活性氧（ROS）介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究ppt课件

1、活性氧活性氧ROSROS介导的乙醛氧化损介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研讨伤心肌致细胞凋亡的初步研讨上海中山医院上海中山医院心血管病研讨所心血管病研讨所 研讨背景研讨背景 酒精性心肌病迅速蔓延酒精性心肌病迅速蔓延在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要缘由在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要缘由1) 1) 据统计，成年人据统计，成年人2/32/3不同程度饮酒不同程度饮酒2) 2) 酒精性心肌病酒精性心肌病,1/3,1/3以上与酒精有关以上与酒精有关在中国，随着生活程度不断提高，酒精性代谢相关疾病增多在中国，随着生活程度不断提高，酒精性代谢相关疾病增多乙醇？乙醛？损伤

2、心肌乙醇？乙醛？损伤心肌 乙醇，乙醛诱导心肌细胞比较实验 1养化应激程度 2细胞凋亡程度 转基因过表达ADH或ALDH比较实验 1过表达ADH加剧心肌收缩功能妨碍 2过表达ALDH减少心肌细胞凋亡 乙醇 乙醛 乙酸ADHALDH乙醛经过何种途径损伤心肌？乙醛经过何种途径损伤心肌？心肌肥大、凋亡致功能改动心肌肥大、凋亡致功能改动遗传要素病毒感染DNA突变免疫改动T细胞杀伤心肌炎ROS途经导致静脉内皮细胞凋亡途经导致静脉内皮细胞凋亡J. Biol. Chem. 279:11244. 心肌细胞胞浆特异表达 -MHC, 200 体外心肌细胞培育体外心肌细胞培育ROSROS随乙醛诱导浓度添加的变化随乙醛

3、诱导浓度添加的变化umol/LROSROS随乙醛诱导时间添加的变化随乙醛诱导时间添加的变化h乙醛诱导心肌细胞乙醛诱导心肌细胞Bcl-2Bcl-2蛋白表达蛋白表达0 2 6 12 18 24 48 h不同条件诱导下不同条件诱导下ROSROS的变化的变化00.20.40.60.81对照组缺氧组过氧化氢组乙醛1 0 0umol/L组M1%/gated per100cells乙醛诱导细胞培液上清乙醛诱导细胞培液上清SODSOD活性活性h乙醛诱导心肌细胞实验结论乙醛诱导心肌细胞实验结论 ROS介导的氧化损伤是乙醛诱导心肌细胞凋亡的主要缘由 乙醛较H2O2诱导产生的ROS增量程度低，提示乙醛对心肌作用为慢

4、性氧化损伤 乙醛介导的氧化损伤能够经线粒体途径发扬作用 降低细胞内氧化应激程度可有效改善心肌缺氧缺血形状， 减少心肌细胞凋亡 心肌凋亡心肌凋亡ROS心力衰竭心力衰竭功能妨碍功能妨碍扩张型心肌病扩张型心肌病？蛋白质组学研讨意义蛋白质组学研讨意义 挑选出差别蛋白 研讨与疾病的相关性SDSD鼠心力衰竭模型中鼠心力衰竭模型中ALDH2ALDH2明显下调明显下调 染色体定位：12q24.2 蛋白定位：线粒体内膜醛脱氢酶醛脱氢酶 2 2 aldehyde dehydrogenase(ALDH2)aldehyde dehydrogenase(ALDH2)线粒体功能线粒体功能 ROS产生主要场所 引起氧化损伤

5、 ATP能量来源 抗氧化酶系 凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl家族线粒体功能线粒体功能ALDH2的mRNA 转录程度表达 Normal TransplantGAPDHALDH2心肌组织心肌组织ALDH2ALDH2活性测定结果活性测定结果RT-PCRWestern Blot在在SD鼠心衰模型中鼠心衰模型中DDDDReal time-PCR54KD36KDALDH2/pAd-HM4ALDH2/pAd-HM4质粒构建质粒构建CAG poly AKpnIApaIXhoI (2)SalI (2)BamHI(2)XbaI (2)SalI (2)PstI (2)?SphIHindIII (3)total 35.3k

6、b1720bp730bp30.3kbAmprXbaI 2)ALDH21954bpEcoRPstBglBglHind0.8kb2.5kbAdeno virus genomeE3(-)(28133-30818)Adeno virus genomeE1(-)(342-3523)ITRITRPacIPacI技术道路技术道路细胞培液上清细胞培液上清DCM组组转转ALDH2*1形形 DNA ladder态态 TUNEL基基 ALDH2因因 ADH-1蛋蛋 Bcl-2家族家族白白 caspase移植心脏组织移植心脏组织 SD鼠心肌细胞鼠心肌细胞 活活 ALDH2性性 ROS对照组对照组对照组对照组乙醛干涉乙醛干涉转转ALD