临床检验技术床旁分技术

1、第十七章床旁分析技术第十七章床旁分析技术2lpoctpoct的概念的概念: :“poct”poct”的组成包括：的组成包括： point point （地点、时间（地点、时间) ) carecare（保健、照料）（保健、照料） testingtesting（检验、试验）（检验、试验） point-of-care testingpoint-of-care testing即即: :即时检测或床边检测即时检测或床边检测, ,主要是指可以远离中心实验室，在患者身边快速进行并能快主要是指可以远离中心实验室，在患者身边快速进行并能快速获取准确结果的实验室检查速获取准确结果的实验室检查 3lpoctpoct

2、的应用的应用 早期：早期：尿液分析、血糖分析尿液分析、血糖分析 目前：目前：血气分析、电解质分析、血液血气分析、电解质分析、血液分析、药物应用监测、抗凝测定、心肌损分析、药物应用监测、抗凝测定、心肌损伤标志物检测、甲状腺激素检测伤标志物检测、甲状腺激素检测4lpoctpoct采用的主要技术采用的主要技术: :电化学分析电化学分析酶学分析酶学分析免疫分析免疫分析荧光分析荧光分析层析技术层析技术酶联免疫分析酶联免疫分析5 实验仪器小型化实验仪器小型化 操作方法简单化操作方法简单化 结果报告即时化结果报告即时化 lpoctpoct仪器的主要特点仪器的主要特点: :6第一节第一节 免疫胶体金分析技术免

3、疫胶体金分析技术7一、基本原理一、基本原理 以胶体金标记结合抗原抗体反应的一种新型以胶体金标记结合抗原抗体反应的一种新型的的免疫标记分析技术。免疫标记分析技术。 斑点免疫金渗滤分析法斑点免疫金渗滤分析法（digfadigfa）免疫层析法免疫层析法（icaica） u检测原理检测原理:胶体金标记物胶体金标记物胶体金胶体金8斑点免疫金渗滤分析法（斑点免疫金渗滤分析法（digfa） 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可过滤性，以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可过滤性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体滤过使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体滤过膜的方式迅速完成膜的方式迅速

4、完成 免疫渗滤装置及操作示意图免疫渗滤装置及操作示意图9 以金胶粒或着色乳胶粒等有色粒子作标记物，层析条以金胶粒或着色乳胶粒等有色粒子作标记物，层析条通过多种材料复合而成，多用于定性的检测，也可半定量通过多种材料复合而成，多用于定性的检测，也可半定量分析。分析。免疫层析法（免疫层析法（ica）免疫层析法检测试剂条结构免疫层析法检测试剂条结构 10 b c t r a 免疫层析试验原理示意图免疫层析试验原理示意图吸水材料吸水材料免疫金复合物免疫金复合物 测试区测试区 参照区参照区末段吸水材料末段吸水材料层析方向层析方向11u检测特点：检测特点：试剂和样本用量极小试剂和样本用量极小不需贵重仪器不需

5、贵重仪器没有污染性物质没有污染性物质检测速度快检测速度快u技术关键步骤：技术关键步骤：胶体金制备胶体金制备蛋白质蛋白质(第二抗体第二抗体)的胶体金标记的胶体金标记12二、胶体金的制备二、胶体金的制备还原法还原法 u还原剂：还原剂： 柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、硼氢化钠等柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、硼氢化钠等u制备方法及注意事项：制备方法及注意事项：方法：方法：在加热搅拌器上将在加热搅拌器上将0.01氯金酸水溶液加热沸腾后，氯金酸水溶液加热沸腾后，滴加一定量的滴加一定量的1柠檬酸三钠柠檬酸三钠溶液，煮沸约溶液，煮沸约15min后冷却即可。后冷却即可。柠檬酸三钠用量从低到高可获得相应胶体金的颜色从蓝、

6、紫柠檬酸三钠用量从低到高可获得相应胶体金的颜色从蓝、紫到红、橙。到红、橙。注意事项：注意事项：注意所用玻璃容器的清洁及硅化注意所用玻璃容器的清洁及硅化 13三、抗体蛋白的胶体金标记三、抗体蛋白的胶体金标记u标记方式标记方式: 静电吸附静电吸附 在弱碱环境下胶体金颗粒带负电荷，可与蛋白质分在弱碱环境下胶体金颗粒带负电荷，可与蛋白质分子中碱性氨基酸带正电荷的基团形成静电结合，属于非子中碱性氨基酸带正电荷的基团形成静电结合，属于非共价结合。共价结合。 u影响蛋白质与胶体金的结合的因素影响蛋白质与胶体金的结合的因素 蛋白质所带电荷蛋白质所带电荷溶液的溶液的ph蛋白质的相对分子质量蛋白质的相对分子质量胶

7、体金颗粒的大小胶体金颗粒的大小蛋白质与胶体金的比例蛋白质与胶体金的比例溶液的离子强度溶液的离子强度14u胶体金标记的关键步骤：胶体金标记的关键步骤：(一一)待标记抗体蛋白溶液的准备待标记抗体蛋白溶液的准备 去无机离子和蛋白聚合物去无机离子和蛋白聚合物(二二)待标记胶体金溶液的准备待标记胶体金溶液的准备 合适的合适的ph和离子强度和离子强度 (三三)标记抗体蛋白最适用量的确定标记抗体蛋白最适用量的确定以最低稳定用量的以最低稳定用量的120为标记抗体蛋白的最适用量为标记抗体蛋白的最适用量 (四四)胶体金与抗体蛋白的结合胶体金与抗体蛋白的结合 电磁搅拌、加入稳定剂电磁搅拌、加入稳定剂(五五)胶体金标

8、记抗体蛋白的纯化胶体金标记抗体蛋白的纯化 离心法和凝胶过滤法离心法和凝胶过滤法 15四、免疫胶体金分析技术任床边检测中的应用四、免疫胶体金分析技术任床边检测中的应用16第二节干化学分析技术第二节干化学分析技术 17l定义：定义：干化学分析干化学分析(dry chemical (dry chemical assavassav) ) 指建立在某些特殊固相支持物上的检测分指建立在某些特殊固相支持物上的检测分析技术，通常将测定某些项目所必需的全部或析技术，通常将测定某些项目所必需的全部或部分试剂固定在具有一定结构的载体上，部分试剂固定在具有一定结构的载体上，通过通过滴加液态样品溶解载体上的试剂滴加液态

9、样品溶解载体上的试剂，并与样品中，并与样品中的待测成分发生反应，在支持物的局部区域产的待测成分发生反应，在支持物的局部区域产生信号变化，再通过检测以获取待测物的浓度。生信号变化，再通过检测以获取待测物的浓度。 18l检测原理：检测原理：反射光度法反射光度法差示电位法差示电位法l特特 点：点： 速度快、检测灵敏度和准确度较高速度快、检测灵敏度和准确度较高可采用仪器进行检测可采用仪器进行检测19一、基本原理一、基本原理( (一一) )双层膜法：双层膜法：特点：特点：u通过反射光度计测定其颜色改变，从而计算待测物质的含量通过反射光度计测定其颜色改变，从而计算待测物质的含量 u双层膜法不能排除样品中某

10、些物质对吸光度的干扰双层膜法不能排除样品中某些物质对吸光度的干扰u主要应用于尿生化分析主要应用于尿生化分析 试剂试剂20( (二二) )多层膜法多层膜法采用反射光度法采用反射光度法 差示电位法差示电位法u检测原理：检测原理：u特点：特点：集光学、现代化学、化学计量学、酶学工程和计算机技术集光学、现代化学、化学计量学、酶学工程和计算机技术于一体于一体定量的准确度和精密度已经达到了常规湿化学的水平，部定量的准确度和精密度已经达到了常规湿化学的水平，部分甚至达到了参考方法的水平分甚至达到了参考方法的水平211 1基于反射光度法的多层膜基于反射光度法的多层膜 22分布层分布层 光漫射层光漫射层 辅助试

11、剂层辅助试剂层 试剂层试剂层 又称渗透扩散层，由高密度多孔聚合物组成，其特点是能又称渗透扩散层，由高密度多孔聚合物组成，其特点是能够快速吸附液体样品并使之迅速、均匀地渗透，并可阻止够快速吸附液体样品并使之迅速、均匀地渗透，并可阻止一些颗粒成分一些颗粒成分(如血细胞、结晶如血细胞、结晶)和大分子和大分子(如蛋白质如蛋白质)向下向下渗透，因此能透过分布层的基本上是无蛋白滤液渗透，因此能透过分布层的基本上是无蛋白滤液 为白色不透明层，由反射系数为白色不透明层，由反射系数95的物质如的物质如baso4，或，或tio2构成。光漫射层的特点是可以隔离分布层中有色物构成。光漫射层的特点是可以隔离分布层中有色

12、物质的干扰，使反射光不受影响；同时因其具有高反射系数，质的干扰，使反射光不受影响；同时因其具有高反射系数，可为下面的试剂层提供反射背景，使入射在光漫射层上的可为下面的试剂层提供反射背景，使入射在光漫射层上的光最大限度地反射回去，以减小因光吸收所引起的测量误光最大限度地反射回去，以减小因光吸收所引起的测量误差差 主要作用是去除血清中的内源性干扰物，从而使检测结果主要作用是去除血清中的内源性干扰物，从而使检测结果更加准确，还可运用亲和过滤、凝胶过滤、免疫沉淀等方更加准确，还可运用亲和过滤、凝胶过滤、免疫沉淀等方法，有选择地把待测物和干扰物分离。是多层膜法中保证法，有选择地把待测物和干扰物分离。是多

13、层膜法中保证测定结果更准确、误差更小的一个非常重要的结构测定结果更准确、误差更小的一个非常重要的结构又称为指示剂层或反应层，由亲水性多聚物构成，该层固又称为指示剂层或反应层，由亲水性多聚物构成，该层固定了项目检测时所需的部分或全部试剂。用于检测不同项定了项目检测时所需的部分或全部试剂。用于检测不同项目的干片，其固定的试剂成分不同目的干片，其固定的试剂成分不同 起支持作用，为光学透明的塑料基片，允许入射光和反射起支持作用，为光学透明的塑料基片，允许入射光和反射光完全透过光完全透过 232 2基于差示电位法的多层膜基于差示电位法的多层膜 结构：两个结构：两个ise，都有，都有5层膜结构层膜结构24

14、 测定时取一定量的血测定时取一定量的血清加入到样品电极的加样清加入到样品电极的加样槽中，再取等量的参比液槽中，再取等量的参比液加人参比电极的加样槽中，加人参比电极的加样槽中，通过电位计来测定这两个通过电位计来测定这两个电极的差示电位。若样品电极的差示电位。若样品与参比液中的离子活度相与参比液中的离子活度相同，则差示电位为零；若同，则差示电位为零；若离子活度不同，则可根据离子活度不同，则可根据差示电位的值计算待测离差示电位的值计算待测离子的活度。子的活度。 测定方法：测定方法：特点：特点：干片是一次性使用的，消除了电极老化和干片是一次性使用的，消除了电极老化和“蛋蛋白质中毒白质中毒”的缺点，可用于干化学自动生化分析仪。的缺点，可用于干化学自动生化分析仪。25二、干化学分析仪二、干化学分析仪干式尿液分析仪干式尿液分析仪 便携式血糖分析仪便携式血糖分析仪 26三、注意事项三、注意事项试剂条应放置在允许的温度条件下保存。试剂条应放置在允许的温度条件下保存。注意有效期，并在效期内用质控物进行监控。注意