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文档简介
1、测序原理及流程v 原理v 流程图原理i.杂交杂交：利用碱基互补原理，通过退火将anchor结合于测序样品末端的已知序列；ii. 连接：连接：随后在t4 ligase的作用下，使与待测位点碱基互补的荧光探针与anchor连接并与样品互补结合；iii. 收集信号：收集信号：收集与样品结合后的荧光探针在特定激发光下发出的荧光信号，由荧光信号的种类确定样品上所测位点的碱基种类。beads5dna3beads5dna3anchoranchorprobebeads5dna3anchor probe信号收集确定碱基荧光信号beads5dna3anchor probenaohcutbeads5dna3bead
2、s5dna3new anchornext cycle流程图杂交杂交退火将anchor结合于样品末端连接连接t4 ligase的作用使与待测位点碱基互补的荧光探针与anchor连接并与样品互补结合信号收集信号收集收集与样品结合后探针在特定激发光下发出的荧光信号杂交2sspe28， wash60，30sload anchor42，2min结合结合连接连接25连接reaction buffer25， washload：t4 ligaseprobereaction buffer30， 10minwashing buffer2sspe30， wash采图采图信号收集信号收集采图采图完成后完成后25load：1 x naohload：2sspe25洗脱结束，洗脱结束，进入下进入下cycle 测序过程的总结测序过程的总结1、3步骤步骤：杂交；连接；信号收集。2、常用酶、常用酶：t4连接酶（30）。3、2种滤光片种滤光片：绿色滤光片cy3；黄色滤光片tr。4、4种反应种反应buffer：2sspe；reaction buffer；1 x buffer n（ naoh）；washing buffer5、1base，2cyc
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