2013实验11 植物的组织培养

1、2021/6/161实验实验11 植物的组织培养植物的组织培养2021/6/162大多绿色开花植物靠种子繁殖（有性繁殖），大多绿色开花植物靠种子繁殖（有性繁殖），不用种子繁殖（不用种子繁殖（无性繁殖无性繁殖）的方法有：）的方法有： 组织培养组织培养营养繁殖营养繁殖扦插扦插嫁接嫁接压条压条 无性繁殖无性繁殖2021/6/163组织培养就是取一部组织培养就是取一部分植物组织（分植物组织（外植体外植体），），如叶、芽、茎、根、花瓣如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在或花粉等，在无菌无菌条件下条件下接种在三角瓶中的接种在三角瓶中的琼脂培琼脂培养基养基上，给予一定的上，给予一定的温度温度和光照和光照，使之

2、产生，使之产生愈伤组愈伤组织织，或进而，或进而生根发芽生根发芽。一、组织培养概述一、组织培养概述1.概念概念2021/6/1642、植物组织培养的原理是什么？、植物组织培养的原理是什么？ 植物细胞具有植物细胞具有全能性全能性，即生物体的细胞，具，即生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。有使后代细胞形成完整个体的能力。3.植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程:离体离体的植物的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化脱分化愈愈伤伤组组织织再分化再分化根根芽芽植植物物体体生长发育生长发育2021/6/165植物组织培养过程示意图植物组织培养过程示意图 烟草植株烟草植株根细胞根细胞

3、培养培养形成愈形成愈伤组织伤组织发育成发育成幼胚幼胚长成长成幼苗幼苗成熟植株成熟植株2021/6/1664.植物组织培养条件植物组织培养条件: 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。、适时光照等。细胞分裂素多，生长素少细胞分裂素多，生长素少诱导芽的生成诱导芽的生成细胞分裂素少，生长素多细胞分裂素少，生长素多诱导根的生成诱导根的生成细胞分裂素适中，生长素少细胞分裂素适中，生长素少愈伤组织只生长不分化愈伤组织只生长不分化细胞分裂素生长素比例合适细胞分裂素生长素比例合适诱导根芽的分化诱导根芽的分化20

4、21/6/167二、实验二、实验培养基配制培养基配制外植体的选取外植体的选取消毒接种消毒接种培养培养移栽和栽培等。移栽和栽培等。2021/6/1681、实验材料、实验材料（1）MS培养基：培养基：大量元素：大量元素：C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg微量元素：微量元素：Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖蔗糖等等（3）发）发芽芽培养基：培养基： MS培养基培养基+BA+NAA+琼脂琼脂+蒸馏水蒸馏水（2）萘乙酸）萘乙酸NAA、苄基腺嘌呤、苄基腺嘌呤BA（4）生）生根根培养基：培养基： MS培养基培养

5、基+NAA+琼脂琼脂+蒸馏水蒸馏水2021/6/1692、步骤步骤1.取外植体取外植体超净台上将超净台上将无菌无菌幼苗幼苗(无菌水冲洗无菌水冲洗)切段，每段切段，每段至少至少1张叶片张叶片2.生芽培养生芽培养生芽培养基中，放入生芽培养基中，放入1-3段切段（茎一部分插段切段（茎一部分插入培养基），盖上封口膜。日光灯下保持入培养基），盖上封口膜。日光灯下保持1825的温度培养，每天光照不少于的温度培养，每天光照不少于14.5h。3.生根培养生根培养23周后，将丛状苗在无菌条件下转入生根周后，将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。培养基中，在上述条件下继续培养。2021/6/

6、16105.定植定植将苗转移到土中培养。将苗转移到土中培养。4.适应锻炼适应锻炼将苗转移至草炭土或蛭石中继续生长，用玻将苗转移至草炭土或蛭石中继续生长，用玻璃罩或塑料布保持璃罩或塑料布保持80以上的湿度，以上的湿度，23天天后打开减低湿度进行锻炼，直到将罩全部打后打开减低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。开处于自然湿度下为止。2021/6/1611幼苗幼苗外植体外植体丛芽丛芽生根生根锻苗锻苗消毒消毒 接种接种愈伤愈伤组织组织胚状体胚状体定植定植 植株植株生根培养生根培养生芽培养生芽培养2021/6/16121.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使不同植物、不同组织的生根和生

7、芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？的天然激素，为什么？不相同不相同天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，效果显著。效果显著。课后题课后题2021/6/1613微生物培养基以有机营养为主。与微生物的微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，培养基则需提供大量

8、无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。量元素两大类。4. 同同LB培养基相比，培养基相比，MS培养基的配方有哪些明培养基的配方有哪些明显的不同？显的不同？3.如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应采取什么措施保证样本不被污染应采取什么措施保证样本不被污染?（1）操作环境清洁（）操作环境清洁（2）植物样本的洁净）植物样本的洁净（3）操作敏捷迅速）操作敏捷迅速2021/6/16142021/6/1615 脱分化：脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从将来自已分化组织的已停止分

9、裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。分裂活性。 再分化再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。可有转变为各种不同细胞类型的能力。愈伤组织愈伤组织2021/6/16161、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径2021/6/1617污染的预防措施污染的预防措施（一）防止外植体带菌（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌

10、（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁（四）保证接种与培养环境清洁2021/6/16182021/6/1619思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？2021/6/16201、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？2021/6/1621