第二章_固相萃取技术 (1)

1、第二章第二章 固相萃取固相萃取概概 述述固相萃取的基本原理、分离模式及操固相萃取的基本原理、分离模式及操作步骤作步骤固相萃取方法的建立及应用固相萃取方法的建立及应用 固相萃取的操作步骤固相萃取的操作步骤固相萃取的装置固相萃取的装置所谓萃取法所谓萃取法 , ,就是从样品中提取组分就是从样品中提取组分 , ,传统的方传统的方法是液法是液- -液萃取法液萃取法 ( LLE) , ( LLE) ,即用液体作为提取剂即用液体作为提取剂。固相萃取（固相萃取（Solid Phase Extraction, SPESolid Phase Extraction, SPE） 是是1919世纪世纪7070年代后期发

2、展起来的样品前处理技术。年代后期发展起来的样品前处理技术。与液液萃取相比，固相萃取具有如下优点：与液液萃取相比，固相萃取具有如下优点：回收率和富集倍数高有机溶剂消耗量低，可回收率和富集倍数高有机溶剂消耗量低，可减少对环境的污染采用高效、高选择性的吸附减少对环境的污染采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效的将分析物与干扰组分分离无相剂，能更有效的将分析物与干扰组分分离无相分离操作过程，容易收集分析物能处理小体积分离操作过程，容易收集分析物能处理小体积试样操作简便、快速，费用低，易于实现自动试样操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器连用。化及与其他分析仪器连用。Survey resp

3、onse %固相萃取（固相萃取（SPESPE）是利用固体吸附剂将液体样品中）是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。先使液体样品通过一装有吸附剂（固相）的目的。先使液体样品通过一装有吸附剂（固相）小柱，保留其中某些组分，再选用适当的溶剂冲小柱，保留其中某些组分，再选用适当的溶剂冲洗杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到快洗杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。速分离净化与浓缩的目的。一个完整的固相萃取步骤包

4、括固相萃取柱的一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处预处理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四个步骤。个步骤。将样品倒入活化后的SPE 小柱，然后利用加压、抽真空或离心的方法使样品进入吸附剂。采取手动或泵以正压推动或负压抽吸方式，使液体样品以适当流速通过固相萃取柱，此时，样品中的目标萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。（1）固相萃取柱商品化的固相萃取柱（cartridge）外形类似于一个注射器针筒。还可自行填装固相萃取柱。（2）固相萃取过滤装置固相萃取加样过程中，需通过适当的方法使样品溶液通过固相萃取柱，使待分析物吸附在填料上。洗脱过程中，同样需要

5、使溶剂通过固相萃取住，使待分析物解析。以上步骤需借助于固相萃取过滤装置完成，采用柱前加压或柱后加负压抽吸的方式实现。a.固相萃取过滤-加压操作固相萃取加压操作可通过在液体样品储液槽上方用高压空气或氮气施加一定压力来实现的。如果样品较少，可以用手动加压的方式实现。b. 固相萃取过滤-负压抽吸负压抽吸是在固相萃取柱的出口用注射器手动抽负压，或与水泵或真空泵相连，用泵施加适当真空度，从而使样品溶液抽吸通过固相萃取柱。最常用的是用抽滤瓶实现负压抽吸。也可以采用固相萃取过滤装置同时处理多个样品也可以采用固相萃取过滤装置同时处理多个样品c. 固相萃取过滤-离心法全自动固相萃取仪全自动固全自动固相萃取仪相萃

6、取仪能自动完能自动完成固相萃成固相萃取的全部取的全部步骤步骤固相萃取联用装置键和硅胶吸附剂键和硅胶吸附剂常用的键合硅胶常用的键合硅胶吸附剂表面积在吸附剂表面积在5050500m500m2 2/g /g 之间，之间，孔径为孔径为5 550nm 50nm ，粒径大于粒径大于40m 40m 。一般应选择粒径一般应选择粒径小、比表面积大小、比表面积大的吸附剂，以获的吸附剂，以获得更好的萃取效得更好的萃取效果。但要注意若果。但要注意若粒径过细，萃取粒径过细，萃取时阻力增加，萃时阻力增加，萃取速度下降。取速度下降。应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。

7、2. 2.固相萃取溶剂的选择固相萃取溶剂的选择在固相萃取固定相活化、上样富集、淋洗杂质、分析物洗脱过程中，都涉及到溶剂选择问题。a. a.固定相活化溶剂的选择固定相活化溶剂的选择一般使用两种活化溶剂。第一种溶剂（初始溶剂）用于净化固定相，对于常用的C18键和硅胶固定相，可用甲醇有效地除去其所含杂质。第二种溶剂（终溶剂）使固定相溶剂化，以便样品中的分析物能更好的保留。b. b.上样萃取溶剂的选择上样萃取溶剂的选择为了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上为了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上样萃取时应采用尽可能弱得溶剂。样萃取时应采用尽可能弱得溶剂。c. c.淋洗溶剂的选择淋洗溶剂的选择淋洗溶剂用于洗去吸附在固定相上的干扰组分。淋洗溶剂用于洗去吸附在固定相上的干扰组分。淋洗溶剂的强度选择非常重要，其强度不能太淋洗溶剂的强度选择非常重要，其强度不能太高，也不能太低，应大于或等于上样溶剂，又高，也不能太低，应大于或等于上样溶剂，又小于洗脱溶剂。淋洗溶剂的选择原则：尽可能小于洗脱溶剂。淋洗溶剂的选择原则：尽可能将干扰组分从固定相上洗脱完全，但又不能洗将干扰组分从固定相上洗脱完全，但又不能洗脱任何分析物。脱任何分析物。1 1）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外