组）v1、分别加细菌抗血清及生理盐水各分别加细菌抗血清及生理盐水各12滴滴v2、待检细菌（各、待检细菌（各12环）环）伤寒抗血清伤寒抗血清痢疾抗血清痢疾抗血清N.S试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7NS 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5待测血清待测血清（1种）种）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5丢弃丢弃细菌抗原细菌抗原（4种）种） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.51:40