维生素C含量测定方法综述（课堂PPT）

1、125维生素维生素C的结构式的结构式 维生素C：六碳的多羟基内酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH682,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量v其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。v维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素CCCOHOH 原理原理2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。方法方法取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀；精

2、密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫瑰红色,并持续5s不褪；空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。计算： (V-V0) F T WW 标示量 标示量%=反应摩尔比反应摩尔比10011CCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚（还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型） + + = v2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝

3、色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。12碘量法o原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCoEC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 o终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点o反应式： 13碘量法n碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定n反应式：n计算式：nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%222234622IS OIS O14碘量法 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 原因: (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚 (2)I2在碱性介质中会发生歧化反应

4、加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差16电位滴定法原理(具体来说:) 随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。17 电位滴定法u右图：电位滴定法基本仪器装置n计算式：(与碘量法相同)nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%n优点：n解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题182 2 分光光度测定维生素分光光度测定维生素C C 2.1 22.1 2，4 4一二硝基苯肼分光光度一二硝基苯肼分

5、光光度法法 2.2 2.2 钼蓝比色法钼蓝比色法 2.3 2.3 其他方法其他方法192，4一二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 l原理：l维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸l反应式： 202，4一二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸 二酮古洛糖酸HHHHHH22分光光度法o样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理o500nm处测吸光度o下图：721型分光光度计25 差示旋光法差示旋光法原理原理方法方法结果结果维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变差示旋光法消除辅料的影响，直接

6、测出该制剂的含量讨论讨论与与26 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT1）标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。TEXT原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与2）比旋光度与溶液pH值的关系量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与28差示旋光法差示旋光法

7、选定选定pH为为2.2和和6.229 差示旋光法差示旋光法2）差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。文献结果：线性方程为a=0 205*C+ 005，r=09964原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与30 差示旋光法差示旋光法3）辅料干扰试验取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐

8、缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与31 差示旋光法差示旋光法4）稳定性试验同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果：差示旋光度基本不变原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与32 差示旋光法差示旋光法5）回收率试验精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。文献结果：平均回收率为97.8，变异系数

9、cv为1.03原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与33 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT6）样品测定取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。TEXT原理原理讨论讨论方法方法结果结果与与方法方法TEXT1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液时使用新沸冷却水,同时加人EDTA作为稳定剂；2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶解，必须过滤除去，然后测定滤液的差示旋光度。TEXT原理原理讨论讨论方法方法结果结果与与353 高效液相色谱法测定维生

10、素Cn3.1 HYPERSILC83.1 HYPERSILC8色谱柱色谱柱法法n3.2 VenusilXBPC183.2 VenusilXBPC18柱法柱法n3.3 3.3 其他方法其他方法 系统采用VenusilXBPC18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1 mlmin，检测波长240 nm；维生素C浓度在01-10 mgmL范围内有良好的线性关系。该方法回收率9989，标准偏差091，操作简便、灵敏、可靠 39薄层扫描法薄层扫描法操作方法与结果操作方法与结果（1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠 (DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙

11、醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。 40薄层扫描法薄层扫描法（2）缓冲溶液的配制 称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M 氢氧化钠 420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整 pH值，保存于冰箱中。 41薄层扫描法薄层扫描法3）扫描条件确定 在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描 ，维 生素 C在 290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择1=290nm， 2=420nm双波长反射式锯

12、齿扫描。原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与424）线性实验）线性实验 4.1）对照品溶液的配制）对照品溶液的配制 精密称取维生素精密称取维生素C标准品标准品100mg，用缓冲溶液配，用缓冲溶液配成成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液标准溶液1、2、3、4、5ml，分，分别置于别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定）测定 用用5 l定量毛细管，分别吸取上述溶液各定量毛细管，分别吸取上述溶液各5 l，点于试纸上，点于试纸上 。点样后晾干，并将试纸点样后晾干，并将试纸 固定在固定在20cm20cm玻璃板上，

13、放入薄层扫描仪。玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定测定A 的积分值的积分值 (峰面积峰面积)作为纵坐标作为纵坐标Y ，点样量为横，点样量为横 坐标坐标X，得一直线，得一直线方程方程 Y=15692X+130225，r= 09991 原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与方法方法TEXT5）样品的含量测定 取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 ，然后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。TEXT原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与