血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书

1、血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书（ELISA）1. 原 理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP ）及TMB等其它试剂，采用夹心 法原理检测人血清（ 或血浆）中乙肝表面抗体（ HBsAb）。2. 标 本 采 集2.1 采 集 前 病 人 准 备 ： 受 检 者 应 空 腹2.2 标 本 种 类 ： 血 清 或 血 浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml （可用EDTA抗凝）, 室温放置不超过 4小时， 分离血清备用。3. 标本储存：2-8C保存不应超过1周，-20C不应 超过3个月，-70C长期保存，应避免反复冻融。4. 标 本 运 输 ： 密 封 ，

2、室 温 运 输 。5. 标 本 拒 收 标 准 ： 污 染 、 标 本 量 不 足 、 严 重 溶 血 或 脂血标本不宜作此项检测。6. 试 剂6.1 试 剂 名 称 ： 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 体 诊 断 试 剂 盒6.2 试剂生产厂家：英 科新创（厦门）科 技有限公司。6.3 包 装 规 格 ： 96Test/Kit6.4 试 剂 盒 组 成 ：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清,HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A,底物B， 终止液， 封口膜， 自封袋。6.5试剂储存条件及有效期：2- 8C避光保存，有效期9个月。7.仪器设备7.1仪器名称：

3、自 动酶标仪7.2仪器厂家：KHB7.3仪器型号：ST3608. 操 作 步 骤8.1 平 衡 ： 将 试 剂 盒 各 组 分 取 出 ， 平 衡 至 室 温（18- 25C ）,微孔板开圭寸后，余者及时以自圭寸袋圭寸存。8.2 配液： 浓缩洗涤液配制前充分摇匀（ 如有晶体应 充 分 溶 解 ），浓 缩 洗 涤 液 和 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 按 1： 19 稀释后使用。8.3 编 号 ： 将 微 孔 条 固 定 于 支 架 ， 按 序 编 号 。8.4 加 样 ： 分 别 用 加 样 器 在 对 照 孔 中 加 入 阴 、 阳 性 对 照 血 清 各 50 l 于 相 应 孔 中 。

4、8.5 加酶：分 别在每孔中加入酶标记抗体 50 l ，轻 拍 混匀。8.6 温育：置37C温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7 洗涤： 用洗涤液充分洗涤 5 次， 洗涤完扣干（每 次 应 保 持 30-60 秒 的 浸 泡 时 间 ）。8.8 显色：每孔加入底物A、B各50 I ,轻拍混匀， 置37C暗处15分钟。8.9 终止： 每孔加终止液 50 I ， 混匀 。8.10 测 定 ： 用 酶 标 仪 单 波 长 450nm 或 双 波 长450/630nm 测定各孔0D值（用单波长测定时需设空白 对照一孔， 30 分钟内完成测定， 并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临 界 值 （

5、C.O. ） 的 计 算 ： 临 界 值 =阴 性 对 照 孔 OD 值NX 2.1 ,阴性对照0D均值大于0.1时应重新试验， 小 于 0.05 时 以 0.05 计 算 。9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性 样品OD值S/C.OvI者为HbsAb阴性10. 质 量 控 制每次试 验 用含 30mIu/mlHBsAb 的质控血清同步检 测， S/CO 值 应在控制范围内；如 失控，则 要检查试 剂 效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否 正确， 直至重 新 试 验 使其在控。11. 参考范围阴 性 或 阳 性12. 临 床 意 义HBsAb阳性表明存

6、在HBV的保护性抗体。13. 操 作 性 能 ： 灵 敏 度 高 ， 特 异 性 好 。14. 方 法 局 限 性 ：样 品 显 色 深 浅 与 样 品 中 抗 体 的 含 量 没有一定正相关。15. 注 意 事 项15.1 每 板 建 议 设 阴 阳 性 对 照 血 清 各 两 孔 ，设 空 白 对 照 时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗 涤 时 各 孔 均 须 加 满 ，防 止 孔 口 内 有 游 离 酶 未 能 洗净。15.3 加 试 剂 前 应 将 试 剂 瓶 翻 转 数 次 ，使 液 体 混 匀 。如 果滴加，滴加前应弃去 12 滴。滴加时瓶身应保持垂 直，以使滴量

7、准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所 有 样 品 都 应 按 传 染 源 处 理 。15.5 封 口 膜 使 用 说 明15.5.1 微 孔 板 拆 封 后 ， 在 取 出 当 天 所 需 的 微 孔 条 后 ， 其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时， 注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光 性。15.5.2 微 孔 板 温 育 时 ，以 封口 膜 覆 盖 孔 口 ，可 避 免 其 他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不 同 品 名 、不 同 批 号 的试 剂 不 可 混 用 ，以 免 产 生错误结果16. 当检测系统（仪器）不 能工作时，所 采取的补救 措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳 对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正 常后复查。17. 参考文献 ：中华人民共