利用峰面积分析混合DNA样品

1、利用峰面积分析混合DNA羊品【关键词】阴道混合物，强奸，dna【】d919. 2； q751 b【】1007-9297(20xx)01 005103在法医dna检验过程中，经常会遇到多个体的混合羊本，如受害人和 嫌疑人的混合羊品，几个嫌疑人的混合羊品。荧光 标记自动分析str 系统，不仅能根据位点等位基因的个数判断羊品是否为混合羊品，而 且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光总强度)确定混合羊品中各组分 的混合比例，推断混合羊品中各 组分的基因分型_1j。gill等建立了利用峰面积分析混合样品的方法_2 o本文利用该法对一宗案件中的混合羊品进行了分析，推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型材料

2、和方法20xx年于中山某地发生一宗强奸案，送检材料为事主血纱，嫌疑人1血纱，嫌疑人2血纱，以及在嫌疑人2住处提取的一根带毛囊的阴毛（上沾有少量分泌液），分别编为广4号样品。按 chelex 100 法 提取 dna,采用 ampfi str identifiler复合扩增试剂盒（美国abi公司）同时扩增d8sl179v d21sll、d7s820、（f1p0 v 193S135& tho1 、 d13s317v d16s539、 d2s1338、d19s433、vwa、tpox、d18s51 x d5s818、fga 等 1 5 个位点和性别位点amelogenin ,扩增产物在abi

3、310遗传分析仪上进行电泳 分离，genescan30软件分析结果，genotypern 2. 5软件进行因分型结果、样品分型样品分型结果见表1。表1样品分型结果二、结果分析结果分析方法参照文献2（一）确定是否有混合样品1 根据谱带数目。正常情况下进行常染色体str分型时， 纯合子应检出一条带，杂合子检出2条带，混合样品会出现谱带数目增多。4号样品在d8sl179等3个位点检出4个等位基因（表现为4条谱带），在d21s11等6个位点检出3条谱带，提示该样品为混合样品。2 .等位基因峰面积的不对称。理论上对于杂合子来说，两个等位基因的峰面积应大致相等，比例接近于1;而混合样品由于等位基因的叠加，

4、可能会出现不正常的杂合子现象，两个等位 基因 的峰面积差异会增大。表2列出了混合比例为1： 10、1： 1、10 : 1时出现2个等位基因时峰面积的比例。4号样品在th01、 d13s317x tpoXx d18s51、amelogene 等位点均检出 2 条带，类似杂合子，但2条带的峰面积明显不平衡（见表3）,同样提示4号样本为混合样本，且为男女混合。（-）确定混合样品中供体的数目样品4所有位点出现的等位基因数最多为4个，提示供体数为2个。（三）确定混合样品中各供体的基因型组合对于杂合子来说，两个等 位基因的峰面积应大致相等，比例接近于1o基于此原理，分析者可 以通过观察到的峰面积来推断可能

5、的基因型组合和各组分的比例。对 确定是二供体组成的混合样本来说，分型结果可以表现为一带型、二 带型' 三带型或四带型。除一带型外，其余各种表现均可提供基因型 组合的信息。其中.四带型由于直观地表现出2个供体的基因型，所以最易于通过其推断2个供体的基因型组合及其比例。假设某一位点出现的4个等位基因依片段由小到大的顺序定为a、b、c、d,观察到的面积分别为paa、pab、pac、pad,定mx为所有位点都接近相等，然后给出一个估计的混合比例(mx)，如果解释正确的话，观察值和期望值应接近，这对任意基因型组 合可用峰面积的剩余值eq来检验，峰面积的剩余值eq=(T (pa观察值一 pa期望值)，峰面积的剩余值越低，该基因型组合的可能性越高。以4号样品的d8sl179位点为例，混合物中检出10(a)、14(b)、15(c)、16(d),据eq值可推断混合比例(mx)bc /ad=O. 62,相反混合比例(mx)ad/bc =0 . 38,其他的基因型组合（如ab, cd）不可能存在，因为eq不可能接近零表4列出了对出现4个等位基因的位点的分析，在列出某个位点的所有可